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糖多孢红霉菌bldD基因提高活跃链霉菌诺西肽产量的研究
目的 将糖多孢红霉菌bldD基因转入活跃链霉菌(Streptomyces actuosus)N-H,探讨其对诺西肽产量的影响.方法 将bldD基因连接到链霉菌整合型表达载体pZMW上构建pZMW-bldD质粒,利用PEG介导的原生质体转化方法将重组质粒pZMW-bldD及对照质粒pZMW-vgb分别导入活跃链霉菌,通过对枯草芽孢杆菌抑菌试验和分光光度计法测定发酵液中诺西肽产量.结果 成功构建了活跃链霉菌N-H/pZMW-bldD工程菌株及对照菌株N-H/pZMW-vgb.与出发菌株N-H相比,N-H/pZMW-bldD菌株诺西肽产量提高了68%;与对照菌株N-H/pZMW-vgb相比,N-H/pZMW-bldD菌株诺西肽产量提高了19%.结论 在活跃链霉菌中导入糖多孢红霉菌bldD基因可以提高诺西肽产量,其作用效果较 vgb基因更为明显,说明bldD基因对抗生素产量的提高具有广谱性.
关键词： 活跃链霉菌 糖多孢菌属bldD基因 诺西肽 抗菌药 -
透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在那西肽产生菌-活跃链霉菌中的表达
目的 将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)整合到那西肽产生菌-活跃链霉菌(Streptomyces actuosus)的染色体上进行表达,从而提高菌体对溶解氧的利用,提高那西肽的发酵产量.方法 采用分子生物学方法构建了携带vgb的重组质粒pZV02,采用接合转移的方法将其导入那西肽产生菌-活跃链霉菌中,采用抗生素抗性标记筛选法获得了基因重组菌株.结果 在低溶氧的发酵条件下,重组菌株的那西肽产量显著高于对照菌株.结论 vgb在活跃链霉菌中的表达,可以改善菌体对溶解氧的利用,在低溶氧的条件下可以提高发酵产物那西肽的产量.
关键词： 活跃链霉菌 那西肽 透明颤菌血红蛋白基因 -
诺西肽产生茵活跃链霉菌的原生质体制备与再生
目的 研究诺西肽产生菌活跃链霉菌的原生质体制备与再生的适条件.方法 使用溶菌酶脱去细胞壁制备原生质体,并考察原生质体制备和再生的各种影响因素.结果 确定了原生质体制备的条件:一级培养采用种子培养基,培养30 h,转种量的体积分数为5%;二级培养采用R2YE培养基,培养时间为32 h,适甘氨酸质量浓度为6.0 g·L-1,佳溶菌酶质量浓度为1.5 g·L-1,酶解时间为60 min,原生质体再生率达到5.3%.结论 上述条件为活跃链霉菌原生质体制备与再生的适条件,该条件的建立为活跃链霉菌原生质体的诱变育种奠定了基础.
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那西肽产生菌S.actuosus选育及发酵条件的优化
目的提高那西肽产量.方法介绍那西肽产生菌活跃链霉菌S.actuosus(Z10)的诱变育种,诱变的方法有紫外线、亚硝基胍及两者的联合诱变,并对高发酵单位菌种优化发酵条件和测定其生化曲线.结果通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得高产菌株Z12,该菌种进行4次传代试验显示稳定,经发酵条件优化后在培养基中添加2%黄豆粉,0.01%硫酸锰可以提高那西肽产量.菌种Z12相对于出发菌种Z10提高那西肽产量达58.9%.结论通过紫外线及亚硝基胍联合诱变可以筛选到高活力菌种.
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含硫多肽类抗生素那西肽的研究进展
那西肽(nosiheptide)是一类由活跃链霉菌(Streptomyces actuosus)产生的新型环保含硫多肽类抗生素.本文就其结构与理化特性,生物学功能及作用机制,生产,提取工艺,测定方法,安全性及应用等方面进行了综述,对产那西肽的结构基因,菌种改良方面的研究进行了总结,对那西肽后续的研究进行了展望.
