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ZNF331过表达对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响
目的 研究ZNF331过表达对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 构建ZNF331过表达的慢病毒载体Flag-pLV-Neo-ZNF331,并进行包装,感染 HCT116/p53 +/+(p53野生型)和HCT116/p53 -/-(p53缺陷型)细胞,通过Western印迹法鉴定建立ZNF331稳定过表达的细胞株.分别通过细胞增殖实验、集落形成实验、DAPI染色、流式细胞仪分析ZNF331对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响.通过免疫沉淀实验、报告基因实验和实时(real-time)PCR检测ZNF331与p53相互作用、对p53转录活性和p53凋亡相关靶基因表达的影响.结果 成功构建ZNF331过表达的慢病毒载体;建立ZNF331稳定过表达的HCT116细胞克隆;ZNF331对HCT116/p53 +/+细胞增殖无明显影响,但能抑制HCT116/p53 -/-细胞增殖(P<0.01);ZNF331与p53存在相互作用,与空载对照细胞相比,ZNF331能梯度抑制p53转录活性,且能抑制p53凋亡相关靶基因Puma和p53AIP1的mRNA表达水平(P<0.05);ZNF331能抑制p53诱导的细胞凋亡(P<0.01).结论 ZNF331过表达对结肠癌细胞增殖的影响依赖p53状态;且能通过与p53相互作用,抑制p53转录活性而抑制结肠癌细胞凋亡.
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启动子区甲基化导致ZNF331在结直肠癌中表达缺失
通过分析锌指蛋白331 (ZNF331)在结直肠癌中的甲基化及表达情况,探讨ZNF331基因的甲基化与结直肠癌的关系,为结直肠癌的早期诊断和治疗提供新的靶点.采用甲基化特异性PCR(MSP)检测7株结直肠癌细胞系和66例结直肠癌组织标本中ZNF331基因启动子区的甲基化情况.结果7株结直肠癌细胞系中LOVO、RKO、DLD1和HCT116启动子区完全甲基化,SW620和HT29呈部分甲基化,SW480为非甲基化.LOVO、RKO、DLD1、HCT116细胞系中ZNF331mRNA不表达,经5-Aza处理后恢复表达.在SW480、SW620、HT29细胞系中,5-Aza处理前后均表达,处理后表达量增加.在66例结直肠癌组织中,ZNF331启动子区甲基化率为72.7％(48/66),而正常结直肠组织中无甲基化(0/7).
