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神经病理性疼痛大鼠触液核BKca-α表达降低
目的:观察正常大鼠触液核内BKca-α分布及其在神经病理性疼痛过程中的表达变化,探讨触液核在神经病理性疼痛中的作用.方法:采用霍乱毒素B结合辣根过氧化酶(CB-HRP)和BKca-α免疫荧光双重标记技术,观测大鼠触液核中BKca-α在正常及慢性坐骨神经压迫损伤(chromc constriction injury,CCI)大鼠的表达变化.结果:正常和CCI大鼠触液核内存在BKca-α;在CCI大鼠,大鼠热痛觉及机械痛觉阈值下降,且触液核内BKca-α表达的数目也相应减少,和对照组比较有显著差异.结论:触液核BKca-α的降低可能参与神经病理性疼痛.
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靶向毁损触液核对大鼠痛行为及脊髓背角5-HT和c-Fos表达的影响
目的:观察缺失触液核(CSF-contacting nucleus)对大鼠痛行为及脊髓背角痛相关物质5-羟色胺(5-HT)和c-Fos表达的影响,为触液核参与疼痛调制及机制提供实验依据.方法:成年雄性SD大鼠随机分为正常组(Control),假手术组(Sham),霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化酶复合物(CB-HRP)组和毁损触液核组(Damage).以机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)测定大鼠痛行为.免疫荧光法检测脊髓背角5-HT和c-Fos表达,并进行痛行为阈值与物质变化趋势的相关分析.结果:与Control、Sham和CB-HRP组相比,Damage组大鼠MWT和TWL明显降低(P＜0.05).免疫荧光结果显示,正常大鼠触液核神经元高表达5-HT; Damage组大鼠触液核神经元数量随毁损天数延续逐渐减少,且在给予毁损剂CB-SAP第10天完全消失.与此同时脊髓背角5-HT和c-Fos表达量日趋增加,且与痛行为阈值变化趋势成负相关.结论:CB-SAP能科学可靠靶向毁损触液核,缺失触液核可致大鼠痛行为阈值减低,而脊髓背角5-HT和c-Fos表达量增加.本研究提示触液核参与了疼痛调制,且5-HT和c-Fos在此调制中发挥了重要作用.
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触液核在大鼠慢性瘙痒维持中的作用
目的 探讨触液核在大鼠慢性瘙痒维持中的作用.方法 雄性SD大鼠,3月龄,体重240～ 280 g.第一部分采用随机数字表法,将42只大鼠分为3组(n=14):生理盐水组(C组)、丙酮组(A组)和恶唑酮组(O组).O组于颈背部涂抹0.5％恶唑酮15μl,C组和A组分别涂抹等容量生理盐水和丙酮,分别于给药后7、9、13、16、17、18、21、23 d重复上述处理,记录每次给药后30 min内搔抓次数,每组取6只动物,在后1次涂抹恶唑酮后2h取脑组织,测定触液核c-Fos表达.第二部分 采用随机数字表法,将24只大鼠分为3组(n=8):正常对照组(C1组)、慢性瘙痒组(CI组)和慢性瘙痒+触液核毁损术组(CI+ KA组),CI组和CI+ KA组采用上述方法制备慢性瘙痒模型,触液核毁损术于第8次给药后6h实施,并记录第9次给药后30 min内搔抓次数.结果 第一部分 与C组比较,A组T4-8时搔抓次数增多,O组T1-8时搔抓次数增多,A组和O组触液核c-Fos表达上调(P＜0.05)；与A组比较,O组T1-8时搔抓次数增多,触液核c-Fos表达上调(P＜0.05).第二部分 与C1组比较,CI组和CI+ KA组搔抓次数增多(P＜0.05),而CI+ KA组搔抓次数少于CI组(P＜0.05).结论 触液核参与了大鼠慢性瘙痒的维持.
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触液核神经元蛋白激酶C磷酸化水平调制炎性痛大鼠的痛觉
本研究旨在探讨触液核在炎性疼痛中的作用及其机制.用大鼠左侧足底皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)来建立炎性痛模型,用Western blot检测炎性痛模型大鼠触液核中蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)磷酸化水平的变化,用热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)检测来了解大鼠炎性痛觉情况.结果显示,炎性痛大鼠CFA注射后第1、3和7天TWL显著降低,注射CFA后24 h时触液核中p-PKC蛋白水平显著高于正常对照大鼠;侧脑室注射PKC抑制剂GF109203X可降低炎性痛大鼠触液核PKC磷酸化水平并提高痛觉阈值.以上结果提示,阻断触液核中PKC通路的信号转导可能是减轻或消除炎性痛的有效手段.
