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人源抗乙型肝炎病毒基因工程全抗体的研制
目的研制人源化抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体.方法采用噬菌体抗体库技术,从乙肝疫苗免疫后健康人外周血淋巴细胞中提取抗体基因建立抗体库,用纯化的HBsAg筛选Fab抗体;再将获得的抗体轻、重链构建到杆状病毒表达载体pAc-κ-Fc中,转染SF9细胞表达IgG全抗体并进行纯化.免疫荧光检测抗体的表达,竞争抑制ELISA检测其与抗原的结合活性及特异性.结果获得了一株抗乙肝表面抗原的Fab抗体;在转染后的SF9培养上清中收获到了IgG抗体,竞争ELISA证实该抗体针对HBV表面抗原的特异性抗体.结论本实验得到了一株人源抗HBsAg的IgG抗体,并进行了纯化.
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以杆状病毒作为基因治疗载体的一种新方法
目的:报道一种新的基因治疗方法.方法:将人全长血小板生成素(thrombopoietin, TPO)基因克隆至pBacMam-2载体,与BacVector-3000病毒DNA共转染昆虫sf9细胞,经筛选后获得可在哺乳类动物细胞高效表达的昆虫病毒,以此为载体,将人TPO基因导入小鼠体内.结果:获得可在哺乳类动物细胞高效表达的昆虫病毒株,动物实验外周血小板计数升高至正常的2～3倍,RT-PCR结果显示TPO在小鼠组织中得到表达.结论:重组rhTPO昆虫病毒是一种有效的基因治疗载体.
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昆虫病毒杀虫剂的安全性实验研究
目的了解昆虫病毒杀虫剂的安全性.方法通过对棉铃虫核型多角体病毒、茶小卷叶蛾颗粒体病毒、苜蓿银蚊夜蛾核型多角体病毒、菜青虫病毒、松毛虫质型多角体病毒、蟑螂细小病毒以及棉铃虫病毒的两种基因重组工程体8种昆虫病毒杀虫剂进行安全性实验研究.结果表明它们均无毒性、无致病性、无致敏反应、无致突变和无致畸性,相对于化学农药更为安全.结论不产生不良作用或影响是昆虫病毒的宿主专一,作用特异性强的感染性状决定的.对其远期危害及安全性的探讨,仍是必须予以密切注视和进一步研究的.
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昆虫病毒在虫媒病控制领域的研究趋势和应用前景
昆虫病毒是其宿主昆虫种群的重要调节因子.本文综述了浓核病毒、杆状病毒等昆虫病毒作为生物防治因子控制蚊类、蟑螂等媒介生物的研究进展,展望了昆虫病毒在虫媒病控制领域的研究趋势和应用前景.
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昆虫病毒研究的回顾与展望
在病毒学研究一个多世纪的发展史中,以昆虫作为宿主,并在宿主种群中发生流行病的昆虫病毒研究起步较迟,落后于植物病毒、动物病毒、细菌病毒.但是近五十年来,昆虫病毒研究得到很大的发展.据国际病毒分类委员会第七次报告的统计,至今已报告的昆虫病毒有1600多种,涉及昆虫纲几乎所有的目.这些昆虫病毒分属于13个病毒科、2个病毒亚科和21个病毒属.按病毒核酸类型划分,可分为:1)双链DNA病毒,其中有杆状病毒科、痘病毒科、多分病毒科、泡囊病毒科和虹彩病毒科;2)单链DNA病毒中的细小病毒科;3)双链RNA病毒,其中有呼肠孤病毒科、二分RNA病毒科;4)单链RNA病毒,其中有微RNA病毒科、野田村病毒科和T四病毒科;5)DNA和RNA的反转录病毒,包括前病毒科和变位病毒科[2].昆虫病毒已经成为病毒研究比较活跃的领域之一,它在生命科学研究中占有显著的地位并显示出广阔的发展前景.我国的昆虫病毒研究实际上始于二十世纪50年代中期高尚荫、曹诒荪等人对家蚕核型多角体病毒(NPV)病研究[3].近五十年来,在昆虫病毒--昆虫细胞离体培养系统;昆虫病毒资源的识别鉴定;昆虫病毒分子生物学;昆虫病毒生物防治技术等研究领域得到很大的发展,取得长足进步,并在国际上产生重要影响.
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M2e-HBC融合蛋白的真核表达
目的:构建以乙肝病毒核心蛋白(HBC)为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区(M2e)通用疫苗杆粒,利用昆虫细胞杆状病毒表达系统,进行真核表达.方法:利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HBC相连.经酶切、酶联将融合基因插入pFastBacHTA载体,在DH10Bac细胞中进行同源重组,经测序鉴定后构建M2e-HBC杆粒,脂质体转染sf9昆虫细胞,收获并扩增含有M2e-HBC的杆状病毒,经扩增后获得高效价的重组杆状病毒,用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达.结果:构建了以HBC为载体的M2e通用疫苗杆粒,通过转染sf9昆虫细胞得到M2e-HBC融合蛋白真核表达.结论:成功构建了HBC与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒,为流感通用疫苗的研制奠定了基础.
关键词： 正粘病毒科 病毒融合蛋白质类/代谢 昆虫病毒 聚合酶链反应
