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程序性细胞死亡4基因增强胰腺癌细胞放射敏感性的研究
目的 探讨程序性细胞死亡4(PDCD4)对胰腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制.方法 收集胰腺癌组织及对应的癌旁组织,采用RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平.以人胰腺癌细胞Sw1990为研究对象,细胞转染PDCD4过表达载体(pIRES2-PDCD4组)、空载体(pIRES2组),同时以只加入转染试剂的细胞为未转染组,RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平.细胞经放射处理后,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞克隆实验检测细胞放射敏感性,Western blot检测细胞中β-连环蛋白、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)表达水平.结果 胰腺癌组织中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织(t=4.869、9.208,P<0.05).pIRES2-PDCD4组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显高于未转染组(t=9.074、18.927,P<0.05).照射处理后,pIRES2-PDCD4组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于未转染组(t=3.670、4.086,P<0.05),而细胞中β-连环蛋白、c-myc表达水平均明显低于未转染组(t=9.242、17.644,P<0.05).pIRES2-PDCD4组放射敏感性高于未转染组,增敏比为1.843.结论 PDCD4能够增加胰腺癌细胞放射敏感性,促进胰腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt信号通路有关.
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微小RNA-21对宫颈癌HeLa细胞程序性细胞死亡4蛋白表达及细胞增殖的影响
目的:探讨微小RNA-21(miR-21)对宫颈癌HeLa细胞中程序性细胞死亡4(programmed cell death,PDCD4)基因表达及细胞增殖的影响,为应用miR-21对宫颈痛进行基因治疗提供一定的依据.方法:用脂质体转染的方法,将premiR-21、pre-miR-21阴性对照、anti-miR-21、anti-miR-21阴性对照瞬时转染HeLa细胞.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-21相对表达量;MTT法检测宫颈癌HeLa细胞增殖的变化;蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达情况;荧光素酶报告基因法验证miR-21的靶位点.结果:pre-miR-21上调miR-21的表达,抑制PDCD4蛋白表达,促进HeLa细胞增殖;而anti-miR-21下调miR-21的表达,增加PDCD4蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖.pMIR-Luc-PDCD4-3'UTR与pre-miR-21共转染后,荧光素酶活性下降,而与anti-miR-21共转染后,荧光素酶活性升高.结论:PDCD4基因是miR-21的靶基因;miR-21通过调节PDCD4基因的表达调控细胞增殖.
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卵巢上皮癌组织中程序性细胞死亡4蛋白的表达及其意义
目的 探讨程序性细胞死亡4(PDCD4)蛋白在卵巢上皮癌组织中的表达及与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测43例卵巢上皮癌及21例正常卵巢组织石蜡标本中PDCD4蛋白的表达,观察其与卵巢上皮癌患者临床病理学参数之间的关系.结果 21例正常卵巢组织中PDCD4蛋白均呈高表达,43例卵巢上皮癌组织中PDCD4蛋白呈高表达者占74%(32/43),癌组织中PDCD4蛋白蛋白表达明显低于癌旁组织及正常卵巢组织(P<0.05);高分化卵巢上皮癌组织中PDCD4蛋白水平显著高于低分化者(P<0.05);PDCD4蛋白表达与卵巢上皮癌临床分期、组织类型、血清CA125水平及有无淋巴转移无关(P>0.05).结论 PDCD4蛋白在卵巢上皮癌中多呈低表达,并与其分化程度相关,其在卵巢上皮癌的发生、发展过程中可能起重要作用.
