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吲哚胺2,3双加氧酶表达对人胃癌细胞免疫逃逸的影响
目的 探讨转染人吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因的胃癌细胞系的IDO表达与免疫逃逸的关系.方法 根据IDO基因编码序列,构建真核表达载体pIRES_2-EGFP-IDO,电转染胃癌BGC-823细胞,用G418筛选稳定表达IDO细胞株.用RT-PCR和Western blot检测其IDO mRNA和IDO蛋白表达,测定培养上清中色氨酸和犬尿氨酸的水平.分离胃癌患者外周血T细胞,与转染细胞及加入1甲基色氨酸(1-MT)的细胞共孵育,检测对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和T细胞增殖的影响.结果 pIRES_2-EGFP-IDO真核载体经酶切验证并测序后证实连接成功.稳定表达IDO的BGC-823细胞IDO mRNA明显高于未转染组和对照组,并有IDO蛋白表达.转染组和未转染组色氨酸水平分别为(3.23±0.53)mg/L、(6.03±0.51)mg/L(t=13.32,P=0.000),犬尿氨酸浓度分别为(4.84±0.11)mg/L、(1.83±0.10)mg/L(t=42.916,P=0.000).转染IDO组、1-MT逆转组、转染空质粒组、BGC-823组之间对T淋巴细胞增殖抑制相比差异均有统计学意义(F=114.817,P=0.000),转染IDO组和1-MT逆转组抑制率明显高于转染空质粒组及BGC-823组,同时逆转组抑制率低于转染IDO组(P<0.05).4组CTL杀伤活性之间相比差异均有统计学意义(F=397.449,P=0.000).转染IDO组和1-MT逆转组杀伤活性明显低于转染空质粒组及BGC-823组,同时逆转组CTL杀伤活性也明显高于转染IDO组(P<0.05).结论 IDO转染胃癌细胞后显示IDO抑制了T细胞的增殖和CTL活性,参与胃癌的免疫逃逸作用.
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IDO和Foxp3在胚胎反复植入失败患者黄体中期的表达
目的:探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)和叉头状转录因子3(Foxp3)基因在胚胎反复植入失败中的作用.方法:采用荧光定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定50例胚胎反复植入失败患者(组1)黄体中期Foxp3和IDO基因的表达,并与50例正常生育能力妇女(组2)和50例首次行体外受精-胚胎移植(IVFET)并妊娠的妇女(组3)进行比较.结果:3组黄体中期外周血Foxp3 mRNA和IDO mRNA表达比较差异有统计学意义(P＜0.05);组2和组3 Foxp3 mRNA及IDO mRNA的表达均高于组1(均P=0.000),组2 Foxp3 mRNA及IDO mRNA的表达高于组3(均P＜ 0.05).结论:Foxp3 mRNA和IDO mRNA在黄体中期的低表达可能是反复植入失败的免疫性不孕原因.
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吲哚胺2,3-双加氧酶在结核病诊断和治疗中的作用
结核病仍然威胁大众健康.尽管诊疗手段越来越丰富,但仍没有令人满意的诊断方法,治疗上也存在挑战,特别是耐多药结核病.因此迫切需要寻求更完善的的结核病诊断手段,开发新的治疗途径,提高抗结核治疗效果,改善结核病预后.吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)是色氨酸(Trp)分解代谢为犬尿氨酸(Kyn)的关键限速酶,参与细胞免疫功能的调节,特别是T细胞的免疫功能.本文综述了IDO在免疫调节的作用机制、地位,特别是在结核病发生、发展中的作用,有望成为结核病的诊断标志物和免疫治疗靶标.
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应用3,4-DAA介导IDO高表达诱导小鼠皮肤移植免疫负向调节的研究
目的 探索N-3,4-二甲基氧基肉桂酰-邻氨基苯甲酸(3,4-DAA)通过吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)高表达介导小鼠皮肤移植免疫负向调节的作用及其机制.方法 建立小鼠皮肤移植模型,收集受鼠脾脏淋巴细胞及血清,检测白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)含量;流式细胞仪测定T淋巴细胞各亚群;RT-PCR检测IDO信使RNA(mRNA)基因表达水平.结果 3,4-DAA对小鼠脾脏淋巴细胞增殖有显著抑制作用,并呈现剂量效应关系.3,4-DAA可显著抑制小鼠IL-2和IFN-γ的产生(P＜0.05).3,4-DAA处理组CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率呈现下降趋势,同时调节性T淋巴细胞百分率增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).3,4-DAA处理组IDO mRNA基因表达较对照组均显著增高(P＜0.05).结论 3,4-DAA可抑制T淋巴细胞增殖,并通过上调IDO高表达下调移植物免疫应答反应,显示出免疫负向调节的效应.
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小鼠肠移植术前输注表达吲哚胺2,3双加氧酶的供者树突细胞抑制排斥反应
目的 观察干扰素γ(IFN-γ)诱导供者(C57BL/6小鼠)脾树突细胞(DC)表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的情况;研究受者(BalB/c小鼠)小肠移植术前输注高表达IDO的供者DC对排斥反应的抑制作用.方法 用IFN-γ诱导供者DC表达IDO;半定量逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法及毛细管电泳法检测IDO表达水平及活性,混合淋巴细胞培养(MLR)测定IDO刺激T细胞增殖的能力.利用小鼠异位小肠移植模型,设单纯移植组、DC输注移植组(术前输注供者脾DC 2×106个)及诱导DC输注移植组(术前输注经IFN-γ诱导的供者脾DC 2×106个),术后观察移植肠存活时间并行病理学检查.结果 经IFN-γ诱导的脾DC IDO分子mRNA转录水平(相对量)、IDO蛋白表达水平(相对量)及培养液中犬尿氨酸浓度分别为(1.23±0.02)、(2.74±0.01)以及(76.52±0.44)μmol/L,未经IFN-γ诱导的脾DC分别为(1.05±0.05)、(1.40±0.17)及(43.31±0.48)μmol/L,前者显著增强(P＜0.01).脾DC对同种T细胞增殖的刺激作用在IFN-γ诱导后减弱,在加入IDO的特异性抑制剂后增强.输注诱导DC移植组移植肠中位存活时间(12 d)较单纯移植组(6 d)及输注DC移植组(7.5 d)显著延长(P＜0.01),而移植肠病理分级显著性降低(P＜0.05).结论 IFN-γ可诱导小鼠脾DC高表达活性的IDO,后者可减弱DC刺激T细胞增殖的能力.受者术前输注高表达IDO的供者DC能够诱导针对供者的特异性免疫耐受而减轻排斥反应.
