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鞘氨醇激酶与肿瘤
鞘脂是细胞生物学功能的重要调控子.重要的鞘脂类分子有促细胞凋亡和抑制细胞增殖的神经酰胺(ceramide,Cer)和鞘氨醇(sphingosine,Sph),以及促细胞存活的鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine 1-phosphate,S1P).Cer/Sph与S1P之间形成“鞘脂-变阻器”(sphingolipid-rheostat),决定细胞的存活或死亡,而鞘氨醇激酶(sphingosine kinases,SphKs)是Cer/Sph与S1P平衡的重要调控分子.本文综述了鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)的生物学特性、其在肿瘤发生发展中的重要作用,以及作为肿瘤治疗靶点的可能性.
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SphK1抑制剂SKI Ⅱ抑制肝癌HepG2细胞周期及细胞侵袭
鞘氨醇激酶1 (sphingosine kinase 1,SphK1)在调控细胞基本生物学功能方面发挥重要作用,本研究考察了SphK1抑制剂SKI Ⅱ对肝癌细胞HepG2周期及侵袭的影响.采用SRB方法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期分布,Matrigel-Transwell方法检测细胞侵袭能力,Western blotting检测蛋白表达变化.结果表明,SKI Ⅱ能够抑制HepG2细胞的存活,诱导HepG2细胞发生G1期阻滞以及抑制HepG2细胞的侵袭;SKI Ⅱ能降低细胞G1期相关蛋白CDK2、CDK4以及Cdc2的表达水平,同时降低与细胞侵袭相关的MMP2和MMP9的蛋白水平.结果提示,SphK1抑制剂SKI Ⅱ能引起细胞G1期阻滞及降低细胞侵袭能力,提示SphK1可能成为肝癌治疗的一个潜在靶点.
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SphK1在人胃癌裸鼠移植瘤生长中的作用研究
目的 研究鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SphK1)在人胃癌裸鼠移植瘤生长中的作用,并探讨其机制.方法 将培养至对数生长期的SGC7901(人胃癌)细胞注射于裸鼠皮下,建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,建模成功后将裸鼠随机分为4组,每组8只,分别用生理盐水、SKⅠ-Ⅱ、顺铂(DDP) 、SKⅠ-Ⅱ联合DDP对移植瘤进行干预,每周腹腔注射1次,共3次.定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤时间-体积生长抑制曲线.在治疗结束后的第7天脱颈处死全部裸鼠,取下瘤体组织,Western blot法及免疫组化法检测瘤体内SphK1 、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况,原位末端标记染色(TUNEL)法检测肿瘤组织细胞凋亡.结果 成功构建了人胃癌裸鼠移植瘤模型,SKⅠ-Ⅱ单独及联合顺铂应用于荷瘤裸鼠后,均能通过抑制SphK1蛋白的表达增加Bax/Bcl-2的比值,且联合用药组能较SKⅠ-Ⅱ组和顺铂组更显著地减少肿瘤组织SphK1、Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05),并增加Bax蛋白的表达(P＜0.05).SKⅠ-Ⅱ联合DDP组更明显地抑制了肿瘤的生长(P＜0.05).结论 SphK1通过调节Bax/Bcl-2的比值起到影响胃癌生长的作用,胃癌细胞中SphK1的表达被抑制后,通过引起Bax/Bcl-2比值的升高,进而产生了诱导胃癌细胞凋亡、抑制肿瘤生长的作用.SphK1的特异性抑制剂SKⅠ-Ⅱ不仅可单独应用达到抑制胃癌生长的目的,且与DDP联合应用可发挥协同抗肿瘤作用.
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SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞血管内皮生长因子表达的影响
目的 观察SKI-Ⅱ对胃癌SGC7901细胞内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,并对其机制进行初步研究.方法 常规培养胃癌SGC7901细胞,给予不同浓度SKI-Ⅱ及顺铂(DDP)干预,MTT法测定各组胃癌SGC7901细胞增殖情况,免疫组化和Western blot检测药物对SphK1、VEGF表达的影响.结果 MTT检测显示SGC7901细胞与不同浓度的SKI-Ⅱ共同培养,细胞的生长受到不同程度的抑制,其作用具有剂量依赖性,并随时间的延长逐渐增强,免疫组化及Western blot检测显示SKI-Ⅱ可显著下调肿瘤细胞SphK1和VEGF蛋白的表达,单用DDP对SphK1、VEGF无作用.结论 SKI-Ⅱ可以通过下调VEGF和SphK1蛋白表达而有效抑制胃癌SGC7901细胞增殖.
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结肠癌组织中SphK1和FAK表达量与临床病理特征、上皮间质转化的相关性研究
目的:探讨结肠癌组织中SphK1和FAK表达量与临床病理特征、上皮间质转化(EMT)的相关性.方法:2015年1月～2017年5月间在我院接受结肠癌根治术治疗的结肠癌患者90例作为结肠癌组,同期在本院进行急诊手术治疗的肠穿孔患者48例作为对照组.对比两组病灶组织中SphK1、FAK基因,增殖、侵袭、EMT标记基因的表达量差异.采用Pearson检验评估结肠癌组织中SphK1、FAK基因表达量与肿瘤恶性生物学特征、EMT的相关关系.结果:结肠癌组病灶组织中SphK1、FAK mRNA表达量高于对照组(P＜0.05);增殖相关基因Mina53、GTPBP4、CXCR7、EZH2 mRNA的表达量高于对照组(P＜0.05),MS4A12 mRNA的表达量低于对照组(P＜0.05);侵袭相关基因Lin28A、PRDX1、PRM1、SLP-2 mRNA的表达量高于对照组(P＜0.05),ZNRD1 mRNA的表达量低于对照组(P＜0.05);EMT标记基因E-cadherin mRNA的表达量低于对照组(P＜0.05),N-cadherin、vimentin mRNA的表达量高于对照组(P＜0.05).Pearson检验发现,结肠癌组织中SphK1、FAK基因表达量与肿瘤增殖侵袭活性、EMT进程呈正相关.结论:结肠癌组织中存在SphK1、FAK基因异常表达量,可促进肿瘤细胞增殖、侵袭活性增加,加速EMT进程.
