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心理干预在眼部注射患者中的应用
对心理干预在眼部注射患者中的应用总结如下.1 对象和方法1.1 对象 2006-09～2006-12,因视神经萎缩、球后视神经炎、眼底病变需要做眼部注射患者630例,年龄15～60岁.
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眼球周围注射体会
眼球周围注射给药为治疗眼前后节病变的重要方式,探讨其注射方法及注意事项易发生并发症,对保证疗效,防止不良反应有重要意义.
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羟基喜树碱对猪视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的实验研究
目的 探讨10-羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对培养的猪视网膜色素上皮(retinalpigment epithelium,RPE)细胞的抑制作用,并研究其发挥作用的适宜浓度.方法 建立体外猪RPE细胞培养体系,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定对照组及不同浓度(0.75、1.5、3.0、6.0 mg/L)HCPT分别作用第24 h、72 h、120 h时的光密度,计算其对RPE细胞的增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同浓度不同时间作用后,各分裂周期RPE细胞的数量;通过倒置相差显微镜和电子显微镜技术观察RPE细胞形态及超微结构的变化,并用台盼蓝排除检测法计算活细胞百分比.结果 0.75 mg/L实验组在HCPT作用后第1天与对照组比较差异无统计学意义;其余各时间段各组与相应对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);抑制作用与药物浓度、作用时间均呈正相关(药物浓度及作用时间与RPE细胞增殖抑制率呈明显的线性关系).终浓度为1.5 mg/L的HCPT作用72 h后,RPE细胞的增殖抑制率达47.95%,而细胞活性>85%,细胞形态及超微结构改变轻微,RPE细胞的S期细胞增加了7.52%,GyM期细胞减少.结论 HCPT对RPE细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖性:终浓度为1.5 mg/L的HCPT对RPE细胞的增殖具有明显的抑制作用,且细胞毒性小.
关键词： 羟基喜树碱 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 眼/药物作用 -
钙调素抑制剂对视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用的研究
目的:探讨三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增殖以及细胞周期的影响,为TFP治疗增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)提供理论依据.方法:通过细胞生长曲线的测定,观察不同浓度(5、10、15、20μmol/L)TFP对RPE细胞生长的影响;通过MTT比色法测定不同浓度(5、10、15、20μmol/L)TFP作用RPE细胞3天时的吸光值A,并计算抑制率;通过流式细胞分析法检测10μmol/L TFP作用72小时时,RPE细胞周期的改变.结果:给药三天后,各浓度(5、10、15、20μmol/L)TFP对RPE细胞生长均具有明显抑制作用,且具有时间剂量效应.RPE细胞经10/μmol/L TFP处理72h后,经细胞荧光流速分析,结果显示TFP使G1期细胞增加了27.02%,S期细胞下降了9.07%,G2M期细胞下降了45%.结论:TFP可抑制RPE细胞生长,且呈时间剂量效应.TFP通过对RPE细胞周期各时相群体的影响,使G1期向S期,进而向G2/M 期的过渡被抑制,从而抑制RPE细胞的增殖.
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环戊通松弛豚鼠睫状肌的调节作用
目的:确定在对豚鼠进行屈光检查时应用环戊通所需的点药次数及其对睫状肌单板机痹的作用时间.方法:本实验共58只豚鼠,分三组:第一组比较豚鼠点药前后屈光状态的变化,第二组比较点药2次和4次时30min和60min时的调节变化,第三组研究点药四次后环戊通对睫状肌单板机痹作用随时间的变化趋势,逐步确定对豚鼠检影时是否需要点药、点药次数及点药后的佳检曩时间.结果:点药和未点药时豚鼠的平均屈光度比较显示,点药后屈光度偏向正,有统计学意义(P<0.05);且调节变化在点药后稳定,差异有显著性(P<0.05);点2次药和点4次药后30min时的调节变化比60min时大,且点药2次比点药4次的调节变化大,差异有显著性(P<0.05);在点完第4次药之后60到90min时检影效果好,并得出其相关二次议程曲线,差异有显著性(F=0.005,P<0.01).结论:对豚鼠检影必须点睫状肌麻痹剂,点药次数以4次、间隔5min的效果较好,豚鼠的屈光检查需要在点药后的60至90min时检查佳.
