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运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白
目的 运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能.方法 利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果.结果 成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP.酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用.结论 酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考.
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siRNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老相关β-半乳糖苷酶活性的影响
目的 在HEK293细胞中筛选能有效沉默铜离子代谢结构域包含体1(COMMD1)基因表达的siRNA片段,并研究siRNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响.方法 用RT-PCR初步筛选能够沉默COMMD1的siRNA干扰片段,用定量PCR和免疫印迹法进一步确认siRNA的干扰效果,然后用衰老相关β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测siRNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响.结果 siCOMMD1-1对HEK293细胞中COMMD1的沉默效率高;但siCOMMD1-1沉默COMMD1后,未见HEK293细胞的衰老相关β-半乳糖苷酶活性出现显著性改变.结论 siCOMMD1-1沉默HEK293细胞中COMMD1的表达后,未能提高HEK293细胞的衰老相关β-半乳糖苷酶活性.
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肝细胞肝癌COMMD1的表达及其意义
目的:检测肝细胞肝癌组织COMMD1蛋白的表达,探讨其临床及病理学意义.方法:采用SP免疫组织化学方法检测COMMD1在正常肝组织及肝癌中的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系.结果:COMMD1在肝癌组中的阳性表达率显著低于正常肝组织(P＜0.05).COMMD1低表达与癌细胞分化程度及TMN临床分期显著相关(P＜0.05).但其表达与肿瘤是否有血管浸润无关(P＞0.05).结论:肝细胞肝癌COMMD1表达显著降低,且与肿瘤分化程度及发展有关,可为判断病理分级及临床分期提供参考.
