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血浆活化血管性vWF测定方法的建立与应用
目的 建立一种测定血浆活化vWF的双抗体夹心方法 .方法 利用骆马来源的抗-活化vWF抗体(一抗),辣根过氧化物酶标记兔抗人vWF多克隆抗体(二抗)建立双抗体夹心方法 .随机选取健康人66名,糖尿病患者30例、vWD-2B 10例、先天性血栓性TTP5例、后天性血栓性血小板减少性紫癜13例、疟疾13例进行血浆活化vWF的测定.以基于AU/vWFa-11抗体酶标方法 测得的代表活化vWF浓度的A值与vWF抗原浓度的比值来表示活化vWF.同时在62、125、250μg/L 3个不同的vWF抗原浓度情况下测定代表活化vWF浓度的A值并使用GraphPad Prism 4软件处理数据,在达到良好线性回归的前提下计算样本斜率/标准血浆斜率比值即血浆活化vWF.根据该数值的大小表示血浆vWF的活化程度.结果 用双抗体夹心测定血浆活化vWF法检测高、中、低浓度3份不同标准品的批内CV分别为4.21%、4.98%、6.32%;批间CV分别为6.34%、7.02%、7.69%.健康对照组血浆活化血友病因子测定值为0.74±0.35,健康对照组中男性与女性的血浆vWF抗原浓度分别为(7.29±5.15)×10~3μg/L和(9.42±4.67)×10~3μg/L,活化vWF分别为0.74±0.34和0.73±0.35,两组的差异均无统计学意义(t分别为1.352和0.04,P均＞0.05).在不同年龄组间,≥40岁组血浆vWF抗原浓度[(10.64±5.39)×10~3μg/L]高于＜40岁组[(6.11±2.84)×10~3μg/L],差异有统计学意义(t=8.24,P＜0.01);而血浆活化vWF在两年龄组间差异无统计学意义[≥40岁组0.70±0.38,＜40岁组0.78±0.29,t:1.02,P＞0.05].而糖尿病组、vWD-2B、先天性TTP、后天性TTP、疟疾等各疾病组血浆活化vWF水平比健康对照组明显增高(1.07±0.66、6.52±1.30、5.82±1.47、1.53±0.11、2.17±0.53),差异有统计学意义(F=10.23,P＜0.01).结论 成功地建立了一种测定血浆活化vWF的双抗体夹心方法 ,可以用来表示疾病状态时vWF的真实活化状态,为分析引起血浆活化vWF升高的机制提供重要依据.
关键词： von Willebrand因子 酶联免疫吸附测定 紫癜 血小板减少性 -
Graves病患者血管内皮细胞损伤的研究
研究Graves病患者血管内皮祖细胞(EPCs)及内皮细胞损伤标志物的水平变化,探讨其血管内皮细胞的损伤机制.方法:选择Graves病患者135例,包括未合并房颤(非房颤)组64例和合并房颤(房颤)组71例,选择同期体检健康者60例为对照组.采用ILACL-9000型血液凝固仪测定vW因子抗原(vWF:Ag),流式细胞仪计数EPCs,免疫磁珠法测定循环内皮细胞(CEC),ADVIA Centaur化学发光免疫分析仪测定游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)和游离甲状腺素(FT4).结果:与对照组比较,非房颤组CEC水平变化差异无统计学意义(P＞0.05),而vWF:Ag水平高于对照组,EPCs低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).房颤组vWF:Ag和CEC水平高于非房颤组,EPCs低于非房颤组,差异有统计学意义(P＜0.01).非房颤组患者FT3与vWF:Ag呈正相关(P＜0.01),与EPCs呈负相关(P＜0.01),各指标与FT4均未见明显相关性；房颤组FT3和FT4与各指标未见明显相关性.结论:合并房颤的Graves病患者由于外周血管中内皮细胞大量脱落,内皮祖细胞数量进一步减少,使其血管内皮损伤程度比未合并房颤的Graves患者更为严重,导致患者血栓风险增加.
