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微小RNA-214对脓毒症小鼠心肌损伤的作用
目的 探讨微小RNA-214 (miRNA-214)对脓毒症小鼠心肌损伤的作用.方法 清洁级雄性昆明小鼠66只,体质量25 ～30 g,随机(随机数字法)分为4组:假手术组(Sham组,n=18)、脓毒症组(CLP组,n=18)、miRNA-214前体+脓毒症组(前体组,n=12)、miRNA-214抑制剂+脓毒症组(抑制剂组,n=12),其余6只小鼠应用载有miRNA-214前体和抑制剂的腺病毒转染用于空载病对照及miRNA-214转染情况检测.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备小鼠脓毒症模型.Sham组开腹寻找盲肠,不结扎穿孔;前体组、抑制剂组转染后行CLP术.Sham、CLP组小鼠分别于术后6、12、24h时取心肌组织采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)测定miRNA-214表达.于术后12、24h时采用酶联免疫法(ELISA)测定各组心肌组织炎症因子和血清心肌酶浓度;术后24h时采用流式细胞技术测定心肌细胞凋亡率,光镜下观察心肌组织病理学结果.采用SPSS 13.0统计学软件进行分析,应用单因素方差分析进行组间差异比较.结果 (1)与Sham组比较,CLP组术后6、12、24 h miRNA-214表达分别升高2.28倍、1.89倍、1.53倍(F值分别为280.198,82.48,30.65;均P＜0.05);(2)与CLP组术后12 h比较,转染miRNA-214前体小鼠miRNA-214表达水平升高1.86倍,转染抑制剂小鼠miRNA-214表达下降84.5％ (F =394.773;P＜0.05);(3)与CLP组比较,前体组小鼠术后12、24h心肌组织上清液肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6),血清肌钙蛋白(cTnI)及脑钠肽(BNP)水平降低,白介素-10 (IL-10)水平升高;反之,抑制剂组各指标水平升高,IL-10水平降低(12hF值分别为72.819,88.851,147.546,65.256,102.72;24hF值分别为50.836,76.167,100.290,60.763,52.580;均P＜0.05);(4)与CLP组比较,前体组小鼠术后24h心肌细胞凋亡率下降,抑制剂组升高(F=151.076;P＜0.05);(5)前体组小鼠心肌组织病理学损伤较CLP组、抑制剂组减轻.结论 在CLP所致的小鼠心肌损伤中miRNA-214表达增加,且miRNA-214对CLP诱导的心肌损伤有保护作用.
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依那普利对压力超负荷诱导的心肌纤维化的影响及microRNA-214的表达变化
目的：探讨压力超负荷导致心肌纤维化过程中microRNA-214的表达变化，以及依那普利对心肌纤维化的影响。方法80只雄性SD大鼠随机分为压力超负荷组（Model，n=40），假手术组（Sham，n=40）。其中各组再随机分为两个亚组：依那普利治疗组（n=20）与无依那普利治疗组（n=20）。行腹主动脉缩窄术建立心脏压力超负荷大鼠模型。4周后，酶联免疫分析法测定各组大鼠血清中的PICP、ICTP、MMP-2、TIMP-2等心肌纤维化指标，荧光实时定量PCR技术检测的microRNA-214表达变化。结果压力超负荷组大鼠的PICP为(161.3±16.3)ng/L、ICTP为(3.06±0.5)、PICP/ICTP 比值为(51.1±7.3)、MMP-2为(2638.2±289.6)pg/mL、TIMP-2为(4396±365.9)ng/mL，上述指标与假手术相比，均有所增高，差异具有统计学意义(P均<0.05)；模型组MMP-2/TIMP-2比值为(0.6±0.4)，显著低于假手术组（P<0.05），依那普利处理亚组的大鼠PICP为(114.1±19.6)ng/L、ICTP为(2.5±0.7)ng/L、PICP/ICTP比值为(45.1±16.3）、MMP-2为(806.8±301.6)pg/mL、TIMP-2为(2052.6±322.3)，均低于单纯压力超负荷组，异具有统计学意义（P均<0.05）。依那普利处理亚组MMP-2/TIMP-2比值为(0.88±0.3)，显著高于单纯压力超负荷组，差异具有统计学意义(P均<0.05)。同时压力超负荷处理会导致microRNA-214的表达相对于假手术组增高（2.1±0.3）倍，依那普利处理可以缓解压力超负荷引起的microRNA-21过表达，但仍为假手术组的（1.5±0.2）倍。结论依那普利可以缓解压力超负荷造成的心肌纤维化，microRNA-214与此过程有关，可作为心肌纤维化的治疗靶点或标志物。
