首页 > 文献资料
-
构建韧带组织工程脱细胞支架的可行性研究
背景:十二烷基磺酸钠脱细胞在脱细胞的同时对支架结构存在一定的损伤,降低了支架的生物学性能;胰酶等脱细胞方法较为温和,虽大程度保留支架结构与生物学性能,但脱细胞效果并不彻底.目的:制备并分析脱细胞牛肌腱作为组织工程韧带支架的可行性.方法:取新鲜小牛跟腱,通过物理法去除肌腱表面腱膜、滑膜及软组织,制备50个跟腱,随机分为两组,均行冻干处理.实验组以Triton X-1 00行脱细胞处理,对照组不予脱细胞处理.两组均以PBS冲洗后室温干燥备用.行组织学、DNA含量、细胞增殖、生物力学(大应力、弹性模量以及刚度)检测,比较两组的差异.结果:对照组和实验组的DNA残留量分别为(0.34±0.15)μg/mg和(0.7±0.03)μg/mg,实验组显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组与对照组支架DNA含量对比显示,支架脱细胞效果彻底,无显著的免疫原性.两组在组织形态结构上无明显差异.细胞增殖显示脱细胞支架对细胞增殖无明显影响.实验组的大应力小于对照组,弹性模量无统计学差异,刚度试验显示两组无明显差异.结论:脱细胞支架在保留天然支架生物学性能的基础上可作为组织工程支架的选择.
-
组织工程韧带相关研究进展
前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)连接股骨与胫骨,主要作用是限制胫骨向前过度移位,维持膝关节的稳定性.ACL极容易部分撕裂或完全断裂而导致疼痛、不适、膝关节不稳和关节松弛,终引起创伤性骨关节炎[1].文献研究表明,ACL损伤发生率为35/100000人,其中女性运动员的发生率是男性运动员的2～8倍[2-4].由于ACL其自身解剖结构及血液供应分布等特点,目前ACL的手术治疗主要局限于减轻疼痛或者组织重建替代,并不能完全恢复ACL的组织功能.
-
膝关节韧带组织工程的研究进展
目的:对目前膝关节组织工程韧带在体内外的研究进展,应用及价值进行综述.方法:查阅国内外近年来关于组织工程韧带构建治疗膝关节韧带损伤的相关应用文献,对包括种子细胞、生长因子和支架材料三大要素对构建膝关节组织工程化韧带的研究进展进行总结.结果:种子细胞、支架材料的筛选和适当的生长因子是构建膝关节组织工程韧带的核心和必要条件.种子细胞培养条件的优化和生长因子的浓度选择及配比是构建良好组织工程韧带的关键,而实现膝关节组织工程韧带在体内存活和更好发挥生物学效用,仍需进一步研究.随着生物医学及材料科学的发展,膝关节组织工程韧带的构建方法及方式在不断改进.
-
目前人工韧带与组织工程韧带的研究现状
交叉韧带损伤后,由于其愈合能力较差,因此长期以来,对重建交叉韧带使用材料的研究从未停止过.本文主要对细胞因子在组织工程学韧带中的应用、基因转染技术在组织工程韧带研究中的应用、组织工程韧带附丽的基础研究,骨和组织工程韧带之间的愈合关系作了较详细介绍.另外,对人工合成韧带、胶原支架韧带也作了概述.
-
组织工程韧带/肌腱支架材料的研究进展
理想的组织工程韧带和肌腱的支架材料需具备耐受持续的高强度张力、耐磨损性好、无免疫原性、良好的生物相容性及降解性.目前应用于组织工程韧带及肌腱的支架材料主要可分为两大类,天然高分子材料与合成高分子材料.选择合适的支架材料非常关键,它必须具有一定的机械强度及合适的降解速度,才能在完成支架的使命后为正常组织的生长留出空间.本文对这两种材料制备的韧带和肌腱的研究进展作如下综述.
