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N-乙酰半胱氨酸上调细胞FLICE抑制蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及其机制研究
目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)上调细胞FLICE抑制蛋白(c-FLIP)表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的作用.方法 将30只雄性BALB/c小鼠分为假手术组、脓毒症组和NAC组,每组各10只.采用盲肠结扎穿孔术法制备脓毒症小鼠模型,假手术组除不结扎穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,NAC组小鼠术后15 min尾静脉注射NAC 100 mg/kg.造模成功后24 h取小鼠肾脏,光镜下观察肾脏组织病理变化;采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测c-FLIP mRNA表达;采用Western-blotting法检测c-FLIP蛋白表达;复制上述实验观察96 h内小鼠的生存情况.结果 与假手术组相比,脓毒症组小鼠肾小球萎缩、肾小管上皮细胞变形、肾小管腔内可见大量肾细胞间质和碎片,而NAC组小鼠肾脏组织病变明显减轻.三组间肾脏组织病理学损伤评分、c-FLIP mRNA及蛋白表达比较,差异均有统计学意义(F=101.400、31.720、20.330,P均<0.05).进一步两两比较发现,CLP组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较假手术组显著升高(P<0.001),NAC组小鼠肾脏组织病理学损伤评分较CLP组显著降低(P<0.001).与假手术组相比,脓毒症组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均明显下降(P均<0.05),NAC组c-FLIP的蛋白表达有所降低(P<0.05);与脓毒症组相比,NAC组小鼠c-FLIP mRNA及蛋白表达均显著上升(P均<0.05).Kaplan-Meier生存曲线结果显示,三组小鼠生存情况比较,差异有统计学意义(χ2=8.806,P=0.012).进一步两两比较发现,脓毒症组及NAC组小鼠的存活数量均较假手术组显著降低(P均<0.017),而NAC组小鼠存活数量较脓毒症组明显升高(P<0.017).结论 NAC通过上调c-FLIP表达对脓毒症小鼠的急性肾损伤具有显著的保护作用.
关键词： 脓毒症 急性肾损伤 N-乙酰半胱氨酸 细胞FLICE抑制蛋白 小鼠 -
重组变构型人TRAIL对肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制探讨
目的:观察重组变构型人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant mutant human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,rmhTRAIL)对人肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用,验证与此凋亡相关的差异蛋白质表达谱.方法:A549细胞经rmhTRAIL处理后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,FCM法检测细胞周期及细胞凋亡变化.采用液相色谱串联质谱(liquid chromatograph-tandem mass spectrometer,LC-MS/MS)鉴定技术对rmhTRAIL作用前后A549细胞的蛋白质组学进行对比分析,寻找差异表达明显的凋亡相关蛋白,然后用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证相关基因的表达水平.结果:不同质量浓度的rmhTRAIL处理A549细胞24 h后,细胞增殖抑制率均显著提高(P值均＜ 0.05),半数抑制浓度为(9.5±3.9)×105 ng/mL.5×1o5 ng/mL rmhTRAIL处理24 h可诱导A549细胞凋亡,早期凋亡率明显升高(P＜0.01).rmhTRAIL对细胞周期无明显影响.rmhTRAIL作用后,A549细胞中肿瘤坏死因子受体超家族成员10B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B,TNFRSF10B)和TNFRSF10D表达水平分别下调至21.3％和31.8％,细胞FLICE抑制蛋白(cellular FLICE-inhibitory protein,c-FLIP)表达水平上调至2.867倍.实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果证实,用药后作为TNFRSF成员之一的小分子死亡受体5(death receptor-5,DR5)的mRNA和蛋白表达均明显下调(P值均＜ 0.05),而c-FLIP mRNA和蛋白表达则明显上调(P值均＜0.05).结论:rmhTRAIL可诱导A549细胞凋亡,其原因可能与DR5表达下调及c-FLIP表达上调有关.
关键词： 癌 非小细胞肺 细胞凋亡 TNF相关凋亡诱导配体 受体 肿瘤坏死因子 细胞FLICE抑制蛋白 死亡受体5
