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三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响
本文研究观察三七皂苷(PNS)对造血细胞促进凋亡相关蛋白(Daxx、Fas)和抑制凋亡的核转录因子(NFkB、c-Rel)表达的影响,探讨PNS促进造血细胞增殖,支持生长存活的作用机制.采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞(CFU-GM、CFU-E)的增殖作用,台盼蓝拒染法观察细胞的存活率,涂片染色法观察细胞形态学的变化,用流式细胞术分析细胞凋亡状况.同时,用PNS处理粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-01 4种细胞株后,提取胞浆蛋白和核蛋白,Western免疫印迹观察Daxx、Fas、NFkB和c-Rel蛋白的表达水平.结果发现:①PNS能够刺激人骨髓红系、粒系祖细胞和HL-60等4种细胞株增殖.②HL-60等4种株细胞经PNS和饥饿处理后,活性良好,镜下未观察到凋亡的形态学特征;AnnexinV分析也未见凋亡的阳性细胞.③Western blot结果显示,经PNS处理的4株细胞Daxx蛋白表达水平与对照相比,下降幅度分别为33.3%-61.5%;HL-60细胞本身表达Fas蛋白低下,PNS处理后也无明显下降,而K562、CHRF-288和Meg-01细胞Fas蛋白表达与对照相比,下降幅度分别为33.3%-71.4%.④NFkB、c-Rel蛋白除HL-60细胞对PNS诱导无明显变化外,其余细胞均出现不同程度地增加,分别提高了2.0-2.7倍和1.5-2.3倍.结论:PNS在某种程度上能够抑制Daxx、Fas蛋白表达,而相应减少造血细胞的凋亡,同时也能通过上调NFkB、c-Rel转录因子,促进细胞增殖,并阻止半胱天冬酶(caspase)连锁链的活化而抑制造血细胞凋亡,这为PNS应用于临床治疗凋亡过度的疾病如再生障碍性贫血提供了可能性.
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电刺激小脑顶核对AD大鼠海马神经元c-Rel和Bcl-xl表达的影响
目的 研究电刺激小脑顶核(FNS)对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及脑内海马神经元c-Rel和Bcl-xl表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分成4组:Aβ1-40微量注射组(AD组)、假手术组(SC组)、Aβ1-40微量注射+电刺激小脑顶核组(FNS组)和Aβ1-40微量注射+电刺激齿状核组(DNS组),采用Morris水迷宫检测电刺激小脑顶核对AD大鼠认知功能的影响;通过HE染色、电镜观察电刺激小脑顶核对AD大鼠的海马神经元形态的影响;采用免疫组化法观察电刺激小脑顶核对AD大鼠海马神经元c-Rel和Bcl-xl的表达的影响.结果 与SC组比较,AD组、FNS组和DNS组每天隐匿平台逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)、海马CA1区的Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值差异显著(均P＜0.05); FNS组与AD组比较,大鼠每天逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),FNS组海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值为(0.46±0.04、0.65±0.09),较AD组阳性细胞OD值明显增高(P＜0.05),但齿状核刺激(DNS)组与AD组比较大鼠每天逃避潜伏期和海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞OD值无显著差异(P＞0.05).结论 电刺激小脑顶核能通过增强C-Rel及Bcl-xl的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力.
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核因子-κB家族成员c-Rel在自身免疫病发病机制及治疗中的研究进展
哺乳动物核因子-κB (NF-κB)家族由c-Rel、RelA(p65)、RelB、NF-κB1(p50/p105)以及NF-κB2(p52/p100)五名成员组成.相比于其它家族成员广泛表达于机体的各种细胞,c-Rel主要在活化的淋巴细胞和单核细胞中表达,并与多种免疫细胞的分化以及炎性因子的表达密切相关,从而在自身免疫病的病理过程中发挥着重要作用.
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大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达
目的:探讨Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后不同时间点NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达情况.方法:体外培养原代大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学鉴定神经元,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD 4 h组、OGD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组、OGD 4 h/R 12 h组、OGD 4 h/R 24 h组为实验组,采用免疫细胞化学、Western印迹检测NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达.结果:(1)免疫细胞化学(神经元烯醇化酶相关抗原及β-tubulin 3)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)免疫细胞化学、Western印迹结果显示OGD 4 h组NF-κB P50蛋白表达开始增加明显高于正常组(P<0.05),0GD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组NF-κB P50蛋白表达持续性升高,并在复氧后6 h达高峰(P<0.01),此后逐渐下降,至OGD 4 h/R 12 h时与正常组有显著差异(P<0.05),OGD 4 h/R 24 h NF-κB P50蛋白表达降低与正常组比较无统计学差异(P<0.05);(3)NF-κB c-Rel蛋白表达OGD 4 h组与正常组无差异(P>0.05),OGD 4 h/R 2 h至OGD 4 h/R 12 h表达持续增加,并在复氧后12 h达高峰(P<0.01),OGD 4 h/R 24 h仍未恢复到正常水平(P<0.05).结论:大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后激活了NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达,并具有时间相关性.
