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微小RNA-195调控转化生长因子-β/Smad信号通路影响肝纤维化机制研究
目的 研究微小RNA-195(miR-195)调节转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化与Smad7表达的关系.方法 体外培养HSC-T6,用5 ng·mL-1 TGF-β1作为刺激因子,模拟大鼠肝纤维化模型.将细胞分为6组:对照组、模型组(TGF-β1组)、miR-195 mimic实验组、miR-195 mimic NC实验组、miR-195 inhibitor实验组及miR-195 inhibitor NC实验组.分别用5 ng·mL-1 TGF-β1处理HSC-T6细胞24,48,72 h后,以实时荧光定量PCR法检测miR-195、Smad7及α-SMA mRNA表达,以免疫印迹法检测Smad7蛋白表达.结果 在TGF-β1诱导下,miR-195的表达随时间逐渐升高、α-SMA表达逐步上调而Smad7表达呈降低趋势,差异均有统计学意义(P＜0.01,P＜0.01;P＜0.05).与模型组比较,miR-195 mimic能促进TGF-β1诱导的HSC-T6活化,升高miR-195、α-SMA mRNA表达而降低Smad7mRNA和蛋白表达,差异均有统计学意义(均P＜0.01).同时,miR-195inhibitor可逆转TGF-β1诱导的HSC-T6活化,降低miR-195、α-SMA mRNA表达而升高Smad7 mRNA和蛋白表达,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 miR-195促进TGF-β1诱导的HSC-T6活化与Smad7表达相关.
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miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究
目的：研究微小RNA（miRNA）-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637（miRNA-195组），同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝（MTT）法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel 肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖，miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力，miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。
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外周血微小RNA-195在精神分裂症患者中的表达差异及临床疗效研究
目的:探讨外周血微小RNA(miR-195)在精神分裂症患者(SZ组)中的表达及对临床疗效的影响. 方法:46例首发或复发的SZ患者和49例正常对照(HC组),SZ组接受8周抗精神病药物治疗,治疗前后采用实时荧光定量PCR技术测定外周血PBMC中miR-195的相对表达量(RQ),使用PAN-SS量表评疗效并与HC组比较. 结果:SZ组miR-195表达量高于HC组(Z=2.767,P=0.003),SZ组在治疗8周后,miR-195表达量变化差异无统计学意义(Z= -0.580,P=0.562).miR-195 ΔRQ值与ΔPANSS、ΔSDSS及ΔCGI分值无相关(r=0.106,P=0.564;r=0.253,P=0.162;r=0.201,P=0.270).结论:miR-195与精神分裂症的发生关系密切,但对预测疾病转归及预后有待进一步明确.
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增生型糖尿病视网膜病变患眼玻璃体、增生膜组织miR-195表达及意义
目的 探讨miR-195在增生型糖尿病视网膜病变(PDR)发生、发展中的作用及机制.方法 选取PDR患者56例(观察组)、特发性黄斑裂孔患者30例(对照组),均为单侧发病.两组均接受常规玻璃体切割术,观察组术中采集玻璃体及视网膜前增生膜组织,对照组采集玻璃体及内界膜组织.采用实时荧光定量PCR法检测两组玻璃体和膜组织miR-195和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA相对表达量,Western blotting法检测两组膜组织HMGB1蛋白相对表达量,并分析观察组玻璃体、膜组织中miR-195与HMGB1 mRNA相对表达量的关系.结果 观察组玻璃体及膜组织miR-195相对表达量均低于对照组,HMGB1 mRNA相对表达量均高于对照组(P均<0.01).观察组膜组织HMGB1蛋白相对表达量为0.94±0.11,对照组为0.58±0.09,两组比较P<0.05.观察组玻璃体及膜组织中miR-195与HMGB1 mRNA相对表达量均呈负相关(r分别为-0.369、-0.508,P均<0.05).结论 PDR患眼玻璃体及增生膜组织中miR-195表达均降低,其可能通过负性调控HMGB1表达而参与PDR的发生、发展.
