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活性氧在2-甲氧雌二醇诱导骨尤文肉瘤细胞凋亡中的作用
目的 研究在2-甲氧雌二醇(2-ME)诱导SK-N-MC尤文肉瘤细胞凋亡的过程中,调控细胞活性氧水平(ROS)的环节及ROS引发的下游事件.方法 利用流式细胞仪、clark氧电极等手段及撤药实验、线粒体通透性转换(PT)孔干预等方法检测2-ME作用下凋亡的可逆性及呼吸链活性、线粒体跨膜电势(△ψm)、细胞ROS水平等参数的变化,并考察它们之间的关系.结果 2-ME诱导SK-N-MC细胞发生依赖于ROS的细胞凋亡.2-ME作用3 h内撤药,至24 h无明显凋亡发生;3 h后撤药,至24 h有明显凋亡.2-ME作用下,线粒体呼吸链活性被抑制,ROS生成加速;△ψm经历"升高-降低"变化,3h时开始降低,PT孔稳定剂可维持△ψm不降低;ROS水平持续升高,3 h时有跳跃性增高,PT孔稳定剂对ROS升高趋势无明显影响.结论 2-ME作用引起SK-N-MC细胞呼吸链的抑制,引发△ψm的升高,由此造成ROS生成加速及ROS水平升高.当ROS水平突破一定阈值,引发了PT孔的不可逆开放及△ψm的消解乃至崩溃,并终使细胞走向凋亡.ROS是2-ME诱导凋亡信号传导中的一个环节.
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2-甲氧雌二醇与槲皮素体外联合抗前列腺癌的作用
目的 观察2-甲氧雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME)和槲皮素(quercetin,Que)联合应用对人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3生长的作用,评价Que和2-ME联合用药的体外抗前列腺癌效果并筛选有协同作用的配伍组合.方法 用不同浓度Que(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)和2-ME(0、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5、10 μmol/L)分别处理LNCaP和PC-3细胞,锥虫蓝法计数并计算48 h癌细胞生长抑制率和半抑制浓度(IC50).根据量效曲线与IC50值,分别选择两种药物的适宜浓度按照析因设计组成不同的联用配伍组合.应用不同药物配伍组分别处理LNCaP和PC-3细胞48 h,测定细胞生长抑制率,并计算两种药物16个配伍组的联用指数(CI),以评价药物的体外联合抗前列腺癌效果.结果 随单用Que或2-ME的浓度增加,其对LNCaP或PC-3细胞的生长抑制率增加.槲皮素和2-ME的IC50值分别为23.29 μmol/L和1.89 μmol/L(针对LNCaP细胞);22.12μmol/L和1.74 μmol/L(PC-3细胞).选择Que(5、10、20、40 μmol/L)和2-ME(0.5、1、3、5μmol/L)组成16个配伍组作用于癌细胞48 h后,低剂量槲皮素(5和10 μmol/L)联合高剂量2-ME(3和5μmol/L)对LNCaP细胞生长表现出协同抑制作用;而对PC-3细胞,除了槲皮素10 μmol/L +2-ME 3 μmol/L配伍组外,高剂量的槲皮素(20和40 μmol/L)联合高剂量的2-ME(3和5μmol/L)也表现出协同作用.结论 Que和2-ME对人前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3的生长均具有抑制作用,并剂量相关性,两药合适剂量的配伍组合对前列腺癌细胞的生长抑制具有协同作用.
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2-甲氧雌二醇对低氧条件下皮肤成纤维细胞自噬水平及纤维化的影响
目的 研究2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对低氧条件下人皮肤成纤维细胞自噬水平及纤维化的影响.方法 原代培养健康人皮肤成纤维细胞并传代,取第3～6代细胞,在低氧(1％ O2)条件下培养.使用2-ME(0、5、10、25μmol/L)和自噬抑制剂Bafilomycin A1(0、5、10、50 nmol/L)干预,采用Western blot法检测I型胶原(collagen type I)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、低氧诱导因子-1a(hypoxia-inducible factor 1alpha,HIF-1a)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62的水平,采用免疫荧光法检测LC3的水平.结果 成纤维细胞低氧培养24 h后,HIF-1a、Ⅰ型胶原、CTGF和LC3Ⅱ蛋白质水平显著升高,P62蛋白质水平降低,LC3免疫荧光信号显著增强.Bafilomycin A1干预组成纤维细胞I型胶原和CTGF水平降低,HIF-1α、LC3Ⅱ和P62水平升高,LC3免疫荧光信号增强,该效应呈浓度依赖性.2-ME干预组成纤维细胞HIF-1a、Ⅰ型胶原、CTGF和LC3Ⅱ蛋白质水平降低、P62蛋白质水平升高,LC3免疫荧光信号减弱,该效应呈浓度依赖性.结论 低氧条件下2-ME通过下调细胞自噬抑制皮肤成纤维细胞纤维化.
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2-甲氧基雌二醇联用抗坏血酸诱导白血病K562细胞凋亡机制研究
目的 研究2-ME联合抗坏血酸在诱导白血病细胞凋亡中的作用以及相关作用机制. 方法 用显微镜观察K562细胞凋亡情况;通过流式细胞术分析凋亡率;通过EMSA检测NF-κB的活性.结果 2μmol/L2-ME +62.5 μmol/LAA组可诱导K562细胞凋亡.2-ME+ AA以剂量依赖性方式诱导凋亡,在浓度(2～8 μmol/L)时凋亡呈时间-剂量依赖.2-ME可诱导NF-K BDNA结合活性以剂量依赖性方式降低. 结论 2-ME联合抗坏血酸可诱导白血病细胞以时间-剂量依赖式凋亡,其诱导凋亡的机制与NF-κB通路有关.
