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应用噬菌体随机肽库技术研究干扰素-α2b抗原表位
目的应用噬菌体随机肽库技术,研究干扰素-α2b高抗原性表位. 方法利用结合有干扰素-α2b多克隆抗体的免疫磁性微球,对噬菌体随机肽库进行生物淘筛,以ELISA方法鉴定阳性克隆.阳性克隆测序后与干扰素氨基酸序列进行了同源性分析,研究干扰素-α2b分子中高抗原性表位. 结果经4轮淘筛后噬菌体克隆的阳性率为57.6%,据随机挑选的12个阳性克隆的同源性分析结果将其分为3组,分别对应干扰素-α2b 3个高抗原性表位与预测的结果吻合,其中第2组与干扰素受体结合区AB环接近. 结论利用噬菌体随机肽库技术,成功筛选出3个与抗原性预测相符合的干扰素-α2b抗原表位,为研究干扰素分子的作用机理、制备抗特定表位的单克隆抗体以及设计和开发干扰素的小分子模拟肽奠定了基础.
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用免疫磁性微球从骨髓中分离癌细胞
用物理吸附结合化学键共价结合的方法,将抗人膀胱癌单克隆抗体连接到预先制备的聚苯乙烯磁性微球表面,构建了能特异地与靶细胞结合并赋予其以磁响应性的免疫磁性微球(immunomagnetic microspheres, IMMS).间接免疫荧光检测和IMMS与细胞的结合实验证明,所构建的IMMS可有效地和靶细胞结合.研究了聚苯乙烯磁性微球和抗体反应的质量比、IMMS与靶细胞比例对IMMS与细胞结合效果的影响.用IMMS从动物骨髓中分离癌细胞的初步实验表明,IMMS可有效清除癌细胞,而骨髓细胞仅有很少量的损失.
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125I标记抗体法优化免疫磁性微球的构建条件
目的：研究磁性微球与单克隆抗体结合的条件，以构建具有良好性能的免疫磁性微球。方法：以同位素标记的单克隆抗体和微球的结合率为指标。用均匀设计法研究影响免疫磁性微球构建的因素。结果：pH值、抗体加入量和反应时间是影响免疫磁性微球构建的主要因素。结论：通过控制条件，可以构建具有良好性能的免疫微球。
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免疫微球检测金黄色葡萄球菌与链球菌研究
目的：研究金黄色葡萄球菌与链球菌的检测方法。方法制备三种免疫磁性微球作为载体，利用存在于金黄色葡萄球菌表面的A蛋白、存在于G群链球菌表面的G蛋白、免疫球蛋白G(IgG)分子特异性结合的相关原理对病原菌进行检测。结果三种免疫磁性微球均可有效地捕捉到G群链球菌、金黄色葡萄球菌。结论应用免疫微球对金黄色葡萄球菌、链球菌进行检测具有良好的稳定性，在微生物检测及临床检验过程中可推广应用。
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肾综合征出血热IMMS-ELISA检测方法建立
目的 建立一种用于检测肾综合征出血热(HFRS)特异性抗体IgG的ELISA方法一免疫磁性微球(IMMS)ELISA.方法 利用重组菌株E.coli BL21( DE3) /pET32a-L99S诱导表达SEO型汉坦病毒(HV)重组核蛋白(rNP),并进行镍亲和层析纯化,以纯化rNP为抗原,分别建立检测HFRS特异性抗体IgG的3种ELISA法:间接ELISA、捕获ELISA和IMMS -ELISA,并进行方法学比较.结果 新建立的3种ELISA的检测灵敏度和特异度为≥90％,总符合率≥95％.其中间接ELISA的灵敏度达100％,而假阳性率为10％；捕获ELISA特异度达100％,灵敏度较低(92.5％),且假阴性率为7.5％；IMMS-ELISA的灵敏度和特异度均达到100％.结论 IMMS-ELISA较其他2种ELISA检测方法更为简单、安全和准确,易于在基层公共卫生和临床医疗机构推广使用.
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纳米免疫磁性微球的制备和性能研究
目的:初步探讨纳米免疫磁性微球(Immunomagnetic beads,IMB)的制备方法及其性能.方法:用Fe/C纳米磁粉为内核,用反相乳液法制备壳聚糖磁性复合微球,用戊二醛活化复合微球并交联鼠抗人CD3单克隆抗体,制备出人CD3纳米免疫磁性微球,用人CD3纳米磁性免疫微球富集人外周血中CD3+细胞,并检测富集细胞的效果.结果:壳聚糖磁性复合微球平均粒径为560 nm,粒径分布在409～710 nm之间,用此微球制备的人CD3免疫磁性微球蛋白联接率达93.8%,流式细胞术检测人CD3纳米免疫磁性微球分离CD3+细胞纯度达到94.8%.结论:制备的人CD3纳米免疫磁性微球具有分离细胞纯度高,细胞损伤小,不用解离磁球即可检测等特点.
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免疫磁性微球富集检测结核分枝杆菌方法的建立
目的:建立一种基于免疫磁性微球富集的检测结核分枝杆菌的新方法,以提高其临床阳性检出率.方法:提取结核分枝杆菌H37Rv抗原,并免疫新西兰白兔,制备兔抗结核分枝杆菌H37Rv血清.分离纯化抗血清,采用酶联免疫吸附试验和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术鉴定抗体的效价和纯度.将抗结核分枝杆菌抗体与生物素标记,并与结合有链霉亲和素的磁性微球进行连接获得免疫磁性微球,优化反应条件,建立免疫磁性微球富集检测结核分枝杆菌的方法.以培养结果作为判断金标准,比较免疫磁性微球富集方法与常规涂片镜检方法的检出率.结果:制备的抗结核分枝杆菌抗体浓度为14 mg/mL.终效价为1:20 000.检测158例临床标本,免疫磁性微球富集方法可使涂片镜检阳性率从5.1％提高到13.9％.22例免疫磁性微球富集后涂片镜检阳性的标本培养均为阳性,其特异度为100％.结论:建立的免疫磁性微球富集方法简便、有效,能显著提高结核分枝杆菌镜检的灵敏度和特异度.
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免疫微球检测金黄色葡萄球菌与链球菌研究
目的 建立一种新型、快速的检测病原菌方法.方法 以金属鳌合免疫化微球、醛基免疫磁性微球和氨基免疫化磁性微球为载体,利用金黄色葡萄球菌表面A蛋白、G群链球菌表面G蛋白与IgG分子特异性结合的原理,富集检测病原菌.结果 制备的三种免疫磁性微球每克均可在2h内至少固定60mg人IgG,经SDS-PAGE和westerBlot分析,也均能在1h内鉴定出分离得到的金黄色葡萄球茵争G群链球菌,且以醛基化免疫磁性微球检测效果好.结论 以免疫微球检测金黄色葡萄球菌和链球菌操作稳定性,成本低,有望在临床检验以及微生物检测等方面得到广泛应用.
