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阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血因子GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血功能恢复的影响
本研究探讨阿霉素(ADM)诱导早期生长因子(Egr-1)启动子调控的造血因子基因表达对荷瘤小鼠化疗后造血功能恢复的作用.将构建的携带有Egr-1启动子的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)cDNA和增强型绿色荧光蛋白(FGFP)cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内.实验小鼠随机分4组:①ADM诱导的HFCL/EG组(HFCL/EG+ADM组),②ADM诱导的HFCL组(HFCL+ADM组),③单纯输注HFCL/EG组(HFCL/EG组)和④单纯输注HFCL组(HFCL组),每组6只动物.观察外周血象动态改变,用流式细胞术检测eGFP+人基质细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测GM-CSF mRNA及其蛋白的表达.结果表明:化疗组与未化疗组相比外周血白细胞降低,而且下降幅度较低,恢复加快;各组间CFU-GM数无显著性差异;肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达不相关;ADM处理后实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞;RT-PCR和Western blot显示GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强.结论:ADM诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法具有化疗后促进造血恢复作用.
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066鼻和鼻窦粘膜的创伤修复
创伤修复是一个高度协调的过程,它包括凝块形成、炎症反应、免疫反应以及终的组织修复和成熟.现在仅有极少数关于鼻和鼻窦粘膜特异性修复的资料.方法:对创伤修复的基本原理进行简短总结之后,重点讨论有关各种体内、体外鼻和鼻窦粘膜创伤修复模型的资料并注重其临床应用.主要发现:对早期生长因子作用下上皮细胞特异性再生调节的观察,突出了修复过程中细胞外基质与上皮细胞之间复杂的关系.然而,依据内镜和组织形态学观察确定的术后阶段只有很少的非特异性的联系.
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Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法对SCID小鼠辐射防护的初步探讨
目的探讨辐射诱导启动子调控的造血因子基因表达对照射后造血保护的作用。方法将构建的携带有Egr-1启动子的Flt3配基(FL)cDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA双顺反子表达载体导入基质细胞后，联合人CD34＋细胞输入经亚致死剂量照射的重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内，观察外周血象动态改变和人造血细胞及其基质细胞植入的变化。结果实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻，恢复加快，骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞，而各组间骨髓中CD45+细胞、CD34+细胞、CFU-GM及骨髓有核细胞计数差异无显著性。结论 Egr-1启动子调控的造血因子基因疗法具有一定的辐射造血保护作用。
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化疗诱导Egr-1启动子调控的GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血损伤的作用
背景与目的: 电离辐射可以通过产生活性氧激活Egr-1启动子高度保守序列CArG,Egr-EG为构建的上游含Egr-1调控序列CArG元件,启动TNF或GM-CSF的pCIneo表达载体,该机制可用于辐射所致的造血损伤或治疗肿瘤.化疗药物通常是通过产生活性氧和DNA损伤导致肿瘤细胞死亡,我们假设化疗药物可以产生活性氧.因此,化疗可以诱导Egr-1启动子调控下游造血因子基因表达,这种化疗诱导基因疗法针对化疗所致的造血损伤具有恰当的治疗效果.本文旨在探讨化疗诱导Egr-1启动子调控的造血因子基因表达对化疗后造血恢复的作用.方法: 将构建的携带有早期生长因子(Egr-1)启动子的GM-CSFcDNA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入荷瘤(黑色素瘤)小鼠体内,对其实施5-FU化疗,观察外周血象动态改变、人基质细胞植入检测、外源基因eGFP、GM-CSFmRNA、蛋白表达以及对CFU-GM的增殖作用的检测.结果: 实验组与对照组相比外周血白细胞下降幅度明显减轻,恢复加快,而各组问CFU-GM差异无显著性.肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达无关:5-FU处理后72 h实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞,RT-PCR和Western印迹显示GM-CSF mRNA和GM-CSF蛋白表达增强.结论: 5-FU诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法对化疗后造血损伤具有促进造血恢复作用.
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大鼠小体积肝移植物再灌注早期EGR-1的表达及其意义
目的 探讨早期生长因子(EGR-1)在大鼠小体积肝移植物早期损伤中的表达及意义.方法 雄性SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO组),小体积肝移植物组(30%供肝组),全肝移植物组(100%供肝组).采朋两袖套法建立肝移植模型,比较再灌注24 h内3组肝功能指标变化、肝脏组织病理学改变及肝移植物内EGR-1和内皮素-1(ET-1)表达的变化.结果 假手术组AST水平明显低于其余两组(P＜0.01),而100%供肝组AST水平低于30%供肝组,其中6,24 h时点上,两者差异具有统计学意义(P＜0.01).光镜检查显示24 h 30%供肝的肝寞明显扩张,肝窦内衬细胞崩解、分离.假手术组未见 EGR-1和ET-1表达,30%供肝组EGR-1和ET-1表达明显强于100%供肝组.结论 小体积肝移植物早期损伤与EGR-1高表达及受其调控的ET-1表达上调有关.
