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染色体22q11.2微缺失综合征的临床诊断
22q11.2缺失综合征(22q11.2 deletion syndrome,22q11.2 DS)主要包括了以临床特征定义的DiGeorge综合征(DiGeorge syndrome,DGS)、腭-心-面综合征(velocardiofacial syndrome,VCFS)和圆锥动脉干-异常面容综合征(conotruncal anomaly face syndrome,CAFS)等,上述综合征均具有共同的遗传学基础,即22q11微缺失的比例均较高,分别为88%、85%和100%.
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相关成纤维细胞自噬调控对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化影响
目的 研究报道,乳腺癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)在乳腺癌的侵袭、转移中起到促进作用,而机制未明.本研究探讨乳腺癌CAFs自噬调控对MCF-7细胞EMT进程的影响.方法 采用胶原酶消化法对CAFs及配对人乳腺癌正常成纤维细胞(NBFs)进行原代培养,采用免疫荧光和蛋白质印迹法进行鉴定;建立CAFs和NBFs与MCF-7条件培养基(CM)共培养及Transwell小室共培养模型,共分为3组进行实验,空白组即MCF-7单独培养组(CON),对照组即正常乳腺癌成纤维细胞与MCF-7共培组(NBFs),实验组即乳腺癌相关成纤维细胞与MCF-7共培养组(CAFs).Transwell侵袭及迁移实验检测各组MCF-7细胞侵袭和迁移能力.蛋白印迹法检测各组MCF-7细胞EMT上皮标志分子E-cadherin蛋白和间质标志分子N-cadherin和Vimentin蛋白表达情况;蛋白质印迹法检测CAFs与NBFs自噬相关蛋白LC3B、Beclin1和p62表达差异;自噬抑制剂3MA处理CAFs后蛋白质印迹法检测CAFs上述自噬相关蛋白表达差异;予以自噬抑制剂3MA预处理CAFs后,收集CM与MCF-7共培养,分3组进行实验,空白组即MCF-7单独培养组(CON);对照组即MCF-7与CAFs-CM共培养组(CAFs-CM);实验组即MCF-7与3MA-CAFs-CM共培养组(3MA-CAFs-CM).蛋白质印迹法检测各组MCF-7细胞EMT上皮标志分子E-cadherin蛋白和间质标志分子N-cadherin和Vimentin蛋白表达情况.结果 通过酶消化法原代培养可获取α-SMA(+)、Vimentin(+)E-cadherin(-)具有CAFs典型特征的肌成纤维细胞;Transwell侵袭、迁移实验证实CAFs可促进MCF-7细胞侵袭、迁移;蛋白质印迹法检测显示,CAFs组MCF-7 E-cadherin蛋白表达量为0.432±0.012,比NBFs组的0.585±0.02及空白组的0.659±0.016表达水平低,F=120.098,P<0.05.而CAFs组间质蛋白标志物Vimentin蛋白表达量为0.309±0.065,比NBFs组的0.103±0.011及空白组的0.062±0.009表达低,F=42.395,P均<0.05.CAFs组N-cadherin蛋白表达量为1.439±0.07比BNFs组的1.3347±0.028及空白组的1.176±0.021表达低,F=22.578,P<0.05,提示CAFs促进MCF-7发生EMT;CAFs细胞的Beclin1蛋白表达量为2.950±1.261,高于NBFs的0.862±0.727,t=-3.21,P<0.05;CAFs细胞的LC3BⅡ/LC3BⅠ灰度值比值为2.937±0.194,高于NBFs的2.314±0.224,t=-3.638,P<0.05;而CAFs p62蛋白表达量为0.342±0.093,低于NBFs的0.750±0.021,t=7.432,P<0.05,提示CAFs自噬水平高于NBFs.予以自噬抑制剂3MA处理CAFs后,处理组CAFs细胞的Beclin1蛋白表达量为0.211±0.008,低于未处理组的0.266±0.009,t=8.094,P<0.05;处理组CAFs细胞的LC3BⅡ/LC3BⅠ灰度值比值为0.496±0.004,低于未处理组的0.618±0.022,t=9.312,P<0.05;而处理组的p62蛋白表达量为0.307±0.043,高于未处理组的0.143±0.008,t=-6.471,P<0.05,说明3MA可以抑制CAFs自噬水平.自噬调控后共培养,各组E-cadherin蛋白表达有统计学意义,F=44.157,P<0.05;与对照组MCF-7细胞E-cadherin蛋白表达量1.209±0.010相比,CAFs-CM组的1.062±0.027表达下调,而3MA-CAFs-CM组MCF-7细胞E-cadherin蛋白表达量为1.104±0.019,较CAFs-CM组表达上调,均P<0.05;3组MCF-7细胞Vimentin和N-cadherin表达差异有统计学意义,P<0.05.结论 CAFs能够促进MCF-7发生EMT并增强其侵袭转移能力,而抑制CAFs自噬后,其诱导的MCF-7发生EMT进程受到抑制.