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上调microRNA-214表达提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的实验研究
[目的]观察上调微小RNA-214(micromolecule RNA-214,miR-214)表达对人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的作用,并探讨其可能机制.[方法]采用脂质体介导方法将miR-214转染人宫颈癌HeLa细胞,荧光定量PCR方法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)基因mRNA表达,Western blotting法检测细胞NF-κB蛋白表达.HeLa细胞经不同浓度顺铂(DDP)作用后,四甲基偶氮唑蓝比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞生长抑制率并计算DDP的半数致死量(50％inhibitory concentration,IC50),流式细胞术检测细胞凋亡率.[结果]经转染miR-214 mimics后,人宫颈癌HeLa细胞miR-214表达增加(P＜0.05),同时HeLa细胞NF-κB基因mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05).经不同浓度DDP作用后,与对照组相比,miR-214上调组细胞对顺铂IC50值降低(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05).[结论]上调人宫颈癌HeLa细胞miR-214表达可增强细胞对化疗药物顺铂的敏感性,下凋NF-κB基因表达可能是其作用机制.
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下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移及侵袭的影响
目的:探讨下调microRNA-214 (miR-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用及其可能机制.方法:采用脂质体介导法将miR-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,Real-time PCR法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uridylyl phosphate adenosine,uPA)基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞NF-κB和uPA蛋白表达.划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.结果:经转染miR-214抑制剂后,人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达降低,细胞迁移和侵袭能力降低.同时NF-κB和uPA mRNA和蛋白表达也降低.结论:下调人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达可抑制细胞迁移和侵袭能力,下凋NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制.
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microRNA-214在女性乳腺癌患者血清中的表达及临床意义
目的 探讨microRNA-214 (miR-214)在女性乳腺癌患者血清中的表达水平及其潜在的临床意义.方法 提取35例乳腺癌术前患者、25例乳腺癌术后患者、25例良性乳腺肿瘤患者及25例健康女性血清中的总RNA,用实时荧光定量PCR检测血清miR-214的表达水平,并分析其与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系.结果 乳腺癌术前组血清miR-214的表达水平明显高于术后组(Z=-3.40,P＜0.01)、良性乳腺肿瘤组(Z=-2.33,P＜0.05)及健康对照组(Z=-4.72,P＜0.01).miR-214在乳腺癌术前组中区别于健康个体中的ROC曲线下面积(AUCRoc)为0.847(95％ CI:0.744～0.950),当cut off值为4.42时,敏感性与特异性分别为97.1％和96.0％.在乳腺癌术前组中miR-214的表达水平与淋巴结的转移(Z=-2.05,P＜0.05)及年龄(Z=2.85,P＜0.01)有关.结论 miR-214在乳腺癌患者血清中的表达水平升高,可能作为评估乳腺癌淋巴结转移的一项辅助指标.