-
TGF-β1联合VEGF对人羊膜间充质干细胞向韧带成纤维细胞体外分化作用的研究
目的 探讨人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)是否具有MSCs特性,以及经TGF-β1和VEGF联合诱导后是否具有向韧带成纤维细胞分化的能力.方法 取自愿捐赠的足月产妇胎盘,采用胰蛋白酶胶原酶联合消化法分离培养hAMSCs,流式细胞术检测hAMSCs表型分子,免疫荧光染色检测hAMSCs其角蛋白-19 (cytokeratin-19,CK-19)和波形蛋白表达情况.取第3代hAMSCs,分别使用含TGF-β1和VEGF的L-DMEM/F12成韧带或纤维细胞诱导培养基(实验组)和普通L-DMEM/F12培养基(对照组)培养,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;培养5、10、15d分别采用免疫荧光染色及实时荧光定量PCR检测韧带及血管生成相关特异性蛋白和基因表达.结果 倒置相差显微镜观察示hAMSCs呈单层贴壁生长;流式细胞术结果示hAMSCs表达MSCs表型分子;免疫荧光染色示hAMSCs高表达波形蛋白、低表达CK-19;hAMSCs具有向成骨、成软骨及成脂细胞分化的能力.CCK-8法检测示,7d时两组细胞均达增殖高峰,实验组细胞增殖能力于7d后显著高于对照组(P＜0.05).免疫荧光染色示,培养5、10、15d时实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin)、细胞连接素(Tenascin-C)表达染色均较对照组增强.实时荧光定量PCR结果示,随时间延长实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、VEGF mRNA相对表达量均逐渐上调(P＜0.05).除培养5d两组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、VEGF mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各时间点实验组Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、α-SMA和VEGF mRNA相对表达量均显著高于对照组(P＜0.05).结论 hAMSCs具有MSCs特征,且体外增殖能力良好,可作为组织工程种子细胞来源;体外诱导后韧带成纤维细胞及血管生成相关特异性基因表达上调,韧带成纤维细胞特异性蛋白分泌增加,TGF-β1联合VEGF可作为构建组织工程韧带的生长因子选择.
-
组织工程韧带的研究进展
目的 对组织工程韧带的研究进展进行综述.方法 广泛查阅近年来有关组织工程韧带构建及其在前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤中应用的文献,对构建相关的种子细胞、支架材料、生长因子和力学刺激的研究进展进行总结.结果 利用MSCs和ACL成纤维细胞构建的组织工程韧带目前已成功应用于动物实验.选择合适的种子细胞、支架材料、力学刺激及必要的细胞因子是构建良好组织工程韧带的关键.培养条件的进一步优化以及如何实现组织工程韧带在体内更好的存活和转归,尚需进一步研究.结论 组织工程韧带构建及其在ACL的修复再生方面取得了巨大进步,随着生物化学及支架材料的发展其有望用于临床.
-
脱细胞跟腱复合人成纤维细胞共培养的实验研究
目的 探讨脱细胞跟腱的制备及其与人成纤维细胞复合培养效果,为组织工程韧带的构建提供一种支架材料. 方法 取10只5月龄雄性新西兰大白兔(体重4～5 kg)双后肢跟腱,经胰蛋白酶、Triton X-100、SDS脱细胞处理后,行大体、组织学及扫描电镜观察.将脱细胞跟腱与人成纤维细胞复合培养,于培养1、3、5、7、9d行细胞相容性检测,并于4周后取材行组织学、扫描电镜观察以及生物力学检测,并与脱细胞前、后跟腱进行比较. 结果 跟腱经脱细胞处理后腱膜完整,质柔软、韧性好,体积较处理前跟腱显著增大;跟腱腱束间未见疏松结缔组织及腱细胞,胶原纤维排列疏松,呈三维网状分布,腱束间残留较多孔隙;且细胞相容性良好.复合培养4周后,细胞迁移至纤维束间的孔隙内,三维网状结构消失.生物力学测试示,与脱细胞前跟腱组及细胞-支架复合组比较,脱细胞跟腱组拉伸强度及杨氏弹性模量均显著降低(P＜0.05),细胞-支架复合组与脱细胞前跟腱组比较差异无统计学意义(P＞0.05);各组间断裂伸长率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 兔脱细胞跟腱与人成纤维细胞生物相容性良好,可作为支架材料用于组织工程韧带构建.