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晚发型子痫前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盘 COMT 蛋白表达及意义
目的：探讨2-甲氧雌二醇（2-ME）、儿茶酚胺氧位甲基转移酶（ COMT）蛋白在晚发型子痫前期（ PE）发病中的作用。方法选取孕周＞34周的晚发型PE患者25例（观察组），同期正常单胎妊娠孕妇35例（对照组）。采用全自动酶标仪检测血清及尿液2-ME水平，Western blotting法检测胎盘组织COMT蛋白相对表达量。结果观察组血清、尿液2-ME分别为（595．3±21．8）、（407．8±16．3） pg／mL，对照组分别为（407．8±23．9）、（298．4±18．1） pg／mL；两组比较，P均＜0．05。观察组胎盘COMT蛋白相对表达量为1．48±0．66，对照组为1．39±0．58；两组比较，P＞0．05。结论晚发型PE患者血清、尿液2-ME水平升高，胎盘COMT蛋白表达无明显变化；2-ME可能是其发病过程中的一种代偿性保护因子，而COMT蛋白可能与晚发型PE的发生关系不大。
关键词： 晚发型子痫前期 儿茶酚胺氧位甲基转移酶 2-甲氧雌二醇 -
2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响
目的: 探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法: 用MTT法和流式细胞术榆测2-ME对HL60的增殖抑制及促凋亡作用,用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达.结果: 随着2-ME浓度升高及作用时间延长,HL60细胞增殖明显受抑制(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),当2-ME浓度为50tμmol/L时,细胞凋亡率达65.8%;2-ME(30μmol/L)作用72h后,Bel-2的表达较对照组显著减少(P<0.05).结论: 2-ME对HI60细胞增殖有抑制及促凋亡作用,Bcl-2表达下调在此过程中可能发挥重要作用.
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2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法 运用四唑蓝(MTT)法和彗星电泳法检测2-甲氧雌二醇对HL60白血病细胞的增殖抑制及促凋亡作用;应用流式细胞技术检测Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)2-甲氧雌二醇在10～50 μM浓度范围内作用 72 h以及30μM 2-甲氧雌二醇在作用24、48、72 h后对HL60白血病细胞有增殖抑制作用,这种作用呈时间-剂量依赖关系.(2)2-甲氧雌二醇在作用浓度为10、30、50μM时,HL60白血病细胞凋亡率分别为8.20%、28.20%、45.30%,与阴性对照组(1.00%)差异有统计学意义;30 μM 2-甲氧雌二醇在作用24、48、72 h后,HL60白血病细胞凋亡率分别为3.71%、17.72%、43.58%,48、72h作用时间组与阴性对照组(1.00%)差异有统计学意义.(3)30μM 2-甲氧雌二醇作用72 h后的细胞,Bcl-2蛋白的表达较对照组显著减少.结论 2-甲氧雌二醇具有对HL60白血病细胞增殖抑制及促凋亡作用,Bcl-2蛋白表达下调在此过程中可能发挥着重要的作用.
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2-甲氧雌二醇对人子宫内膜癌细胞凋亡作用的实验研究
目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡作用的影响.方法:将体外培养的人子宫内膜癌细胞株KLE细胞分为实验组和对照组,其中实验组培养液中加入不同浓度的2-ME,对照组不含2-ME.通过流式细胞仪(FCM)观察KLE细胞的凋亡率及凋亡基因p53和Bcl-2在诱导细胞凋亡中的作用.结果:实验组2-ME浓度为5.0μM～20.0μM时,出现细胞凋亡率升高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),实验组2-ME浓度达2.0μM以上时p53和Bcl-2阳性表达率与对照组相比明显下降(P＜0.05).结论:2-ME对体外培养的人子宫内膜癌KLE细胞株有促进凋亡作用.
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2-甲氧雌二醇抑制子宫蜕膜化基质细胞VEGF表达的研究
目的:研究2-甲氧雌二醇对子宫蜕膜化基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:采用醋酸甲基孕酮及双丁酰环磷酸腺苷诱导子宫内膜基质细胞蜕膜化.诱导成功后,分别加入3个浓度的2-甲氧雌二醇,给药48 h后收集细胞上清液,采用ELISA法测定VEGF分泌情况;同时抽提细胞RNA,Real-Time RT-PCR检测VEGF mRNA水平;免疫细胞化学法测定细胞雌激素受体(ER)的表达.结果:ELISA检测表明1 μmol/L、10 μmol/L、50μmol/L浓度的2-ME2均可降低蜕膜化基质细胞分泌VEGF的水平;Real-Time RT-PCR同样支持上述结果;免疫细胞化学结果表明,2-ME2对蜕膜化基质细胞ER表达无影响.结论:2-甲氧雌二醇可降低蜕膜化基质细胞VEGF的表达,但与ER表达不相关.
关键词： 2-甲氧雌二醇 血管生成 子宫内膜蜕膜化 血管内皮生长因子(VEGF)