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大鼠触液核丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(MKP-1)的分布及其在抑郁状态下的表达
本文旨在研究丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 (MAP kinase phosphatase-1,MKP-1)在大鼠触液核(cerebrospinal fluid-contacting nucleus)的分布及其在抑郁状态下的表达变化,为探讨触液核的功能及其参与抑郁的调控机制提供实验依据.以Sprague-Dawley (SD)大鼠为实验动物,用慢性强迫游泳应激制作抑郁模型,用侧脑室注射辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素B亚单位复合物(CB-HRP)特异性标记触液核神经元,用体重增长率、糖水偏好和旷场实验行为学指标来评价大鼠抑郁模型的建立,用免疫荧光双标法检测触液核MKP-1的分布,Image-Pro Plus计数目标神经元CB-HRP/fos和CB-HRP/MKP-1双阳性细胞的数目.结果显示,对照组大鼠触液核神经元有MKP-1分布;经过28天强迫游泳后,与对照组相比,应激组大鼠的体重增长率、糖水偏好、旷场得分明显降低,触液核中fos、MKP-1免疫阳性细胞数目明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).以上结果显示,触液核可能参与抑郁症发病的调制,且通过MKP-1发挥重要作用.
关键词： 触液核 丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1 fos 慢性强迫游泳 抑郁 -
神经病理性疼痛增强HCN2通道在大鼠触液核的表达
本文旨在研究超极化激活环核苷酸门控通道亚型2 (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels subtype 2,HCN2)在触液核的分布及其在神经病理性疼痛条件下的表达变化,以期为揭示触液核的生物学功能及神经病理性疼痛的调控机制提供实验依据.以Sprague-Dawley (SD)大鼠为实验动物,用坐骨神经慢性压迫损伤(chronic constriction injury,CCI) 法制作神经病理性疼痛模型,用侧脑室注射辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素B亚单位复合物(CB-HRP)特异性标记触液核神经元,用热缩足潜伏期及机械缩足阈值作为定量指标研究痛行为,用免疫荧光法及Western blot检测触液核HCN2通道蛋白及c-Fos蛋白的表达量.结果显示,与正常大鼠相比,接受侧脑室CB-HRP注射的大鼠痛阈及触液核HCN2、c-Fos表达均无明显变化;而CCI术后第7、14天,神经病理性疼痛模型大鼠痛阈显著下降,且触液核神经元的HCN2通道蛋白及c-Fos蛋白的表达显著增加.使用HCN2阻断剂ZD7288后,CCI致痛大鼠痛阈显著提高,触液核神经元HCN2通道蛋白及c-Fos蛋白的表达较相应时间点模型组显著降低,以术后第7、14天为明显.以上结果提示,触液核可能参与了神经病理性疼痛的调制,且通过HCN2通道发挥重要作用.
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拮抗触液核细胞外信号调节蛋白激酶5对吗啡依赖大鼠戒断行为的影响
目的 探讨触液核磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用.方法成年♂ SD大鼠48只,体质量230～270 g,采用随机数字法,将大鼠随机分为两组(n=24):吗啡-纳洛酮-DMSO组(A组)和吗啡-纳洛酮-BIX02188组(B组).采用剂量递增法皮下注射吗啡以建立大鼠吗啡依赖模型,d 6上午经腹腔注射纳洛酮,催促戒断症状出现,即建立吗啡戒断模型.采用行为药理学方法结合免疫荧光技术,侧脑室内注射ERK5特异性抑制剂BIX02188,观察其对吗啡依赖大鼠戒断行为、戒断所致痛觉过敏及触液核p-ERK5表达的影响.结果 与吗啡-纳洛酮-DMSO组相比,吗啡-纳洛酮-BIX02188组大鼠跳跃、咬牙、湿狗样抖动、腹泻及体重减轻等戒断症状明显缓解(P<0.05),而扭体、流涎无改善(P>0.05);戒断所致痛觉过敏明显减轻(P<0.05).与吗啡-纳洛酮-DMSO组相比,吗啡-纳洛酮-BIX02188组大鼠触液核p-ERK5阳性神经元数量明显减少(P<0.05).结论 拮抗触液核ERK5可减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,提示触液核ERK5参与吗啡依赖大鼠戒断症状的表达.
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大鼠触液核中TRPC6的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达
目的:研究TRPC6在大鼠触液核(cerebrospinal fluid-contacting nucleus,CSF-CN)中的分布及其在吗啡依赖与戒断条件下的表达变化.方法:雄性SD大鼠随机分为4组:正常大鼠组、生理盐水组、吗啡依赖组和吗啡戒断组.每组大鼠进行戒断总评分(total withdrawal scores,TWS);采用侧脑室注射CB-HRP,并结合CB-HRPP/TRPC6免疫荧光双标技术,观察大鼠触液核内TRPC6的表达情况.结果:上述4组大鼠的戒断总评分分别为2.0±0.6、2.1 ±0.7、2.6±0.7和41.0±4.6,其中吗啡戒断组与其他三组相比,差异具有显著性(P＜0.01);在侧脑室注射CB-HRP后,上述4组大鼠触液核内可观察到大量的CB-HRP标记神经元;同时在触液核内也可观察到部分神经元表达TRPC6免疫阳性.经计数,CB-HRP/TRPC6双标神经元的数量分别为81.78 ±4.93、79.44 ±7.09、254.61±15.36和260.00±12.04,其中吗啡依赖组和吗啡戒断组分别与其他两组相比,差异具有显著性(P＜0.01);但吗啡依赖组和吗啡戒断组相比,差异无显著性(P＞0.05).结论:正常大鼠触液核内表达TRPC6;触液核可能通过上调TRPC6的表达参与吗啡依赖和戒断的形成.