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人乳腺癌相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞的影响
目的 探讨人乳腺癌相关成纤维(cancer associated fibroblasts,CAFs)细胞对MDA-MB-231细胞生长、增殖和侵袭的影响.方法 实验分2组:MDA-MB-231细胞单独培养组(对照组)和MDA-MB-231与CAFs细胞共培养组(实验组).以细胞计数法观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞生长的影响;运用流式细胞术检测人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞周期的影响;采用条件培养基,通过Transwell小室侵袭实验观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响.结果 与对照组比较,实验组MDA-MB-231细胞的生长速度明显增强(P＜0.05),细胞周期S期细胞百分比[(32.35±4.50)％]和细胞增殖指数PI[(42.91 ±2.44)％]明显增高(P＜0.05);在CAFs细胞的条件培养基下,MDA-MB-231细胞的侵袭能力明显增强(P＜0.01).结论 人乳腺癌CAFs细胞能够显著促进MDA-MB-231细胞的生长、增殖和侵袭.
关键词： 乳腺癌微环境 CAFS MDA-MB-231细胞 -
CAFs与肺腺癌患者临床病理特征及肿瘤浸润免疫细胞的相关性研究
目的 观察α-SMA+的肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肺腺癌患者临床病理特征及肿瘤浸润免疫细胞的相关性,为认识CAFs在肺腺癌发生中的作用提供依据,并将为临床肺腺癌的诊疗提供新思路.方法 收集56例临床手术切除且病理诊断为原发肺腺癌的肿瘤组织标本,收集患者一般情况及临床病理学特征等资料.免疫组织化学染色方法检测肺腺癌患者肿瘤标本中α-SMA、CD4、CD8及CD33的表达情况,病理学方法计数间质细胞及α-SMA阳性的CAFs,统计学方法分析CAFs比例与患者临床病理特征及肿瘤浸润免疫细胞的相关性.结果 α-SMA+ CAFs比例与患者吸烟及肿瘤TNM (tumor,node,metastasis)分期呈正相关(P＜0.05),与肿瘤分化程度呈负相关(P＜0.05),但与患者年龄、性别及肿瘤浸润CD4+T细胞、CD8+T细胞及MDSCs (myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的数量无明显相关.结论 α-SMA+CAFs与肺腺癌的发生发展密切相关,其与肿瘤临床分期及分化程度的相关性提示其在肺腺癌的发生发展中起促进作用,对其深入机制的阐明将有助于完善肺腺癌的发生机制并将为其治疗提供新思路.
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FAP 在大肠癌中表达的临床病理意义
目的：探讨人大肠癌组织中 FAP 表达与其临床病理特征的关系。方法：采用免疫组化 EN 法检测145例大肠癌组织中 FAP 的表达。结果：FAP 半定量计数、表达浓度与肿瘤分期呈正相关（P ＝0．02，P ＝0．01），即在临床分期高的肿瘤组织中，FAP 表达的量及浓度都显著增高；FAP 染色与肿瘤分级之间没有明显的相关性（P ＞0．05）。结论：FAP 高表达可能与大肠癌的浸润生长及转移有密切关系。