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微小RNA-195对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞周期和凋亡的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-195在体外对急性淋巴细胞白血病(ALL) Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将Jurkat细胞随机分为两组:阴性对照组:转染miR-mimicsmock;转染组:转染miR-195模拟物(miR-195 mimics).将人工合成的miR-195 mimics转染处于指数增殖期的Jurkat细胞,分别于24、48、72、96h时,运用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-195的表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法检测不同时间点细胞凋亡率;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 (1)阴性对照组和miR-195 mimics转染组Jurkat细胞中miR-195 mRNA表达含量(2-ΔΔCt)在转染24、48、72、96h时分别为(1.242±0.271、1.185±0.452、1.173 ±0.324、1.375±0.582与4.483±1.014、3.422±0.543、3.152±0.784、2.454±0.171),转染组miR-195 mRNA的表达量均显著高于阴性对照组,差异有统计学意义(t=5.348,P=0.006;t=-5.484,P=0.005;t=-4.041,P=0.016;t=-3.081,P=0.037).(2)转染组细胞在转染后的24、48、72、96h4个时间点的增殖抑制率分别为(0.483±0.012)％、(0.674±0.215)％、(1.935±0.046)％和(2.348±0.082)％与阴性对照组(0.545±0.002)％、(1.228±0.057)％、(2.279士0.086)％和(3.086±0.054)％比较在4个时间点差异均有统计学意义(t=8.827,P=0.001;t =4.314,P=0.013;t =6.109,P=0.004;t=13.019,P=0.000),转染组各时间点之间比较差异具有统计学意义(F=169.495,P=0.000).(3)转染组24、48、72、96 h Jurkat细胞早期凋亡率分别为(9.873±0.641)％、(11.825±0.543)％、(20.213±0.984)％和(27.712±0.482)％,随着时间推移,Jurkat细胞凋亡数量逐渐增多(F =423.827,P=0.000).(4)转染miR-195mimic 48 h,转染组和对照组每视野平均侵袭细胞数为(97.0±15.9)个和(259.0±18.9)个,转染组与对照组比较明显降低(=11.361,P=0.000).结论 miR-195可有效抑制Jurkat细胞增殖、诱导其凋亡及抑制细胞的侵袭和转移.
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微小RNA-195对结肠癌细胞奥沙利铂耐药逆转的影响及其机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-195对人结肠癌细胞株LoVo的耐奥沙利铂(L-OHP)株LoVo/L-OHP对L-OHP耐药逆转的影响及其机制.方法 培养L-OHP细胞株LoVo/L-OHP,采用脂质体介导法分别转染miR-195模拟物、miR-195抑制物、miR-阴性对照,以未转染LoVo/L-OHP为空白对照,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组细胞中miR-195基因表达;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞对L-OHP的半抑制率浓度(IC50值);Hoechst33258染色法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术检测各组细胞周期变化;Western blot法检测各组细胞中P-糖蛋白(P-gp)、丝/苏氨酸蛋白激酶(Raf-1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达.结果 miR-195模拟物组的IC50值为(61.7 ±12.8) μg/ml,miR-195抑制物组为(173.4±19.2) μg/ml,miR-阴性对照组为(117.6±16.9)μg/nl,空白对照组为(121.5±18.3)μg/ml,差异均有统计学意义(P＜0.01).Hoechst 33258染色法检测结果显示,miR-195模拟物组的凋亡率为(7.1±1.3)％,miR-195抑制物组为(2.2±0.7)％,miR-阴性对照组为(4.5±1.0)％,空白对照组为(4.3±0.9)％,差异均有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术检测结果显示,miR-195模拟物组细胞G1期比例为(67.7±3.9)％和S期比例为(15.1±2.9)％,miR-195抑制物组分别为(37.4±4.8)％和(47.9±2.5)％,miR-阴性对照组分别为(47.2±5.7)％和(37.5±2.7)％,空白对照组分别为(45.6±5.2)％和(39.5±2.4)％(P＜0.01).Western blot法检测结果显示,miR-195模拟物组P-gp、Raf-1和bcl-2蛋白表达量分别为0.87 ±0.13、0.72 ±0.14和0.67±0.12,miR-195抑制物组分别为1.46 ±0.17、1.39±0.16和1.35±0.14,miR-阴性对照组分别为1.09±0.11、0.98±0.11和1.03±0.15,空白对照组分别为1.07±0.12、1.02 ±0.14和1.06 ±O.13,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 上调miR-195基因可增加LoVo/L-OHP细胞对L-OHP敏感性,可能与负向调控Raf-1信号通路有关.