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宫颈癌患者血浆miRNA-214的表达水平及其对宫颈癌细胞的影响
目的:探讨微小RNA-214(miRNA-214)在宫颈癌患者血浆中表达水平的差异及其对宫颈癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:将2016年1月至2018年1月在中国科学院合肥肿瘤医院就诊、经宫颈活检病理确诊为宫颈浸润癌的50例患者作为宫颈癌组,同时选取相同年龄段体检健康者50例作为健康对照组.采用实时荧光定量PCR法对两组血浆中的miRNA-214进行检测并比较.采用脂质体介导的转染方法将miRNA-214模拟物转染,CCK-8法检测宫颈癌细胞SiHa的增殖、细胞周期和凋亡.结果:血浆中miRNA-214的表达宫颈癌组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).用CCK-8法检测SiHa发现,miRNA-214模拟物转染组细胞的生长速度明显慢于对照组,即miRNA-214对细胞生长速度有抑制作用,差异有统计学意义(P＜0.05).与宫颈癌对照组[转染miRNA-阴性(即miRNA-NC)]相比,宫颈癌转染miRNA-214组(脂质体转染miRNA-214模拟物)中,宫颈癌S期细胞比例明显降低,凋亡细胞比例明显升高(P＜0.05),G2/M期细胞比例明显降低(P＜0.05).结论:宫颈癌患者血浆中miRNA-214表达下调,作为宫颈癌早期诊断分子标志物有一定准确性.miRNA-214可以抑制宫颈癌细胞SiHa进入S期,并且促进SiHa细胞凋亡,miRNA-214可能在宫颈癌的发生与发展中发挥着抑癌作用.
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乳腺癌组织中miR-214和FOXM1的表达变化及意义
目的 观察乳腺癌组织中微小RNA-214(miR-214)和叉头盒蛋白质M1(FOXM1)的表达变化,并探讨其意义.方法 收集手术切除的110例份乳腺组织标本,同时收集相应癌旁组织标本作为对照,采用qRT-PCR法检测乳腺癌及癌旁组织中miR-214和FOXM1 mRNA表达,采用Western blotting法检测乳腺癌及癌旁组织中FOXM1蛋白表达,并分析miR-214和FOXM1 mRNA的相关性及与患者临床病理特征的关系.结果 乳腺癌组织和癌旁组织中miR-214 mRNA相对表达量分别为0.40±0.11、1.02±0.06,乳腺癌组织miR-214 mRNA表达低于癌旁组织(P＜0.05).乳腺癌和癌旁组织中FOXM1 mRNA相对表达量分别为4.01±0.45、1.01±0.04,乳腺癌组织中FOXM1 mRNA表达高于癌旁组织(P＜0.05).乳腺癌和癌旁组织中FOXM1蛋白相对表达量分别为0.92±0.23、0.24±0.11,乳腺癌组织中FOXM1蛋白表达高于癌旁组织(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,乳腺癌组织中miR-214和FOXM1 mRNA表达呈负有关(r=-0.729,P＜0.05).乳腺癌组织中miR-214表达与患者TNM分期及淋巴结转移有关(P均＜0.05);乳腺癌组织中FOXM1 mRNA和蛋白表达与肿瘤组织学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P均＜0.05).结论 乳腺癌组织中miR-214表达异常降低,FOXM1表达异常增高;二者共同作用参与乳腺癌的发生发展.