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RNA 干扰 PDCD4基因表达对巨噬细胞脂质沉积的影响
目的：探讨程序性细胞死亡4（PDCD4）对巨噬细胞脂质沉积的影响及机制。方法实验分为PDCD4 siRNA组和阴性对照siRNA组。用PDCD4 siRNA和阴性对照siRNA干扰小鼠腹腔巨噬细胞中PDCD4的表达，RT-PCR法和Western blotting法检测干扰效率；经ox-LDL刺激后，油红O染色检测巨噬细胞内油脂含量变化；Real-Time PCR法检测胆固醇流出相关基因肝X受体α（ LXR-α）、三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ ABCA1）及三磷酸腺苷结合盒转运体G1（ABCG1）表达的变化。结果 PDCD4 siRNA可有效降低巨噬细胞中PDCD4的mRNA及蛋白表达水平。与阴性对照siRNA组相比， PDCD4 siRNA组巨噬细胞内油脂含量明显减少（P＜0．001），并且显著上调细胞内LXR-α（P＜0．05）、ABCA1（P＜0．01）及ABCG1（P＜0．001）的表达。结论可通过促进胆固醇流出而减少巨噬细胞内的脂质沉积干扰PDCD4基因表达。
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程序性细胞死亡4对膀胱癌细胞生长、克隆形成能力及凋亡的影响
目的 观察程序性细胞死亡4 (PDCD4)对膀胱癌细胞生长、克隆形成能力和凋亡的影响.方法 膀胱癌细胞株T24感染表达PDCD4的慢病毒,记为过表达组,同时以感染对照慢病毒的细胞为空白组,以不做处理的T24细胞为对照组.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测细胞中PDCD4水平,锥虫蓝染色绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)检测细胞吸光度(A)值,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平.结果 过表达组细胞中PDCD4基因和蛋白水平均明显高于对照组(t1=12.249,P1=0.000,t2=11.601,P2=0.000).过表达组从第3天开始细胞数目明显低于对照组(t1=4.075,P1=0.015,t2=6.665,P2=0.003,t3=6.340,P3=0.003).过表达组A值明显低于对照组,而细胞凋亡率明显高于对照组(t=3.725,P=0.020).过表达组细胞中p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3水平明显升高,而细胞中p-STAT3水平明显下降,与对照组比较差异均有统计学意义(t1=10.136,P1=0.001,t2=11.867,P2=0.000,t3=6.662,P3 =0.003).空白组细胞中PDCD4、p-p38MAPK、Cleaved Caspase-3、p-STAT3水平和细胞A值、细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义.结论 PDCD4抑制膀胱癌细胞生长,促进细胞凋亡,降低细胞克隆形成能力,抑制细胞中STAT3磷酸化,促进细胞中p38MAPK磷酸化,促进细胞中Caspase-3活化.
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苦参碱联合顺铂对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞PDCD4表达的影响
目的 探讨苦参碱对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞存活及凋亡的影响,及降低顺铂化疗耐药性的可能作用机制.方法 将SK-NEP-1细胞分为对照组、5μ/mL顺铂组、苦参碱组(0.5、1.0和1.5mg/mL)、苦参碱(0.5、1.0和1.5mg/mL)联合5μg/mL顺铂组.应用MTT比色法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测各组细胞的PDCD4 mRNA表达.结果 各实验组SK-NEP-1细胞的存活率均低于对照组(均P＜0.01),苦参碱组随药物浓度增加,存活率逐渐降低,苦参碱联合顺铂组与单药苦参碱组比较,存活率均明显降低(均P＜0.01).各实验组SK-NEP-1细胞的凋亡率均高于对照组(均P＜0.05),苦参碱组随药物浓度增加,凋亡率逐渐增高,苦参碱联合顺铂组与单药苦参碱组比较,凋亡率均明显增高(均P＜0.01).各实验组PDCD4 mRNA的表达水平均高于对照组(均P＜0.01),苦参碱联合顺铂组与单药苦参碱组及顺铂组比较,PDCD4 mRNA表达均显著提高(均P＜0.01).结论 苦参碱可浓度依赖性的地抑制SK-NEP-1细胞的增殖并诱导凋亡,从而提高顺铂化疗的敏感性,该作用可能与提高细胞内PDCD4 mRNA的表达有关.
