首页 > 文献资料
-
10-23脱氧核酶抑制铜绿假单胞菌耐药基因VIM2作用的初步研究
目的 探讨10-23脱氧核酶(DRz)抑制铜绿假单胞菌耐药基因VIM2的表达及其在逆转铜绿假单胞菌耐药中的作用.方法 根据计算机模拟的 VIM2 mRNA 的二级结构设计合成 5 条VIM2特异的10-23DRz(DRz1～DRz5),在无细胞反应体系中鉴定10-23DRz对VIM2 mRNA的切割活性后,将其导入铜绿假单胞菌,利用E-test法检测亚胺培南对处理前后铜绿假单胞菌的MIC值.结果 DRz3、DRz4和DRz5在无细胞反应体系中可对VIM2 mRNA进行有效切割,且其活性具有高度特异性.与对照相比,1O-23DRz可以降低亚胺培南对铜绿假单胞菌的MIC值.结论 实验中所设计的10-23DRz能在细胞外高效特异性的切割VIM2 mRNA;在细胞内能协同业胺培南抑制铜绿假单胞菌耐药.
-
10-23脱氧核酶催化中心的两个氨基组合修饰及催化活性研究
10-23脱氧核酶是一个具有催化互补RNA底物的小型DNA分子.基于以前的化学修饰研究成果,它的催化中心还有优化的空间以获得更强的催化能力.2'-脱氧腺苷的类似物5在A9位的取代和2'-脱氧鸟苷的类似物6在G2和G14位的取代,都能提升这个脱氧核酶的催化能力.我们在本文报道这两个化合物在这些位点的组合修饰,结果表明这些组合修饰的效果是具有位点依赖性的,在一些位点上观察到了加和效果.在催化位点附近的G1,G2和G14是高度保守的,但可以通过设计2'-脱氧鸟苷类似物进行单个取代或组合取代,来优化它们的贡献.因此,对于10-23脱氧核酶催化中心的功能基修饰,是优化其催化能力的一条可行的途径.
-
10-23脱氧核酶及其应用进展
10-23脱氧核酶是近年来利用体外分子进化技术筛选得到的一种具有催化功能的单链DNA片段,具有高效的催化活性及特异的序列识别能力,能催化RNA特定部位的切割反应,从mRNA水平上抑制基因表达,从而调控相应蛋白的表达,可能成为治疗肿瘤、病毒感染等疾病的新型工具.
-
10-23脱氧核酶对新生大鼠心肌细胞ET-1mRNA表达的影响
目的:将体外筛选具有切割内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA的10-23脱氧核酶转染原代培养新生大鼠心肌细胞,观察其对心肌细胞ET-1 mRNA的影响.方法:体外转录ET-1全长RNA底物,设计并合成5条ET-1 10-23脱氧核酶(DZ1～DZ5),其5'及3'端各有2个核苷酸硫代修饰,体外切割ET-1 RNA底物,筛选有效脱氧核酶;5'标记荧光素FAM的10-23脱氧核酶瞬间转染新生大鼠心肌细胞以观察对10-23脱氧核酶的摄取;采用半定量RT-PCR检测ET-1基因的表达.结果:DZ2、DZ3、DZ4及DZ5在体外均可切割RNA底物,其中DZ4两侧结合区结合自由能之差大,其切割效率高,达83.5%,而DZ3两侧结合区结合自由能之差小,其切割效率亦低(47.3%);瞬间转染新生大鼠心肌细胞24h,心肌细胞内可见10-23脱氧核酶的分布,半定量RT-PCR结果显示转染24h后的DZ4(0.2μmol/L)可减少血清诱导肥大心肌细胞ET-1mRNA及细胞总蛋白,降低细胞活力与蛋白质合成速率(P＜0.05).结论:本研究设计的10-23脱氧核酶能切割体外转录的ET-1全长RNA底物,转染心肌细胞后,可抑制ET-1 mRNA的表达,减缓血清诱导心肌细胞肥大,10-23脱氧核酶两侧结合区自由能的差值与切割效率有关.
