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实时定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 Ct值扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。此时扩增是呈对数期增长根据样品扩增的Ct值就可计算出样品中所含的模板量。
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对数期继代对南方红豆杉细胞培养动力学的影响
目的解决南方红豆杉细胞生长缓慢及代谢水平低下的问题.方法对对数期(20 d)和静止期(30 d)的红豆杉细胞分别进行继代,在整个生长周期中测定了培养基中的碳源、氮源、磷酸盐的变化并分析了红豆杉细胞生长及紫杉醇的合成情况.结果对数期继代细胞吸收碳源和硝态氮早于静止期继代的细胞,且前者的比生长速度是后者的1.5倍,紫杉醇含量提高了近4倍.结论对数期继代有利于生物量的积累及紫杉醇的合成.
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重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因T程菌的发酵研究
目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF-Ⅰ表达的影响.方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究.结果在摇床转速为150、200、250 r/min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x/△ s分别为0.203、0.27、0.33干细胞产量分别为0.54、0.765、1.0g/L.平均生长速率分别为0.034、0.048、0.066 g/(L.h).细胞对数生长期分别为6、7 5、10h发酵罐上生物量由分批发酵的18(A600nm)提高到补料分批发酵的35(A600nm),表达量占细胞可溶性总蛋白质的10%.结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF-Ⅰ表达
关键词: 胰岛素样生长因子-I 基因工程菌 对数期 发酵