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调节性T细胞与器官移植免疫耐受的研究进展
CD4、CD25和叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)阳性(CD4~+ CD25~+FoxP3~+)的调节性T细胞(Treg)是具有免疫调节功能的T细胞亚群,在移植后诱导和维持免疫耐受方面发挥重要作用.在移植物发生排斥反应时,CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ Treg的数量增加.因此可将其用于预测移植物的转归及判断移植受者的免疫状态.联合监测效应性T细胞(Teff)与Treg间的平衡有助于更好地判断移植受者的免疫状态.由于不同免疫抑制剂对CD4~+ CD25~+ FoxP3~+ Treg的影响不同,所以免疫抑制剂对诱导移植免疫耐受的潜在作用应引起重视.
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佐剂性关节炎大鼠肺功能变化与Foxp3、TGF-β1/Smads信号传导通路的相关性研究
目的:观察佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠肺系数、肺功能变化、调节性T细胞及Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达,探讨Foxp3与TGF-β/Smads信号传导通路在佐剂性关节炎大鼠肺功能降低中的可能作用机制.方法:将24只Wistar大鼠随机分为正常对照组和模型组,每组12只,向模型组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成佐剂性关节炎模型.致炎48天后,观察两组大鼠足跖肿胀度及关节炎指数(AI),计算两组大鼠肺系数,检测大鼠肺功能,测定调节性T细胞百分率,HE染色观察肺病理学改变,免疫组化染色观察Foxp3、TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达情况.结果:①与正常对照组相比,AA模型组大鼠足跖肿胀度、AI、肺系数、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC)、肺泡炎积分、TGF-β1及Smad3蛋白表达明显升高(P＜0.01);用力肺活量(FVC)、25%肺活量的大呼气流量( FEF25)、50%肺活量的大呼气流量( FEF50)、75%肺活量的大呼气流量(FEF75)、大呼气中期流量(MMF)、用力大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)、CD4~+T细胞、CD25~+T细胞、CD4~+CD25~+T细胞百分率、Foxp3蛋白及Smad7蛋白表达显著降低(P＜0.01).②Spearman相关分析可知,AA大鼠肺功能参数中FEF50、MMF与足跖肿胀度呈负相关,MMF与肺系数呈负相关,Cldyn与TGF-β1蛋白积分光密度值呈负相关;FEF50、MMF与关节炎指数呈正相关,FEF75与肺系数呈正相关,FEV1/FVC与Foxp3蛋白表达染色指数、Foxp3蛋白积分光密度值呈正相关(P＜0.05或P＜0.01).结论:AA大鼠在足跖肿胀度、关节炎指数升高的同时出现肺功能的下降,提示可能是致炎后炎症的持续、发展而出现慢性炎症反应导致肺的损伤(肺间质纤维化),而肺功能的下降与Foxp3、Smad3、Smad7、TGF-β1蛋白表达呈相关性,说明转录因子Foxp3和TGF-β1/Smads信号传导通路共同参与其作用机制.
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CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在慢性乙型肝炎患者中的作用
目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与乙型肝炎慢性化和病毒清除之间的关系.方法 收集慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者19例、HBV携带者(AsC)21例、HBV感染恢复者12例和健康对照者15例.通过流式细胞术分析外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表型和频率,磁珠分选(MACS)CD4+CD25+T细胞,实时荧光定量PCR方法 分析Foxp3 mRNA基因在CD4+CD25+T细胞的表达水平.统计学处理采用单因素方差分析或非参数检验.结果CAH或AsC组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率以及CD4+CD25+T细胞中Foxp3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组或HBV感染恢复者(F=6.8,F=3.72,均P<0.05).免疫组织化学染色发现,CAH患者肝组织Foxp3'T细胞浸润累积较对照组明显增高,但AsC较CAH减少.HBeAg阳性患者(包括CAH和AsC)CD4'CD25'T细胞频率显著高于HBeAg阴性患者(t=2.3,P<0.05),抗-HBe阴性患者显著高于抗-HBe阳性患者(t=2.4,P<0.05).CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率与慢性乙型肝炎患者血清中HBV病毒载量存在正相关(r=0.56,P<0.01).结论 慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞异常与乙型肝炎慢性化和病毒清除有关.
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小鼠巨细胞病毒感染对调节性T细胞扩增的影响及机制
目的 在体内外水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对调节性T细胞(Treg)扩增的影响及其可能的机制.方法 建立全身播散型MCMV慢性感染模型,分别采用Western blot法和流式细胞术动态检测小鼠脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;模拟MCMV感染细胞的免疫环境,建立T淋巴细胞与MCMV感染的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养细胞模型,在培养前和共培养3 d后检测T淋巴细胞中的Foxp3蛋白表达水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率,RT-PCR方法检测MEF中转化生长因子(TGF)-βmRNA表达水平,双抗体夹心ELISA方法检测共培养上清中TGF-B蛋白表达水平.结果 整体研究发现,MCMV在感染慢性期可显著增加T淋巴细胞中Foxp3的蛋白表达水平和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率.体外细胞模型发现,MCMV感染在体外同样可以上调T细胞中的Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率.TGF-β在MEF中的基因表达和上清中的蛋白表达在MCMV感染后显著增加.结论 MCMV感染在体内外均可诱导Treg在数量上的扩增和功能上的活化;MCMV感染导致宿主细胞TGF-β表达水平升高,可能是其在外周诱导Treg种群扩增的重要机制之一.
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白介素6、白介素7和Foxp3在结肠癌旁肿瘤沉积形成预测价值
目的 探讨白细胞介素6(IL-6)、IL-7和Foxp3水平对结肠癌旁肿瘤沉积形成的预测价值.方法 收集183例结直肠癌手术患者的肿瘤组织标本和术前外周血标本,分别采用免疫组织化学染色和酶联免疫吸附实验检测组织中和外周血中IL-6、IL-7及Foxp3蛋白表达水平.绘制受试者工作特征曲线,评估IL-6、IL-7和Foxp3蛋白单独及联合检测对肿瘤沉积的预测价值.结果 183例纳入病例中54例有肿瘤沉积,129例未见发生肿瘤沉积.肿瘤沉积患者肿瘤组织中IL-6、IL-7及Foxp3蛋白阳性率均高于非肿瘤沉积患者(IL-6:79.6％比64.3％;IL-7:72.2％比46.5％;Foxp3:81.5％比72.1％;均P＜0.05);外周血蛋白水平亦明显高于对照组(IL-6:8.8±0.5比6.9±0.8;IL-7:13.2±2.7比8.9±1.6;Foxp3:26.3±4.1比21.2±6.6;均P＜ 0.05).外周血IL-6、IL-7及Foxp3蛋白水平预测肿瘤沉积的佳阈值分别为8.2 ng/ml、9.5 ng/ml和22.1个,其串联法联合检测的灵敏度、特异度及准确率分别为80.6％、94.8％及86.2％,并联法联合检测分别为94.6％、82.5％、84.5％.结论 IL-6、IL-7和Foxp3与结肠癌旁肿瘤沉积形成关系密切,三者联合检测对肿瘤沉积具有较高的预测价值.
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不明原因复发性流产小鼠模型CD4+CD25+Treg的比例及Foxp3表达的变化
目的 分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系.方法 以雌性CBA/Jx雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况.结果 流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)％低于对照组(15.5±0.78)％(P＜0.05).流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)％,明显高于对照组(2.4±1.6)％(P＜0.01).流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0,025(P＜ 0.05).结论 小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一.
