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钝齿棒杆菌argR基因克隆、表达及其重组菌发酵产精氨酸的探讨
目的 探讨N-乙酰鸟氨酸的转氨酶于钝齿棒杆菌当中,其精氨酸合成环节所起到的作用,并验证其酶学性质,从而为优化提高培养基的成分,以及发酵过程的工艺条件,和精氨酸的产量提供理论及实验依据.方法 于精氨酸的高产菌株中,使其钝齿棒杆菌的染色体(SYPA5-5)扩增,从而获取ACOAT的编码基因-argD,其全长为1176bp,编码氨基酸为390个,均于C.crenatum SYPA与Escherichia coli BL21(DE3)上成功表达.选择Ni柱进行亲和层析并纯化后,能够得到重组的蛋白比酶活可达到108.2U/g,并研究其酶学性质.再构建重组的钝齿棒杆菌,以加强其精氨酸的合成途径中ACOAT的蛋白表达量,同时对重组的菌产精氨酸予以发酵分析.结果 重组的钝齿棒杆菌同出发菌株进行对比,其胞内的ACOAT的酶活得到增强；并且重组菌中CCD1其精氨酸的平均产量达到了39.7g/L,其产酸终提高了14.7％.结论 通过研究,不仅对高产精氨酸其重组基因菌工程的构建提供以理论依据,而且还具有非常重要的指导意义.
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L-赖氨酸高产菌株的选育及发酵培养基优化
目的以L-赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)D60-95为出发菌株,提高L-赖氨酸产量.方法采用紫外线诱变处理,对大量抗七叶苷(esculin)突变株进行初筛、复筛;在此基础上,利用均匀设计方法对发酵培养基成分进行优化组合.结果得到抗性突变株E0.9-37,其发酵液中L-赖氨酸产量较出发菌株提高20.6%;发酵培养基主要成分佳配比为葡萄糖140 gL-1,硫酸铵55 g·L-1,碳酸钙50 g·L-1和盐酸豆饼水解液18 g·L-1.结论以上方法是选育L-赖氨酸高产菌株的有效途径.
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碳源及添加模式对钝齿棒杆菌JDN28-75发酵生产L-精氨酸的影响
研究了不同碳源及添加模式对钝齿棒杆菌JDN28-75发酵生产L-精氨酸的影响,结果显示葡萄糖为合适的碳源.初始葡萄糖浓度为10%时,在发酵至24h左右补加葡萄糖有利于精氨酸的积累.5L全自动发酵罐中,初始葡萄糖浓度10%,发酵20h后以2.5g/h连续流加葡萄糖至总糖浓度为15%,与初糖浓度15%的批次发酵相比,L-精氨酸含量从2.98%升至3.72%,糖酸转化率由23.8%增至26.4%.
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钝齿棒杆菌自发抗噬菌体突变株广谱抗性研究
发酵工业的噬菌体污染一直是严重制约生产的严重问题.在乳品发酵过程中,为了减少生产中的噬菌体污染,企业在发酵生产的多个环节上采取措施,如种子轮换,改善卫生条件,使用噬菌体抑制剂,以及应用和改进噬菌体抗性菌株等.氨基酸发酵生产中的噬菌体污染问题虽然不如乳品发酵过程中表现的那么严重,但仍有时发生,人们一直在不断研究减低噬菌体污染的途径和措施.