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IKK-NBD多肽通过调节c-rel对抗局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质炎症反应
目的 探讨局灶脑缺血再灌注大鼠不同时间点大脑皮质炎症反应及IKK-NBD多肽干预对抗炎症反应的机制.方法 采用线栓法制备Spragne-Dawley (SD)大鼠局灶脑缺血再灌注模型.将大鼠分为假手术组、模型组及IKK-NBD组,再下设再灌注1d和7d2个时相点.IKK-NBD组通过侧脑室定位定量注入4μL IKK-NBD.对各组进行Zea-Longa神经功能评分,HE染色观察病理变化,Western blot与荧光定量PT-PCR分别检测缺血皮质区c-rel蛋白和IκappaBα (IκBα)mRNA表达,ELISA检测缺血区炎症因子IL-1β和IL-10的含量.结果 ①再灌注1、7d时,IKK-NBD对模型大鼠行为学改善明显；②再灌注1、7d时,模型组病理改变较IKK-NBD组明显；③胞核c-rel蛋白:再灌注1、7d时,模型组均高于假手术组(P＜0.05)；再灌注1d时,IKK-NBD组高于假手术组(P＜0.05)；再灌注1、7d时,IKK-NBD组低于模型组(P ＜0.05,P＜0.01)；随着时间延长模型组和IKK-NBD组均降低(P＜0.01)；④IκBα mRNA:再灌注1、7d时,模型组和IKK-NBD组均高于假手术组(P＜0.05),7d较1d回落；再灌注1d时,IKK-NBD组高于模型组(P＜0.01)；⑤IL-1β:再灌注1、7d时,模型组与IKK-NBD组均明显高于假手术组(P＜0.01),浓度随时间降低；再灌注1d时,IKK-NBD组较模型组减少(P＜0.01)；IL-10:再灌注1、7d时,模型组与IKK-NBD组均明显高于假手术组(P＜0.01),浓度随时间降低；再灌注1、7d时,IKK-NBD组均高于模型组(P＜0.01).结论 IKK-NBD在局灶脑缺血再灌注损伤后早期可以通过上调IκBα限制c-rel入核,下调IL-1β,上调IL-10而减轻再灌注后炎症损伤；而脑缺血再灌注恢复期,少量c-rel可上调IL-10起到抗炎作用.
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银杏叶提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马神经元凋亡的影响
目的 观察银杏叶提取物(EGB)对A β25-35所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元c-Rel和Bcl-xl表达的影响.方法 采用双侧海马注射A β25-35制备AD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测EGB对模型大鼠认知功能的的影响;通过病理形态学观察EGB对模型大鼠的脑保护作用;采用免疫组化法观察EGB对模型大鼠海马神经元c-Rel和Bcl-xl的表达.结果 AD组与假手术组(SC)比较,每天隐匿平台逃避潜伏期均明显增长(P＜0.05),海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度明显减少(P＜0.05);ECB(150和300mg/kg)组与AD组比较,空间学习记忆能力明显改善(P＜0.05),海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度明显增高(P＜0.05).但EGB1(150mg/kg)组与EGB2(300mg/kg)组比较,每天隐匿平台逃避潜伏期和海马CA1区Bcl-xl和c-Rel阳性细胞光密度值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EGB能通过增强c-Rel及Bcl-xl的表达,抑制海马神经元的凋亡,改善AD大鼠学习记忆能力.
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C-Rel在日光性角化病、鲍温病和皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 观察C-Rel在日光性角化病、鲍温病和皮肤鳞状细胞癌中的表达,并初步探讨其意义.方法 采用免疫组织化学技术(SP法)对正常皮肤组织10例,日光性角化病、鲍温病组织各30例及皮肤高、中、低分化鳞状细胞癌组织共90例进行C-Rel染色,并采用Image-Pro Plus 6.0(IPP)图像分析软件定量分析每个视野阳性表达的平均光密度值.结果 C-Rel在正常皮肤组的平均光密度值为0.004 5±0.002 1;日光性角化病组为0.023 9±0.020 2;鲍温病组为0.051 0 ±0.016 2;高分化鳞状细胞癌组为0.079 8±0.0188;中分化鳞状细胞癌组为0.082 3±0.018 9,低分化鳞状细胞癌组为0.084 6±0.019 6.C-Rel在各组别的阳性表达差异有统计学意义(P＜0.05).正常皮肤组与高、中、低分化鳞状细胞癌组,日光性角化病组与高、中、低分化鳞状细胞癌组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).其余各组之间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 C-Rel与复层鳞状上皮细胞的分化和增殖相关,可作为上皮细胞来源肿瘤的标记物.