-
针对Egr-1mRNA的10-23脱氧核酶抑制大鼠动脉损伤后内膜增生的研究
目的探讨针对Egr-1 mRNA的10-23脱氧核酶对大鼠动脉损伤后内膜增生的影响和可能的机制.方法制备大鼠颈动脉球囊损伤模型,96只大鼠随机分为4组,A组为假手术组;B组为1 mmol/L MgCl2对照组;C组为FuGENE 6对照组;D组为FuGENE6介导的ED5转染组;每组再按术后3,7,14和21 d,分为4个亚组,每组6只.术后3、7、14、21 d各处死每组动物6只,分别应用RT-PCR和Western-blot技术检测血管组织Egr-1 mRNA水平及蛋白合成情况;HE染色观察损伤血管内膜的增生情况;免疫组织化学染色观察PCNA的表达.结果与B组和C组比较,D组各时间点血管内膜、中膜的厚度和管腔的狭窄率均显著减小(P＜0.01);正常血管组织有微量Egr-1表达,术后Egr-1 mRNA和蛋白水平逐渐增高,而D组血管组织E-gr-1 mRNA和蛋白水平较B组和C组均降低(P＜0.01);免疫组织化学染色显示,术后3 d PCNA表达开始增加,7 d达高峰,14 d开始下降,D组血管壁PCNA阳性细胞百分比明显低于B组和C组(P＜0.01).B组和C组之间相比较,以上各指标差异均无显著性(p＞0.05).结论ED5可能通过抑制Egr-1和pCNA的表达,而减轻血管损伤后内膜增生.
-
icl mRNA特异性10-23DRz在小鼠体内抗结核分枝杆菌感染的实验研究
目的 探讨icl mRNA特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme, DRz)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)在小鼠体内感染的影响,及其单独或与异烟肼(isoniazidum, INH)联合应用治疗小鼠结核病的效果.方法 分别用DZ4、INH、INH+DZ4-S或INH+DZ4对Mtb进行预处理,再用上述经过预处理的Mtb感染BALB/c小鼠,一定时间后进行小鼠肺组织Mtb培养及病理学改变观察.利用DZ4-FITC溶液对BALB/c小鼠进行滴鼻处理,检测滴鼻途径给药的效果.采用尾静脉注射法建立小鼠结核病模型,将模型小鼠随机分为5组(n=10),分别给予生理盐水、DZ4、INH、INH+DZ4、INH+DZ4-polyG治疗,于治疗完成2周后进行小鼠肺组织Mtb荷菌量检测和病理学改变观察.结果 Mtb感染后2周,各组小鼠的肺组织荷菌量均无显著性差异(P>0.05).感染进行至4～12周时,INH+DZ4预处理组Mtb感染小鼠的肺组织荷菌量较其它各组均显著偏低(P<0.05),肺组织的病理改变较其他各组也明显轻微.经滴鼻途径给予DZ4-FITC溶液4 h后,小鼠肺组织冰冻切片在荧光显微镜下可见强烈的黄绿色荧光,并至少持续48 h.对小鼠结核病模型的治疗结果显示,DZ4单独治疗组小鼠肺组织荷菌量及病理表现与未治疗组无显著差异;加用INH治疗的各组小鼠肺组织荷菌量与生理盐水组比较有显著下降(P<0.05),肺组织病理表现也明显轻微,但10-23DRz和INH联合治疗组与INH单独治疗组在肺组织荷菌量和病理表现上均无显著性差异.结论 10-23DRz与INH联合预处理可有效降低Mtb感染小鼠的能力; 本研究未发现10-23DRz对结核病具有治疗作用或辅助治疗作用.
-
10-23 脱氧核酶的生物催化功能研究进展
10-23脱氧核酶是利用体外筛选技术得到的一种具有催化功能的单链DNA片段,具有高效的催化活性及特异的序列识别能力,能催化RNA特定部位的切割反应,从mRNA水平上抑制基因表达,具有潜在的治疗应用价值.
-
内皮素-1 10-23脱氧核酶对离体灌流大鼠心脏急性缺血性心律失常的影响
目的:应用内皮素(endothelin, ET)-1 10-23脱氧核酶抑制内源性ET-1表达,探讨内源性ET-1在急性缺血性心律失常发生中的作用.方法:设计并合成ET-1 10-23脱氧核酶,作体外切割筛选;SD大鼠静脉注射ET-1 10-23脱氧核酶,观察心肌对5'标记荧光素FAM的ET-1 10-23脱氧核酶的摄取和对其后离体灌流大鼠心脏左冠状动脉前降支结扎致急性缺血性心律失常的影响.结果:设计合成的ET-1 10-23脱氧核酶在体外高效切割ET-1 RNA底物;荧光标记ET-1 10-23脱氧核酶静脉注射4 h后,大鼠心肌组织内荧光广泛分布;静脉注射ET-1 10-23脱氧核酶4 h后,左冠状动脉前降支结扎引起的急性缺血性心律失常显著减轻,并呈剂量依赖性,而对照序列无此效应.结论:本实验设计的ET-1 10-23脱氧核酶能有效切割ET-1 RNA,减轻急性缺血性心律失常的发生,证明内源性ET-1在急性缺血性心律失常的发生中起重要作用.