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非体外循环冠脉搭桥术后不同治疗方案对凝血功能的影响
目的 探讨不同治疗方案对非体外循环冠状动脉搭桥术(OPCAB)后VII因子(FⅦ)、血管性血友病因子(vWF)、D-二聚体(D-dimer)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的影响.方法 根据阿司匹林和低分子肝素联合使用时间将60例OPCAB 患者随机分为A、B 组.于术前及术后4、14 d,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)发色底物法检测FVII和vWF,双抗体夹心法测定PAI-1,免疫渗滤法检测D-dimer.术后1、3个月门诊复查D-dimer,并进行比较分析.结果 术后4 d 2组患者FVII降低,vWF和PAI-1升高,均于术后14 d基本恢复至术前水平(均P <0.05),3个指标组间差异无统计学意义(均P > 0.05).D-dimer术后4 d~1个月显著升高,术后3个月时降至接近术前水平.且除术后14 d、1个月B组明显低于A组外,其余时点2组间差异均无统计学意义(P > 0.05).结论 OPCAB后患者出现一定程度的凝血、纤溶亢进状态,术后延长低分子肝素使用时间对FⅦ、vWF和PAI-1在术后14 d内变化影响不明显,可降低D-dimer.
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血浆内皮功能标志物在心脑血管病中的意义
病理状态下,内皮细胞可被激活、出现功能障碍和受损.内皮功能障碍在心脑血管病的发病过程中起着关键作用,并可通过外周血进行检测.von Willebrand因子浓度能预测冠心病和卒中风险;可溶性血栓调节素浓度与冠心病和卒中的预后相关;可溶性细胞间黏附分子-1能预测颈动脉粥样硬化、冠心病、周围动脉病和糖尿病风险;颈动脉粥样硬化、冠心病和糖尿病患者血浆可溶性E-选择素水平升高;内皮素-1水平升高预示发生充血性心力衰竭的风险增高;注射内皮祖细胞有词望成为治疗心脑血管病的一种新手段.
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脑梗塞时血浆血小板α颗粒膜蛋白及VWF的变化
目的探讨血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)及V0nWillebrand因子(VWF)在小儿脑梗塞时的变化及其作用.方法采用ELISA法测定了34例脑梗塞患儿血浆GMP-140及VWF,并与20例对照组比较.结果脑梗塞患儿急性期血浆GMP-140及VWF明显高于对照组和恢复期;恢复期血浆GMP-140与对照组相比无显著性差异,而VWF仍高于对照组;双侧脑梗塞患儿血浆GMP-140及VWF含量明显高于单侧脑梗塞患儿.结论 GMP-140及VWF参与了小儿脑梗塞的发病过程,且提示持续高水平的VWF可能是再次脑梗塞的潜在危险因素.
关键词： 儿童 脑梗塞 α颗粒膜蛋白 von Willebrand因子 -
CD62p 、vWF和脂联素水平与糖尿病肾病的关系
目的 观察血小板膜糖蛋白(CD62p)、血浆von Willebrand因子( vWF)和脂联素(APN)在糖尿病肾病(DN)各期的水平,探讨其在DN发生、发展中的作用.方法 采用Coulter EPICL-XL型流式细胞仪测定CD62p,应用酶联免疫吸附试验测定血清APN和血浆vWF,应用放射免疫法测定尿清蛋白.结果 未并发肾病(Ⅰ)组、并发肾病微量蛋白尿(Ⅱ)组、并发肾病临床蛋白尿(Ⅲ)组vWF水平高于健康对照(NC)组,差异均有统计学意义(P<0.05);虽然Ⅰ组CD62P与NC组差异无统计学意义(P>0.05),但当发展为微量蛋白尿和临床蛋白尿时与Ⅰ组及NC组差异均有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组APN水平高于Ⅱ组和Ⅰ组,差异均有统计学意义(P<0.01),但低于NC组,差异无统计学意义(P>0.05);血清APN与CD62p、vWF、尿清蛋白排泄率(UAER)均呈正相关;多元逐步回归分析显示, CD62P、vWF、UAER是影响糖尿病患者APN的独立危险因素.结论 血管内皮细胞损伤,血小板活化随着DN的进展呈进行性加重趋势,血清APN升高可能参与了DN患者的内皮功能损害机制.
关键词： 糖尿病肾病 血小板膜糖蛋白 血浆von Willebrand因子 脂联素 -
von Willebrand因子与稳定冠心病
早期大量研究揭示了von Willebrand因子的生物学特点、结构和功能,近期研究发现von Willebrand因子可能在稳定冠心病发病、剪切力机制诱导血小板聚集、血栓形成,以及药物和介入治疗(包括支架置入等)方面有重要作用.