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细胞因子对人视网膜色素上皮细胞syndecan-1表达的影响
目的检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞syndecan-1表达的影响,并探讨其作用的信号转导途径.方法体外培养人RPE细胞,采用逆转录聚合酶链反应和免疫荧光法检测正常细胞syndecan-1·mRNA、蛋白的表达;免疫荧光法定性、定量观察不同刺激因子作用下syndecan-1的表达变化,包括:7、35 ng/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激24 h,1、6μg/ml脂多糖(LPS)刺激11h,7 ng/ml TNF-α刺激不同时间(0～24 h,每2 h为1个时间点,共13个时间点),30%单核/巨噬细胞株(THP-1细胞)上清液刺激3、14、43 h;细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路特异性阻断剂PD098059预处理2 h后对30%THP-1细胞上清液作用的调节;30%THP-1细胞上清液刺激细胞3 h后0.25%胰酶作用5 min,噻唑蓝法检测细胞贴壁情况.结果在正常RPE细胞中可检测到syndecan-1 mRNA和蛋白的表达;未受刺激的RPE细胞细胞膜、细胞浆及核仁呈强的黄绿色荧光,细胞核呈浅绿色荧光;随TNF-α、LPS浓度及时间增加,荧光强度呈减弱趋势(P＜0.01);30%THP-1细胞上清液刺激后细胞荧光强度明显减弱(P＜0.001).50μmol/L PD098059预处理2 h后可部分阻断30%THP-1细胞上清液的下调作用.与对照组相比,THP-1细胞上清液作用3 h后贴壁细胞数下降(P＜0.05).结论TNF-α和LPS可下调体外培养的人RPE细胞syndecan-1的表达;30%THP-1细胞上清液可下调RPE细胞syndecan-1的表达、促使细胞脱壁,且该作用至少通过了ERK 1/2信号转导通路.
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金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞蛋白激酶C活性的影响
目的研究金丝桃素(hypericin)对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epi-thelium,RPE)细胞的蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)活性的影响. 方法用含0.5～5.0 μmol/L金丝桃素的10%血清培养液培养人RPE细胞,在有或没有PKC激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸 (phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)预处理RPE细胞的情况下,用PKC检测试剂盒测定金丝桃素对细胞液PKC (cytosolic PKC, c-PKC)和细胞膜PKC(membranous PKC, m-PKC)活性变化的影响. 结果未经PMA处理的人RPE细胞的c-PKC和m-PKC的原始活性分别为(35.34±4.1) pmol*min-1*mg-1和(62.52±8.8) pmol*min-1*mg-1.PMA处理细胞后,c-PKC在5 min内就迅速下降,20 min后下降缓慢,60 min降至处理前的18%,以后一直处于很低的水平.m-PKC在5 min后逐渐升高,至40 min达到高峰以后下降,60 min后恢复至对照水平,10 h后降至对照组的30%以下.用PMA处理RPE细胞48 h后,c-PKC和m-PKC都降低至不能测出.但若将金丝桃素与PMA同时加入后,能抵消大部分PMA对PKC的下降调节. 结论金丝桃素能阻止RPE细胞的PKC转位,使PKC的活性发生变化,有可能促进RPE细胞的凋亡,防止增生性玻璃体视网膜病变的发生.
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曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞活性与屏障功能的影响
目的观察曲安奈德(TA)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞活性与屏障功能的影响.方法用ARPE-19细胞,96孔板中培养至4周,加入不同浓度的TA(0.02、0.05 mg/ml),继续培养3 d或7 d,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;将细胞培养在多聚酯滤膜上,4周时记录跨上皮电阻(TER),然后分别在培养液中加入0.02、0.05 mg/ml TA继续培养1周,再次测量TER,并以辣根过氧化物酶(HRP)作示踪剂、酶联免疫吸附试验(ELISA)法评价不同浓度TA组ARPE-19细胞的通透性.结果在含0.02 mg/ml TA培养液中培养3 d或7 d,细胞平均存活率分别为93.70%和90.63%,其细胞活性与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.147,0.091);在含0.05 mg/ml TA培养液中培养相同时间后,细胞活性较对照组显著降低(平均存活率为87.75%、88.98%;P=0.025,0.043);经过1周培养,2个处理组的TER与对照组相比均有极显著降低(P均＜0.001);两个处理组HRP的通透性均显著高于对照组(0.001＜P＜0.05).结论TA可以使ARPE-19细胞的活性降低,并破坏其屏障功能的完整性.
