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SDF-1/CXCR4对脐血AC133+细胞趋化功能的影响
本研究探讨SDF1/CXCR4系统在脐血AC133+细胞趋化中的作用.用跨膜迁移实验(Transwell实验)确定SDF-1佳趋化浓度,采用双色直接免疫荧光标记法和流式细胞仪测定脐血AC133+细胞表面CXCR4表达水平,并评价SDF-1佳趋化浓度条件下细胞迁移率.结果发现,随着SDF-1浓度的增加,新鲜脐血AC133+细胞迁移率升高,但SDF-1浓度达到150 ng/ml时迁移率趋于平稳;当CXCR4阻断型抗体作用后,迁移率与未加SDF-1组无差异.重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养AC133+细胞时,在培养的早期趋化因子SDF-1受体CXCR4的表达升高,同时迁移率也升高,但随着培养时间的延长,CXCR4表达量渐渐降低,迁移率随之降低.结论:AC133+细胞趋化率与CXCR4表达量间存在相关性.
关键词： 脐血 AC133+细胞 SCF1/CXCR4 SDF-1 CXCR4 -
细胞因子介导的体外扩增对脐血干/祖细胞粘附分子表达的影响
目的比较脐血(CB)AC133+细胞扩增前后CD34+细胞亚群表面归巢相关粘附分子VLA-4(CD49d)、VLA-5(CD49e)、LFA-1(CD11a)、L-selectin(CD62L)和PECAM-1(CD31)等的表达情况,以评价细胞因子介导的体外扩增对干/祖细胞(HSPC)归巢功能的影响.方法将从新鲜CB标本中纯化的AC133+细胞接种于无血清培养基QBSF-60的无基质悬浮体系培养扩增14 d,加入早期作用因子FL、SCF和TP0组合(FST),并在接种0 d时添加一剂IL-3,分别于培养0,7、10和14 d检测扩增潜能和上述几种粘附分子的表达情况.结果 (1)在14 d的培养扩增中,各阶段的HSPC均得到有效扩增,至14 d时AC133+和CD34+细胞分别增加33.50和64.56倍;(2)表达上述粘附分子的各CD34+细胞亚群均有不同程度(约20～160倍)的扩增;(3)扩增后CD34+细胞表面的粘附分子CD11a、CD49e和CD49d的表达与原代CD34+细胞持平或上升,而CD62L和CD31的表达则有不同程度的下调.结论我们建立的短期培养体系不仅可以支持CB HSPC的有效扩增,而且扩增后HSPC总体上保持原有的归巢相关粘附分子的表达.
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不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响
目的探讨不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响.方法采用免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定新鲜分离的、不同培养条件下体外培养7、14d的脐带血AC133+细胞的扩增效率.结果新鲜脐带血AC133+细胞的比例为(0.93±0.2)%.短期液体扩增培养后,脐带血AC133+细胞的比例发生明显变化,其中在细胞因子SCF、FL和IL-3组合下,AC133+细胞的细胞数及扩增倍数与SCF、FL和IL-11组合相比较,差异非常显著(P＜0.01).结论在体外短期扩增培养中,早期效应细胞因子能显著上调脐带血AC133+细胞的比例;用SCF、FL和IL-3组合扩增脐带血造血干/祖细胞,能够获得更高的体外扩增效率.
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细胞因子不同的组合方式对人骨髓Ac133+细胞增殖的影响
目的 探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓AC133+富集细胞体外扩增的影响.方法 常规富集AC133+细胞,按照细胞因子不同的组合方式分为2组,在不同细胞因子组合刺激下进行体外对照培养,观察AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7天、14天、21天AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率.结果 观察组的细胞因子组合扩增倍数、集落形成数目于培养7天后明显高于对照组,P＜0.01;细胞凋亡率于培养21天后低于对照组,P＜0.05.结论 观察组的细胞因子组合方式既维持了干细胞自我更新的能力又在很大程度上扩增了造血祖细胞,显示了充分的优越性.
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不同组合方式的细胞因子对人骨髓AC133+和CD34+细胞增殖的影响
目的 探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓CD34+富集细胞及AC133+富集细胞体外扩增潜能的影响.方法 常规富集人骨髓CD34+及AC133+细胞,应用本研究组设计并已经证实的细胞因子组合方式,对人骨髓CD34+及AC133+富集细胞进行体外对照培养,分别观察CD34+和AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7、14、21 d CD34+和AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率.结果 AC133+细胞实验组在相同条件下细胞扩增倍数以及集落生成数目上均明显高于CD34+细胞实验组,相同条件下细胞凋亡率明显低于CD34+细胞实验组.结论 AC133+细胞包含有更多原始的造血干细胞,AC133作为造血干细胞抗原标记明显优于CD34.
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FL联合TPO体外培养AC133+细胞表面标记的变化
目的:探讨脐血造血干/祖细胞的体外扩增.方法:免疫磁珠法分离纯化脐血AC133+细胞,在细胞因子FLT3配体、血小板生成素作用下,体外扩增,检测有核细胞扩增的倍数.采用流式细胞仪分析细胞表面标志的变化.结果:FLT3联合血小板生成素体外培养2周.有核细胞扩增(18±8)倍.CD34细胞扩增2.8倍,AC133+未获扩增,CD34细胞纯度由(56±23)%下降到(8±1)%,AC133+细胞由85%下降到(0.1±0.1)%.随着体外培养时间延长至4周,有核细胞,CD34+进一步扩增.分别扩增475倍和17倍.但细胞随之发生分化,CD34+细胞占有核细胞中的比例下降至2%,AC133+细胞消失.CD45细胞上升到1.3%.结论:FL联合TPO长期培养AC133+细胞能使CD34细胞扩增.
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基质细胞源性因子-1对脐血AC133+细胞迁移功能的影响
目的 探讨了趋化因子即基质细胞源性因子-1(SDF-1)在脐血AC133+细胞迁移中的作用.方法 用跨膜迁移(Transwell)实验来确定SDF-1佳趋化浓度,并评价SDF-1佳趋化浓度条件下细胞迁移率.结果 随着SDF-1浓度增加,新鲜脐血AC133+细胞迁移率升高,但SDF-1浓度达到150 ng/ml时迁移率趋于平稳;当CXCR4阻断型抗体作用后,迁移率与未加SDF-1组无差异.结论 通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象.随着趋化因子SDF-1浓度的增高,迁移率递增,但当SDF-1浓度高到一定程度时,细胞趋化率达稳定,继续增高SDF-1浓度,细胞迁移率变化不显著,应用CXCR4阻断抗体后AC133+细胞迁移率与未加SDF-1差异无统计学意义.
