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新型双相陶瓷材料复合成骨细胞构建人工骨及其体内成骨的观察
目的观察骨髓来源的成骨细胞与新型双相陶瓷材料复合培养后细胞生长状况及其体内异位成骨能力.方法将来源于兔骨髓的成骨细胞与新法制备的HA/TCP共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况;然后将复合物自体异位植入体内,6周后观察体内成骨情况.结果扫描电镜显示材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长;植入体内6周后取材见内植物有新骨形成、多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构.结论新型双相陶瓷支架可用作组织工程骨的细胞外基质材料,骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞.
关键词： 羟基磷灰石/磷酸三钙 成骨细胞 培养 组织工程 -
骨髓间质干细胞介导用于颌面整形的动物实验研究
目的体外扩增小型猪骨髓间质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs),研究其介导颌面整形的可行性.方法分离培养小型猪BMMSCs,扩增后接种到预制的羟基磷灰石/磷酸三钙(hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP)材料上,分别自体回植入小型猪额骨骨膜下,定期行X线、CT检查.术后12周和20周分别处死动物,取材后进行组织学和扫描电镜检查分析.结果动物额部外形术后明显改变.植入之BMMSCs-HA/TCP复合体与额骨表面紧密融合,强度似骨,复合体内广泛分布着新生骨组织,成骨性好.结论经培养扩增的BMMSCs与HA/TCP复合植入额骨骨膜下在额骨表面形成骨组织,可用来改变面部形态,为颌面整形治疗提供了新的思路.
关键词： 骨髓间质干细胞 羟基磷灰石/磷酸三钙 小型猪 整形治疗 -
Leptin对人牙周膜细胞骨向分化作用的实验研究
目的 探讨瘦素( leptin)对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用.方法 采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同浓度梯度的leptin处理细胞,通过四唑盐(MTT)比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测leptin对细胞体外增殖分化的影响.将人牙周膜细胞与羟基磷灰石/磷酸三钙材料作为复合体,植入BALBc免疫缺陷裸鼠,12周后采用组织学和免疫组化法检测裸鼠体内生成物.结果 体外实验leptin对人牙周膜细胞增殖有明显抑制作用,但leptin能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达.体内试验中leptin可提高牙周膜细胞生成类骨质的能力.结论 leptin抑制牙周膜细胞的增殖活性,但可明显促进牙周膜细胞骨向分化.
关键词： 瘦素 牙周膜细胞 增殖 羟基磷灰石/磷酸三钙 骨向分化 -
骨髓基质成骨细胞复合支架材料构建组织工程性肌骨瓣的实验研究
目的探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣修复骨缺损的能力.方法自2004年12月至2005年5月,于新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,然后与HA/TCP结合,共培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况,后将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣.术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况.结果扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构.结论骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,此种组织工程性肌骨瓣生长良好,可成功构建组织工程化骨.
关键词： 骨髓基质干细胞 羟基磷灰石/磷酸三钙 肌骨瓣 组织工程 -
重组骨生长肽对组织工程性骨肌皮瓣影响的实验研究
目的 探讨重组骨生长肽对组织工程性骨肌皮瓣的影响.方法 自2004年12月至2005年5月,采用新西兰大耳白兔36只,在其髂后上棘抽取骨髓基质干细胞进行体外培养,诱导分化为成骨细胞.然后将第3代细胞与羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)、重组骨生长肽结合,共同培养14 d后,经相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞的生长情况,后分别将72块复合物植入36只白兔的双侧背阔肌中,构成组织工程骨肌皮瓣.含重组骨生长肽的一侧为实验组;含成骨细胞的一侧为对照组.术后6周,进行大体解剖观察,行HE染色,观察骨肌皮瓣的生长情况.结果 骨髓基质干细胞可以诱导分化为成骨细胞,钙盐沉积,可形成不透光的矿化结节.在不同时间的骨髓基质干细胞,实验组ALP活性较对照组高(P＜0.05),并表现为时间依赖性.扫描电镜显示:支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动.两组均可形成肌骨瓣,但实验组在成骨速度、成骨质量、血管化程度等方面均优于对照组.结论 应用重组骨生长肽可成功地构建组织工程性骨肌皮瓣.
关键词： 重组骨生长肽 羟基磷灰石/磷酸三钙 骨肌皮瓣 组织工程 -
预制作生物工程性肌骨瓣的实验研究
目的 探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣的方法,为修复骨缺损奠定基础.方法 自2004年12月至2006年1月,将36只新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,与HA/TCP结合培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况.将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣.术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况.结果 扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构.结论 骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,与HA/TCP结合构建出组织工程性肌骨瓣.
关键词： 骨髓基质干细胞 羟基磷灰石/磷酸三钙 肌骨瓣 组织工程 -
同种异基因组织工程骨修复骨缺损IFN -γ和IL -10的表达
[目的]通过检测同种异基因组织工程骨(tissue engineering bone,TEB)修复骨缺损血清IFN -γ、IL - 10水平和脾内IFN-γmRNA、IL-10mRNA的表达,探讨同种异基因TEB的免疫原性.[方法]Ficoll - Hypaque梯度密度离心法分离出成年兔骨髓间充质干细胞(MSCs),培养扩增.取第3代细胞,化学法诱导成成骨细胞(ODC).将ODC按1×109/L密度接种至羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP),共同培养,构建TEB.动物随机分三组(TEB,HA/TCP组,自体骨组),每组24只,人为造成兔左桡骨处1.0 cm左右长创伤性骨缺损,植入TEB、HA/TCP、自体骨.观察伤口愈合情况；于术后第4、10 d、6周,麻醉下取下腔静脉血ELISA法测血清IFN -γ、IL - 10水平；取脾行HE染色观察；RT- PCR测IFN -γ、IL - 10 mRNA表达.[结果]各组动物IL - 10、IL - 10 mRNA比IFN -γ和IFN-γ mRNA高,其中TEB组IFN -γ和IFN -γ mRNA较其他两组稍高,IL - 10和IL - 10 mRNA较其他两组稍低,IFN -γ、IL - 10水平和IFN - γmRNA、IL - 10 mRNA表达同组前后比较有统计学差异(P＜0.05),组间比较没有差异(P＞0.05).[结论]由同种异基因MSCs诱导而成的ODC与HA/TCP构建的TEB免疫原性极低,可以用于修复骨缺损.
