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大鼠实验性心肌缺血再灌注后线粒体代谢基因与细胞损伤的关系
心肌缺血再灌注损伤(IR)常见于临床溶栓治疗、心脏移植、冠状动脉搭桥术、经皮冠状动脉球囊扩张术等治疗过程.在再灌注损伤学说中,无论是氧自由基学说,还是钙超负荷学说,其发生发展的过程都有一个共同的病理过程即能量不足,并由此诱发和加剧了细胞结构、代谢和功能异常.
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对氧磷酯酶192Gln/Arg基因多态性与老年人冠心病的相关性研究
冠心病是由遗传因素与环境因素相互作用所致的疾病,其易感基因的筛选已成为冠心病研究的重点之一.近年来,对氧磷酯酶(PON1)基因作为一种新的与冠心病相关的脂代谢基因已成为研究热点.我们旨在探讨PON1-192Gln/Arg基因多态性与老年人冠心病的关系.
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炎症微环境下代谢基因ARG1对结直肠癌细胞增殖的影响研究
目的 探讨炎症微环境下ARG1基因表达水平对人结直肠癌细胞增殖的影响.方法 选取人结直肠癌细胞系HT29细胞和巨噬细胞M2型细胞,通过小干扰RNA转染HT29细胞沉默ARG1表达,通过慢病毒载体系统转染HT29细胞高表达ARG1基因.实验共分6组:HT29单纯培养组、HT29与M2细胞共培养组、共培养+精氨酸酶抑制剂组、共培养+L-精氨酸组、ARG1高表达HT29与M2细胞共培养组、ARG1沉默HT29与M2细胞共培养组.精氨酸酶活性实验检测各组细胞中ARG1活性,ELISA法检测各组培养液中IL-6含量,CCK8试剂盒检测各组HT29细胞增殖能力.结果 与巨噬细胞M2型细胞共培养后HT29细胞中精氨酸酶活性明显高于单独培养组.外源性添加L-精氨酸或高表达ARG1基因后,HT29细胞精氨酸酶活性、IL-6分泌水平及细胞增殖水平均显著提高.外源性添加精氨酸酶抑制剂(Nor-NOHA)或转染siRNA沉默ARG1基因表达均能明显降低HT29精氨酸酶活性,IL-6分泌水平及细胞增殖水平均显著降低.结论 炎症微环境下过表达代谢基因ARG1能够增强结直肠癌细胞HT29的增殖能力.
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不同剂量氯吡格雷对氯吡格雷抵抗患者治疗作用的研究进展
氯吡格雷作为目前应用广的抗血小板药物之一,其治疗效果因多种因素的作用而存在差异,其中重要的因素包括氯吡格雷代谢基因的多态性、血小板反应性、药物相互作用等.针对氯吡格雷抵抗患者,增加氯吡格雷剂量以克服氯吡格雷抵抗,进而改善患者临床结局,是目前研究的一大热点.本文从氯吡格雷代谢基因、不同剂量、血小板反应性及治疗策略调整等方面着手,探讨不同剂量氯吡格雷对氯吡格雷抵抗患者的治疗作用.
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牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP代谢相关基因的克隆及表达纯化
目的 克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)中负责c-di-AMP代谢的相关基因,并使其在大肠杆菌中正确表达及高效纯化.方法 通过聚合酶链反应(PCR)克隆牙龈卟啉单胞菌ATCC33277的pgn0523、pgn1187和pgn2003三个基因,经过酶切后将目的基因片段与大肠杆菌表达质粒pET28a连接,分别构建出重组表达质粒pET-pgn0523、pET-pgn1187和pET-pgn2003.将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-p-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,通过十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和鉴定.用镍离子金属亲和层析法对重组蛋白进行分离纯化,BCA法检测目的蛋白的浓度.结果 目的基因pgn0523、pgn1187和pgn2003扩增产物条带与预期大小一致.重组表达质粒pET-pgn0523、pET-pgn1187和pET-pgn2003及其PCR产物琼脂糖凝胶电泳验证与预期大小相符,测序结果与GenBank中牙龈卟啉单胞菌ATCC33277国际标准菌株的基因序列100％一致.IPTG诱导后的菌体经SDS-PAGE检测得到3个大小分别为19.5×103、39.9×103、66.0×103的蛋白质增强条带,与预期大小相符.镍离子金属亲和层析柱纯化得到的蛋白与预期目的蛋白分子量一致,BCA法测定目的蛋白的浓度分别为0.708、0.523和0.861 mg.mL-1.结论 本研究成功克隆并表达纯化了牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP代谢相关蛋白,得到了较高浓度和纯度的目的蛋白,为进一步探究牙龈卟啉单胞菌c-di-AMP的生理功能及体内代谢途径奠定了基础.