关键词： 人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞 苦参碱 顺铂 程序性细胞死亡4 儿童 -
程序性细胞死亡4 mRNA在结直肠癌组织中的表达及意义*
目的：研究腹腔镜结直肠癌根治术癌组织中程序性细胞死亡4（PDCD4）mRNA的表达，以及与结直肠癌临床资料的相关性。方法收集2012～2014年腹腔镜手术结直肠癌及癌旁正常组织标本54例，采用逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）检测结直肠标本中PDCD4 mRNA水平；分析mRNA水平与临床资料的相关性。结果①结直肠癌组织中PDCD4表达降低甚至不表达，表达降低率为64.8%（35/54），△Ct值为（4.50±0.60）；正常组织中PDCD4高表达，△Ct值为（3.54±0.52），差异有统计学意义（P<0.05）。②结直肠癌组织中PDCD4 mRNA水平与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关，与性别、年龄、肿瘤部位无关；分化程度越低，有淋巴结转移，浸润越深，则mRNA表达更低。结论结直肠癌中mRNA表达下降，PDCD4 mRNA水平与性别、年龄、肿瘤部位无关，与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关。
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不同分子亚型乳腺癌中程序性细胞死亡4的表达及其与预后的关系
目的 探讨不同分子亚型乳腺癌中程序性细胞死亡4 (PDCD4)的表达及其与预后的关系.方法 收集广东省妇幼保健院乳腺科2007年1月至2009年12月期间手术切除的乳腺癌及相应的癌旁组织标本各338例,按免疫表型将其分为管腔型(199例)、HER-2阳性型(63例)及三阴型(76例),采用SP法检测不同分子亚型乳腺癌中PDCD4的表达情况,并分析其与预后的关系.用SPSS 13.0软件进行统计学分析,率的比较用卡方检验.用Kaplan-Meier法对患者的无病生存及总生存情况进行分析,用log-rank检验比较生存曲线间的差异,运用Cox分析影响各分子亚型乳腺癌生存预后的因素.结果 ①338例乳腺癌中PDCD4蛋白表达总阳性率为56.80％(192/338),表达缺失率为43.20％ (146/338);相应癌旁正常乳腺组织中PDCD4蛋白表达总阳性率为96.44％(326/338).其中管腔型乳腺癌中PDCD4表达阳性率明显高于HER-2阳性型(x2=38.315,P=0.000)及三阴型(x2=33.746,P=0.000),而HER-2阳性型及三阴型乳腺癌中PDCD4蛋白表达阳性率差异无统计学意义(x2=0.448,P=0.503);且管腔型、HER-2阳性型及三阴型乳腺癌中PDCD4蛋白表达阳性率均分别明显低于癌旁正常组织(x2=39.206,P=0.000;x2=60.398,P=0.000;x2=65.185,P=0.000).②管腔型乳腺癌中PDCD4表达与年龄、组织学分级、T分期及N分期均有关(x2=3.979,P=0.046;P=13.826,P=0.001;x2=12.604,P=0.002;x2=28.613,P=0.000);HER-2阳性型乳腺癌中PDCD4表达与年龄及T分期无关(x2=0.033,P=0.856;x2=4.258,P=0.119),而与组织学分级及N分期有关(x2=9.972,P=0.007;x2=13.714,P=0.003);三阴型乳腺癌中PDCD4表达与年龄及T分期无关(x2=0.817,P=0.366; x2=0.990,P=0.610),而与组织学分级及N分期有关(x2=14.269,P=0.001;x2=7.945,P=0.047).③338例乳腺癌中PDCD4蛋白阳性表达者其无病生存及总生存均明显优于PDCD4蛋白阴性表达者(P=0.000,P=0.000),且在各分子亚型乳腺癌中,同样显示出PDCD4蛋白阳性表达者其无病生存及总生存明显优于PDCD4蛋白阴性表达者(P=0.000,P=0.000).④多因素分析显示,影响乳腺癌无病生存的独立因素包括T分期、N分期及PDCD4表达(P=0.004,P=0.001,P=0.000),影响乳腺癌总生存的独立因素包括组织学分级、T分期、N分期及PDCD4表达.结论 PDCD4在乳腺癌中表达下调,其中三阴型及HER-2阳性型乳腺癌中下调更明显;PDCD4蛋白阳性表达者无病生存及总生存均明显优于PDCD4蛋白阴性表达者,PDCD4可作为预测乳腺癌预后的独立因素.
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新的抑癌基因PDCD4新研究进展
目的:程序性细胞死亡4(PDCD4)是一种新的细胞凋亡相关基因,近来自动物和人类肿瘤的研究显示PDCD4可能是一种新的抑癌基因,在肿瘤的发生、发展中可能发挥重要作用.本文从该基因的发现、生物学特点以及与肿瘤发生、发展的关系进行了综述.
