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不同核酸提取方法对EB病毒DNA准确定量的影响
目前,血液中EB病毒DNA检测主要采用聚合酶链式反应(PCR)技术.荧光定量PCR又称实时定量PCR,是近年开发出来的全新PCR技术,可以全程、动态、不间断地光学监控被荧光标记的PCR反应,以此来评价被检测标本中的DNA 含量,能反映PCR 扩增动力学变化,实现实时定量检测,具有快速、准确、不易被污染等优点[1-3].
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模式小鼠总 DNA 三种提取方法比较
目的：建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法，以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA，对比DNA纯度、得率、耗费时间，并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率高，异丙醇沉淀法低；而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减；在耗时上鼠耳煮沸法短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本低，快速、基因型鉴定结果可靠，可用于规模化的基因型鉴定实验中。
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30只鸭子中甲型流感病毒的检测
目的了解近期禽宰场流感病毒在鸭子中的携带情况.方法在禽宰场随机选择正常健康状况待宰鸭子30只,分别取咽和肛门混合拭子,使用鸡胚培养扩增,血凝法初筛,甲型流感病毒核蛋白(NP)蛋白保守核酸序列作扩增鉴定.结果在30份样品中,经鸡胚培养扩增,1∶50的血凝法初筛50%为阳性,经核酸聚合酶链反应扩增鉴定10份样品中,9份为甲型流感病毒.结论用本方法在正常鸭子中甲型流感病毒的可检出携带率约为45%.
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多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用
现在全球常见的公共卫生问题中,食源性疾病排在首位,其主要原因是食品污染,主要病原菌有沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌[1].因此,为了快速的、有效地检测出病原菌,减少或预防食源性疾病的发生,临床工作者和检疫部门研究出效率更高的多重PCR检测法.多重PCR检测法是一种更优于PCR的特殊技术,在同一体系中可以加入多种引物,并对多个待检基因进行扩增,检测多种病原体也只需一次PCR反应,因此,在鉴别诊断混合感染时多重PCR技术具有更加方便、快捷、高效率的优势[2].本文中,我们就多重PCR在沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染诊断中的应用效果进行观察,并将结果总结报道如下.
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辽宁省2012年-2016年腹泻症候群细菌病原学研究分析
目的 了解辽宁省腹泻症候群细菌病原谱构成,对临床诊断、治疗用药与预防突发公共卫生事件提供依据.方法 对2012年-2016年辽宁省腹泻症候群临床患者粪便标本检测结果进行分析,了解病原谱构成情况.结果 1 307份样本中,检出7种细菌病原核酸242份,检出率为18.52％,混合感染占4.12％.致泻性大肠埃希菌47份(3.60％),非伤寒沙门菌33份(2.52％),志贺菌7份(0.54％),副溶血性弧菌119份(9.10％),嗜水气邻单胞菌28份(2.14％),类志贺邻单胞菌6份(0.46％),霍乱弧菌2份(0.15％).结论 构成辽宁省腹泻症侯群细菌病原种类繁多,主要以副溶血性弧菌、致泻性大肠埃希菌为主.其中副溶血性弧菌是本地区主要的细菌感染病原.
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何首乌扩增长度多态性反应及银染体系的建立
目的 通过对各主要影响因素的研究,建立适于何首乌扩增长度多态性(AFLP)反应体系及银染体系.方法 采用改进的CTAB提取方法从何首乌的嫩叶中提取获得总DNA;从酶切DNA的量、时间等考察酶切体系,并设计正交实验进行预扩体系和选扩体系的优化.结果 酶切体系DNA的适用量为400 ng,37 ℃酶切5 h;用较优的预扩增体系和选择性扩增得到的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,得到清晰的指纹图谱.结论 所建立的反应体系可有效地应用于何首乌的分类鉴定和道地性鉴定.
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不同保存时间对人乳头瘤病毒DNA检测结果的影响
目的 研究不同保存时间对人乳头瘤病毒(HPV)DNA检测结果的影响.方法 收集HPV高危型标本,按病毒水平分为高水平组、中水平组和低水平组,每组各5例,每例分装成3份,其中1份立即提取DNA并进行检测(原始水平),检测后将其置于4℃冰箱保存(已提取DNA标本),其余2份标本直接置于4℃冰箱保存(未处理标本).分别于第2、4周对已提取DNA标本和未处理标本进行HPV DNA检测分析.结果 未处理标本和已提取DNA标本的3个水平组HPV DNA检测结果一致.高、中、低水平组第2周HPV DNA水平与对应的原始水平比较,差异无统计学意义(P>0.05).高、中水平组第4周HPV DNA水平与对应的原始水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);而低浓度组第4周HPV DNA水平降低甚至消失,无法进行检测.结论 适宜的保存温度和保存时间可保证HPV DNA水平的稳定,有利于指导标本的保存和复查工作.
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5个新的STR基因座的群体遗传学及法医学研究
目的 开发新的STR遗传标记应用于法医学个人识别和亲子鉴定.方法 采集成都汉族群体中113名无血缘关系个体的血样,对5个21号染色体STR基因座作PCR扩增,电泳分型.应用PowerStats软件分析等位基因频率和基因型分布,计算法医学应用理论值;采用2×2列联表及x2检验,检验21号染色体上5个STR基因座之间是否相互独立.结果 5个STR基因座的个人识别能力>0.85,非父排除率≥0.48;独立性检验证实5对基因座之间,即LFG21与LFG26、LFG20与LFG24、LFG21与LFG24、LFG24与LFG26以及LFG24与LFG29具有相对独立性,可在法医物证鉴定中同时应用.结论 初步筛选出了4个可作为法医学应用的候选STR基因座:LFG21、LFG24、LFG26、LFG29.