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胶质瘤患者预后与微小RNA-195表达的关系
目的 探讨微小RNA-195(miRNA,miR-195)表达水平与胶质瘤患者病理分级及预后的相关性.方法 收集手术切除的34例胶质瘤患者的福马林固定石蜡包埋组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测其中miR-195的表达水平,随访患者,并记录放化疗情况和生存期.结果 miR-195表达水平与胶质瘤病理分级呈负相关;miR-195高表达的患者中位生存期为56.53个月,较低表达患者的15.00个月延长41.53个月.miR-195高表达患者的死亡风险是低表达患者的0.363倍.结论 miR-195的表达水平与胶质瘤的病理学分级及患者预后密切相关.
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miR-195对肺癌A549细胞生物学行为的调控作用
目的:探讨微小RNA(miR)-195对肺癌细胞株A549生长、凋亡及迁移等生物学行为的影响和其相关作用机制.方法:对体外培养的A549细胞转染miR-195 mimics,分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力、周期分布及凋亡情况;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测相关调控因子cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb/Rb的蛋白水平;双萤光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因.结果:在A549细胞中过表达miR-195可显著抑制细胞活力并引起细胞周期阻滞,同时细胞迁移率降低,而细胞凋亡率显著上升(P<0.05);此外,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白水平均显著下降(P<0.05).双萤光素酶报告基因分析显示MYB可能是miR-195的靶基因,且在过表达miR-195的A549细胞中回补MYB可部分逆转miR-195对细胞活力、凋亡及迁移的影响.结论:miR-195可靶向MYB抑制肺癌A549细胞的生长和迁移,并促进其凋亡.
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微小RNA-195在高血压左心室肥厚诊断中的价值
目的 探讨微小RNA-195(microRNA-195,miR-195)在高血压左心室肥厚诊断中的价值.方法 选择2016年6月至2017年10月珠海市人民医院急诊科门诊的单纯高血压患者180例纳入观察组,另选择同期在我院体检的健康者100名纳入对照组.两组均行诊室血压、动态血压检测和超声心动图检查,并应用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测两组血浆中miR-195的表达水平.采用Spearman相关分析法分析miR-195表达水平与与血压参数、左心室质量指数的相关性.结果 与对照组比较,观察组左心房内径、左心房舒张末期内径、左心室质量、左心室质量指数、左心室后壁厚度、室间隔厚度、24 h平均收缩压、24 h平均舒张压、白天收缩压、白天舒张压、诊室收缩压、诊室舒张压、夜间收缩压、夜间舒张压及miR-195表达水平均明显较高,且差异有统计学意义(P<0.05).Spearman相关性结果提示, miR-195表达水平与左心室质量、左心室质量指数、白天收缩压、白天舒张压、24 h平均收缩压、24 h平均舒张压、诊室收缩压及诊室舒张压均呈正相关性(P<0.05).观察组中左心室肥厚者血浆miR-195表达水平显著高于非左心室肥厚者,且差异有统计学意义(33.94±2.47 vs. 31.04±2.13,t=8.362,P=0.000).结论 MiR-195高表达于高血压左心室肥厚患者的外周循环血浆中,且miR-195的表达水平与左心室质量指数呈正相关性,其可能成为诊断高血压左心室肥厚的潜在标志物.
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MicroRNA-195对胶质瘤U251细胞株CCND1表达的影响
目的 研究microRNA-195对胶质瘤U251细胞株CCND1表达的影响.方法 通过脂质体Lipofectamin 2000瞬时转染法将microRNA-195过表达、microRNA-195抑制表达转染胶质瘤细胞株U251.以空白转染组作为空白对照组(K组)、microRNA-195过表达转染组为M组、microRNA-195抑制表达转染组为I组.Real-time PCR检测转染前后microRNA-195的含量以确保转染效率;再通过real-time PCR检测转染前后CCND1mRNA的表达变化;western blotting检测胶质瘤细胞U251中CCND1的表达水平.结果 Real-time PCR结果显示M组CCND1mRNA的表达低于I组(M:758.264