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结肠癌手术切除病灶中SphK1、FAK、Musashi1、CA199表达量与血管新生、上皮间质转化的相关性
目的:探讨结肠癌手术切除病灶中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199表达量与血管新生 、上皮间质转化的相关性.方法:选择2015年8月 ～2017年8月间在本院接受根治性手术治疗的结肠癌患者60例,留取术中结肠癌组织标本并作为结肠癌组,留取癌旁正常组织标本作为癌旁组织组.采用荧光定量PCR法检测不同性质结肠组织中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199及血管新生 、上皮间质转化相关基因的表达量.结果:结肠癌组中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199 mRNA的表达量均高于癌旁组织组;血管新生相关基因ANGPTL4、Apelin-13、DLL1、VEGF、HIF-αmRNA的表达量高于癌旁组织组,TSP-1 mRNA的表达量低于癌旁组织组;上皮间质转化相关基因E-cadherin mRNA的表达量低于癌旁组织组,Vimentin、N-cadherin、Twist、Snail mRNA的表达量高于癌旁组织组.相关性分析发现,结肠癌组织中SphK1、FAK、Musashi 1、CA199表达量与血管新生基因 、上皮间质转化基因直接相关.结论:结肠癌组织中存在SphK1、FAK、Musashi 1、CA199基因异常表达,且其表达量与肿瘤血管新生 、上皮间质转化进程直接相关.
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Sphk1基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响
目的 通过抑制鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,Sphk1)基因表达,观察其对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响.方法 使用脂质体2000将化学合成的靶向Sphk1基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转入人乳腺癌MCF-7细胞.使用流式细胞术(FCM)检测转染效率,荧光定量RT-PCR( qRT-PCR)和Western blot 法检测Sphk1的mRNA和蛋白表达水平.利用CCK-8法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞迁移能力.结果 Sphk1 siRNA转染效率达89％.转染siRNA后,MCF-7细胞的Sphk1 mRNA和蛋白表达水平均明显下降,以siRNA-2效果为显著(P＜0.01).转染Sphk1 siRNA-2后,MCF-7细胞的增殖和迁移能力明显下降,凋亡细胞比例增加,以上差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 干扰Sphk1基因表达可有效抑制MCF-7细胞的增殖、迁移能力,同时诱导细胞发生凋亡,Sphk1基因可能成为一个潜在的乳腺癌治疗靶标.
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SPHK1在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用
背景与目的小细胞肺癌约占全部肺癌的15%，化疗是其主要的治疗方法之一，虽然早期对一线化疗方案敏感，但极易出现多药耐药而导致治疗失败。前期基因芯片发现SPHK1与小细胞肺癌的耐药性相关，本研究进一步探讨SPHK1在小细胞肺癌多药耐药中的作用。方法首先通过QRT-PCR和Western blot从基因和蛋白水平检测化疗敏感细胞株H69及多药耐药细胞株H69AR中SPHK1的差异表达；转染siRNA下调H69AR细胞中的SPHK1的表达，通过CCK8检测细胞对各种化疗药物（ADM, DDP, VP-16）的敏感性变化，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡的变化。同时收集小细胞肺癌化疗前组织和血液标本，将其分为化疗敏感组和耐药组，QRT-PCR检测小细胞肺癌患者血液标本中SPHK1的表达，免疫组化法检测小细胞肺癌患者组织标本中SPHK1的表达，分析SPHK1与小细胞肺癌患者预后相关性。结果 SPHK1在耐药细胞H69AR中的表达明显高于H69，下调H69AR中SPHK1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性，促进细胞的凋亡，细胞周期发生G0/G1期阻滞，SPHK1在小细胞肺癌耐药患者中的表达较敏感患者明显增加，SPHK1的表达与患者的性别、年龄无关，与疾病的分期、对化疗的敏感性及生存时间密切相关，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 SPHK1参与调节小细胞肺癌多药耐药，SPHK1可作为评估小细胞肺癌化疗敏感性及临床预后的潜在靶基因。
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SPHK1在人食管鳞癌组织中的表达及意义
目的:探讨SPHK1(sphingosine kinases 1)在人食管鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系.方法:采用免疫组化SP法检测40例人食管鳞癌组织、35例癌旁组织中SPHK1的表达.结果:40例人食管鳞癌组织中29例SPHK1高表达,主要定位于细胞质,占所有食管鳞癌组织的72.5％,明显高于SPHK1在癌旁组织中的表达(9/35,25.7％).且SPHK1的表达与患者是否淋巴结转移(P =0.018)、TNM分期(P=0.035)相关,而与年龄、性别、组织学分化程度、肿瘤位置无关(P＜0.05).结论:SPHK1在人食管鳞癌组织中高表达,可能作为食管鳞癌患者早期诊断与靶向治疗的分子标记物.