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miR-214在狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制
目的 探讨微小RNA-214 (miR-214)在狼疮性肾炎(LN)小鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用及其相关机制.方法 将MRL-Faslpr/JNju小鼠(简称LN小鼠,20只)和野生型小鼠(20只)处死,分离、培养其肾小球系膜细胞;将LN小鼠肾小球系膜细胞随机分为两组,分别转染miR-214 mimics(观察组)和NC mimics control(对照组).采用实时荧光定量PCR法检测两种小鼠及两组肾小球系膜细胞miR-214相对表达量,采用MTT法检测两组转染1、2、3天的细胞增殖抑制率.采用生物信息学方法预测细胞中miR-214的靶基因,并经双荧光素酶报告基因试验验证,YKL-40是miR-214的靶基因.采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测两组YKL-40 mRNA及蛋白相对表达量.取对数生长期的LN小鼠肾小球系膜细胞,分别转染siYKL-40和negative control,采用MTT法检测转染1、2、3天的细胞增殖抑制率.结果 LN小鼠和野生型小鼠肾小球系膜细胞miR-214相对表达量分别为0.35±0.09、1,两者比较P＜0.01.观察组和对照组miR-214相对表达量分别为85.54±12.07、1,两组比较P＜0.01.观察组转染1、2、3天的细胞增殖抑制率均高于对照组(P＜0.05或＜0.01).与对照组比较,观察组YKL-40 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均＜0.05).与转染negative control比较,转染siYKL-40的LN小鼠肾小球系膜细胞转染1、2、3天的细胞增殖抑制率均升高(P＜0.05或＜0.01).结论 LN小鼠肾小球系膜细胞中miR-214表达降低,上调miR-214表达可抑制其增殖;下调YKL-40表达可能是miR-214的作用机制.
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血浆微小RNA-214在冠状动脉疾病患者中的表达及临床意义
目的:探讨冠状动脉疾病(coronary artery disease,CAD)患者血浆微小RNA-214(microRNA-214, miR-214)水平特点,分析其与CAD患者发病时间和冠状动脉狭窄程度的相关性,为其成为新的 CAD诊断标志物和药物靶提供依据.方法:选取13例急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)患者和27例健康志愿者进行对;22例CAD胸痛患者与8例非CAD胸痛患者进行对照;154例冠状动脉复杂病变的急性胸痛患者与92例无冠状动脉狭窄的急性胸痛患者进行对照测定所有患者循环miR-214的表达水平和血浆心肌肌钙蛋白I(concertation of cardiac troponin-I,cTnl)浓度,分析血浆miR-214与CAD发病时间、冠状动脉狭窄的严重程度和患者Gensini评分之间的关系.结果:miR-214在CAD患者的血浆中表达丰富.AMI患者在AMI发生后的早期血浆miR-214浓度显著增加,与健康对照比较差异有显著性(P＜0.05),AMI患者的血浆miR-214水平和cTnl浓度呈正相关(r=0.596,P＜0.05);血浆miR-214水平与单侧左前降支冠状动脉粥样硬化患者的冠状动脉狭窄严重程度呈正相关(r=0.554,P＜0.05); miR-214水平与CAD患者Gensini评分呈正相关(r=0.480, P＜0.001).结论:循环miR-214可能是CAD的新生物标志物,也是潜在的诊断工具,并且miR-214水平升高可用于预测CAD患者冠状动脉病变的存在与严重程度.
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急性有机磷农药中毒患者血清miR-214表达水平及功能
目的:探讨miR-214在急性有机磷农药中毒(AOPP)患者血清中的表达及其可能的生物学功能.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测102例AOPP患者和100例健康对照的血清miR-214表达并进行比较,分析miR-214水平与中毒患者胆碱酯酶(ChE)活力和中毒严重程度评分(PSS)的相关性;利用生物信息学方法预测miR-214可能的靶基因,并对预测靶基因进行功能注释和通路分析.结果:AOPP患者血清miR-214水平明显高于对照组(P<0.01),与ChE活力呈负相关(r=-0.380,P<0.01),与PSS评分呈显著正相关(r=0.702,P=0.000);生物信息学分析显示miR-214预测靶基因主要涉及核酸多种组分的合成与代谢、ATP能量的合成与代谢、神经递质转运、蛋白质氨基酸脱磷酸化、调节Ras和GTP介导的信号传导等生物过程,以及多种磷酸酶活性、ATP与GTP酶活性调节、钙离子跨膜转运蛋白活性等分子功能,KEGG信号通路富集于胰岛素信号通路、钙信号通路.结论:miR-214在AOPP患者血清中表达水平升高,并与中毒病情程度相关,可能参与OPs中毒后病理损伤过程.
