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克-雅二氏综合征文献资料
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人S100蛋白的表达及其抗血清的制备和脑脊液中S100含量测定方法的建立
目的建立定量检测脑脊液(CSF)及血清中S100蛋白的方法,探讨S100蛋白的检测在辅助诊断克-雅病(CJD)中的应用.方法利用脑cDNA文库,经PCR获得了S100基因并克隆至原核表达载体pGEX-2T上,在大肠埃希菌中表达了谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-S100融合蛋白;融合蛋白经亲和纯化后,免疫家兔,制备抗体;抗体经纯化后,用生物素(BNHS)标记,建立了可定量检测S100蛋白的生物素-亲和素系统ELISA方法,并初步用于临床脑脊液的检测中.结果所表达的GST-S100蛋白相对分子质量约为35 000,以其为抗原制备的S100特异性抗血清具有良好的免疫反应性.建立了定量检测脑脊液中S100蛋白的双抗体夹心ELISA方法,对3例"可能性的CJD"患者(14-3-3蛋白阳性)和15例无痴呆症状患者脑脊液进行检测,结果显示,3例CJD患者脑脊液S100含量均超过2.900 μg/L,而在无痴呆症状患者组中14例患者脑脊液S100含量都低于0.180 μg/L.对正常人和CJD患者血清进行检测,显示S100蛋白含量个体间差异很大.结论所建立的方法可用于脑脊液中S100蛋白的检测,进一步扩大标本量有助于明确脑脊液中S100蛋白的检测在辅助诊断CJD中的价值.