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兔下颌骨来源骨髓间充质干细胞生物学行为及其体内成骨的研究
目的:探讨兔下颌骨来源的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)体外分离、培养及其生物学行为,评价下颌骨BMMSCs体内成骨的效果.方法:取兔下颌骨中的松质骨,贴壁培养,取第P2或P3代检测:1)倒置显微镜下观察细胞生长状态；2)MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线；3)向成骨细胞和脂肪细胞诱导分化；4)将P3代BMMSCs与羟基磷灰石/磷酸三钙(Hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP)复合,自体回植；单纯HA/TCP植入做对照.术后8周和20周,通过组织学观察评价体内成骨的效果.结果:1)细胞经传代后形态一致；2)细胞生长曲线显示下颌骨BMMSCs经历潜伏期、对数生长期和平台期；3)成骨诱导、成脂诱导后形成钙结节及脂滴,茜素红、油红O染色呈阳性；4)体内成骨显示术后8周BMMSCs-HA/TCP组空隙内新骨形成；术后20周大量新骨形成,HA/TCP大部已降解.单纯HA/TCP植入组术后8周未见新骨形成；20周大部HA/TCP降解,仍未见新骨形成.结论:兔下颌骨分离出的BMMSCs,具有强大的自我复制、增殖能力及多向诱导分化的潜能,并能体内成骨.
关键词： 下颌骨 间充质干细胞 生物学行为 体内成骨 羟基磷灰石/磷酸三钙 -
羟基磷灰石/磷酸三钙生物材料植入小鼠体内的血管化过程
本研究旨在探讨羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)生物陶瓷材料植入小鼠体内骨诱导过程中新生血管的形成过程.将HA/TCP材料植入小鼠肌肉中,手术后2、4、6、8、10和12周,收获材料制备连续切片,通过观察HE染色图片动态描述新生血管形成过程,并定量分析新生血管形成百分比.结果显示新生血管形成是一个连续、动态的过程,其在第2周时就大量生成,4周时呈增长趋势,6周时达到峰值,8周后逐步减少.本研究结果为提高骨组织工程成功率提供了思路,也从血管化方面揭示了骨诱导形成的机制.
关键词： 羟基磷灰石/磷酸三钙 血管化 骨诱导 骨组织工程 -
剂量因素对羟基磷灰石/磷酸三钙成骨细胞相容性的影响
目的检测不同剂量的羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)对兔成骨细胞增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,明确材料的剂量因素在研究HA/TCP细胞相容性中的作用规律. 方法以兔成骨细胞为正常对照,细胞加入钛合金材料组为阴性对照,细胞加入聚氯乙烯材料组为阳性对照.选择三种材料剂量,以材料占细胞面积的比例表示,分别为10%、40%和70% .将各组材料与兔成骨细胞复合培养,MTT法检测不同时间点、不同剂量材料作用下兔成骨细胞增殖的情况;偶氮偶联法检测不同时间点、不同剂量材料作用下兔成骨细胞表达ALP的变化. 结果正常兔成骨细胞的生长呈现时间-效应关系.与正常对照相比,10% HA/TCP不会对兔成骨细胞的生长产生影响(P>0.05);当HA/TCP剂量增大为40%,细胞的生长速度明显变缓(P<0.05),细胞的生长仍呈现时间-效应关系;70%的HA/TCP使细胞生长趋于停滞(P<0.01).10%HA/TCP可造成细胞ALP活性可逆性损伤,HA/TCP浓度达40%时,ALP活性损伤至共培养6天不可逆转.相对而言,惰性金属硬组织材料钛合金在检测三种剂量下均对细胞生长及细胞ALP活性不会产生影响. 结论评价材料的细胞相容性应向材料接触剂量个体化、特异化的方向发展;除增殖指标之外,ALP也可作为评价骨生物材料细胞相容性的另一个敏感指标.
关键词： 羟基磷灰石/磷酸三钙 成骨细胞 生物相容性 -
瘦素对人牙髓干细胞骨向分化作用的实验研究
目的:探讨瘦素(leptin)对人牙髓干细胞(Human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和骨向分化的影响.方法:采用酶消化法体外培养人牙髓干细胞,分别加阶梯浓度leptin处理,通过四唑盐(MTT)比色试验和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测试来检测瘦素对牙髓干细胞体外增殖分化的影响；再将人牙髓干细胞与羟基磷灰石/磷酸三钙材料制作为复合体植入免疫缺陷裸鼠,12周后采用组织学和免疫组化方法检测体内生成物.结果:瘦素对人牙髓干细胞细胞增殖无明显促进作用,但leptin能促进人牙髓干细胞碱性磷酸酶的活性表达；体内试验证明leptin可提高牙髓干细胞向成成牙本质细胞分化及生成类牙本质的能力.结论:瘦素对人牙髓干细胞的增殖活性无明显作用,但人牙髓干细胞与羟基磷灰石磷酸三钙制作为复合体,可明显促进人牙髓干细胞骨向分化.
关键词： 瘦素 牙髓干细胞 增殖 羟基磷灰石/磷酸三钙 骨向分化