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表面活性剂对活跃链霉菌产那西肽发酵的影响
目的 研究Triton X-1 00、CaCl2、DMSO、山梨醇、SDS、Tween-80、CTAB等表面活性剂对活跃链霉菌发酵产那西肽的影响.方法 采用单因素实验研究活跃链霉菌的基础代谢以及表面活性剂加入时间对那西肽效价的影响:采用响应面法对表面活性剂添加浓度进行优化.结果 基础代谢研究表明,活跃链霉菌产那西肽合成相对滞后于菌体生长.多种表面活性剂均显著影响那西肽的生物合成,整体表现为低浓度促进、高浓度抑制.表面活性剂依其类型及加入时机的不同,对那茜肽产量的影响表现出组间类型差异性及组内时间依赖性.结论 DMSO、CaCl2、Triton X-100在低浓度范围内对那西肽产量的促进效果为显著;分别在24、24和48h以DMSO 0.808mg/mL、CaCl20.799mg/mL和Triton X-100 0.574mg/mL的浓度为佳添加浓度,该条件下那西肽效价达到931.493μg/mL,比优化前提高了7.73％.
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24孔板培养活跃链霉菌合成那西肽条件的优化
目的 优化24孔板培养活跃链霉菌XW产那西肽的发酵条件.方法 采用单因素实验和响应面法对24孔板的发酵条件进行优化.结果 得到活跃链霉菌XW 24孔板发酵产那西肽的优发酵条件为:种子培养基装液量2.55 mL,发酵培养基装液量0.93mL,发酵时间121h.结论 通过对发酵条件的优化,可以明显提高24孔板发酵产那西肽的效价达到882.25μgg/mL,实验值与模型预测值较接近,吻合度较高,较初始效价675.63μg/mL提高了30.58％.研究结果表明24孔板发酵与摇瓶发酵之间有良好的相关性,相关系数R为0.883.
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活跃链霉菌合成那西肽的pH分段控制策略
目的 以pH分段控制策略提升活跃链霉菌产那西肽的发酵效价.方法 基于对活跃链霉菌合成那西肽基础代谢过程中的生物量、那西肽效价、糖、氨基氮以及pH值进行动态分析,以不同的单一pH值对发酵过程进行恒定控制,考察活跃链霉菌的生物量、比生长速率和那西肽合成的动态变化规律,来确定pH分段控制策略.结果 活跃链霉菌合成那西肽代谢过程中pH呈S形波动变化,菌体生长与那西肽合成的相对pH值有所不同.发酵过程恒定控制pH6.5模式下,活跃链霉菌具有大的比生长速率,恒定控制pH7.5模式下那西肽合成效价高.以C6H12O6/NH3·H2O补料方式进行pH分段控制,那西肽的合成能力比采用酸碱补料及生理酸碱性物质补料的控制模式强,发酵单位高.结论 以C6H 12O6/NH3·H2O模式进行补料,在0～72h时恒定控制pH6.5,此后恒定控制pH7.5,那西肽效价较未控制模式下提高了25.58％.
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响应面法优化那西肽发酵条件
目的 优化活跃链霉菌NXT-NA10摇瓶发酵生产那西肽的发酵条件.方法 首先用Plackett-Burman设计法筛选出影响发酵的显著因素,再用响应面法分析优化显著影响因素参数.结果 Plackett-Burman设计法筛选出4个显著影响因素为酵母粉、黄豆粉、NaCl和接种量,响应面法优化出它们的佳数值分别为酵母粉0.31％、黄豆粉6.42％、NaCl 0.41％、接种量5.5％.结论 在此优化条件下,摇瓶效价达到(1121.28±26) μg/mL,比优化前提高了10.95％.
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活跃链霉菌合成那西肽的固体斜面培养条件优化
目的 探索活跃链霉菌36#摇瓶发酵合成那西肽的固体斜面培养条件的佳工艺.方法 利用单因素与正交试验对固体斜面培养条件进行优化.结果 得到合成那西肽的活跃链霉菌36#的固体斜面优培养条件为:初始pH为7.8,培养温度为37℃,培养时间为3d,冷藏时间为0～3周,那西肽产量可达936mg/L.与原工艺相比较,那西肽的产量增加了13.8％.结论 通过活跃链霉菌固体斜面培养条件的优化,可以提高活跃链霉菌摇瓶发酵合成那西肽的产量.
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紫外诱变和氨基酸抗性筛选选育那西肽高产菌株
目的 筛选出那西肽高产菌株.方法 以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氧化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌.结果 通过致死率和正突变率的考察,确定紫外佳诱变剂量为100s.在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定.结论 紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株.
