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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统(CRISPR/Cas)研究近况
1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶( iap)基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列[1]。2002年,这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列(CRISPR),CRISPR关联蛋白也同时得以命名[2]。2005年,3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质,如噬菌体和接合质粒,并推论CRISPR/Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA[3-5]。2007年,来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证;研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系,证明了CRISPR/Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统[6]。 Marraffini和Sontheimer[7]证实CRISPR/Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。近基于CRISPR/Cas作用机制的研究,发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用[8]。
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酵母双杂交技术筛选白细胞中HCV核心蛋白结合蛋白基因
目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合蛋白的基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV核心蛋白基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提取质粒,转化入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出核心蛋白基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和铺有X-α--半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落共6个,其中2个高尔基复合体关联蛋白1,1个Ran结合蛋白M,1个pellino同族体2,2个未知功能蛋白基因(KIAA1949).结论:成功克隆出丙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白,为进一步研究HCV的作用提供了新线索.
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埃博拉病毒疫苗和药物治疗研究进展
埃博拉病毒病(Ebola virus disease ,EVD)是由埃博拉病毒(Ebola virus ,EBOV)引起的一种急性传染病,病死率较高。目前已发现有苏丹埃博拉病毒(SEBOV )、扎伊尔埃博拉病毒(ZEBOV)、科特迪瓦埃博拉病毒(CIEBOV )、本迪布焦埃博拉病毒(BEBOV)和雷斯顿埃博拉病毒(REBOV)5种亚型。不同的病毒株具有不同的毒性,其中扎伊尔埃博拉病毒致死率高,为47%~90%,在2014年至2015年引起西非病毒病暴发的病毒即属于此类型。 EBOV 为单股负链、不分节段的 RNA 病毒,属丝状病毒科丝状病毒属。该病毒形态多样,多呈长丝状或杆状。外有脂蛋白组成的包膜。病毒基因组全长18.9 kb ,相对分子质量为4.2×106,基因组反转录产生正链。该链能编码巨蛋白、核蛋白、2个结构蛋白VP30和 VP35、膜关联蛋白 VP24和 VP40、糖蛋白以及EBOV 特有的分泌型糖蛋白7种蛋白和 RNA 聚合酶[1],每种产物由一种单独的 mRNA 编码,基因外的两末端序列具有保守性和高度互补性,多数基因被非保守的基因间隔开[2]。其中4种与膜相偶联的蛋白(糖蛋白、VP40、VP24和核蛋白)在病毒的毒粒装配、出芽以及致病过程中起到了关键作用。