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bcl-2小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究
为了探讨以bcl-2基因作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性,构建bcl-2基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,在G418筛选后应用Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;Western blot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白Bax和耐药相关蛋白ZNRD1的表达变化.结果表明:成功构建了bcl-2的小干扰RNA载体并转染HL-60/VCR;经蛋白质水平检测证实成功建立了bcl-2低表达的白血病细胞模型;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达耐药相关蛋白ZNRD1.结论:bcl-2小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转白血病细胞的耐药性.
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转录相关锌带蛋白基因在肾癌组织中的表达
目的 研究转录相关锌带蛋白基因(ZNRD1)在肾癌及肾脏正常组织巾的表达.方法 应用免疫组化法,检测71例肾癌组织和24例癌旁正常肾脏组织中ZNRD1蛋白的表达,并分析ZNRD1蛋白表达与肾癌Gleason分级和临床分期的关系.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,分别检测20例肾癌及痛旁正常肾脏组织中ZNRD1 mRNA和蛋白的表达.结果 免疫组化染色结果 显示,ZNRD1蛋白主要定位于细胞核.ZNRD1蛋白在24例肾癌及其相应的癌旁正常肾脏组织中的阳性表达率分别为91.7%(22/24)和20.8%(5/24),差异具有明显的统计学意义(P＜0.01).ZNRD1蛋白的表达与肾癌Gleason分级和临床分期均无显著的相关性(均P＞0.05).RT-PCR检测结果 显示,ZNRD1 mRNA在肾癌组织中的相对表达量为0.6186,明显高于癌旁正常肾脏组织(0.4273,P＜0.01).Western blot检测结果 湿示,ZRND1蛋白在肾癌组织中的相对表达量为0.5623,亦明显高于癌旁正常肾脏组织(0.3885,P＜0.01).结论 ZNRD1可能在肾癌的发生发展中发挥着重要作用.
关键词： 肾肿瘤 免疫组织化学 Western blot RT-PCR ZNRD1 -
ZNRD1基因的克隆及其反义核酸对胃癌耐药细胞阿霉素蓄积的影响
为获得ZNRD1基因的编码区序列,构建反义真核表达载体,通过检测ZNRD1基因反义核酸转染对胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR阿霉素(ADM)积蓄能力的影响,评价ZNRD1在抗胃癌细胞多药耐药性方面的应用前景.用PCR方法扩增目的基因序列,PCR产物经DNA序列测定证实后,采用分子克隆技术,将所获目的基因全长cDNA片段按反方向克隆入真核表达载体pcDNA3.1+的多克隆位点之间,对重组质粒进行酶切鉴定.用脂质体介导法将ZNRD1反义核酸转染SGC7901/VCR,流式细胞仪(FACS)检测SGC7901/VCR细胞内阿霉素的蓄积量.结果应用PCR反应扩增出特异性片段,经DNA序列分析,证实与文献报道的ZNRD1基因编码区序列一致;构建了反义真核表达载体pcDNA3.1-ZNRD1;转染SGC7901/VCR细胞后,可提高细胞内ADM蓄积量.ZNRD1反义核酸转染后,胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR对抗肿瘤药物ADM的积蓄作用提高,提示ZNRD1反义核酸具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用.
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ZNRD1小干扰RNA对HL-60/VCR细胞耐药性逆转的研究
目的:探讨转录相关锌带蛋白基因(zinc ribbon domain-containing 1 protein,ZNRD1)作为靶分子进行白血病多药耐药基因治疗的可行性.方法:Western blot检测ZNRD1在白血病细胞中的表达;构建ZNRD1基因的小干扰RNA载体并将其转导入HL-60/VCR细胞,G418筛选稳定转染细胞株;MTT法检测细胞转染前后生长速度和药物敏感性的变化;Westernblot检测细胞转染前后凋亡相关蛋白bcl-2、Bax和耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达变化.结果:ZNRD1在HL-60/VCR细胞中的表达明显高于HL-60细胞;成功建立了低表达ZNRD1的白血病细胞模型;转染后的细胞对长春新碱和阿霉素的敏感性增强,且低表达P-gp和bcl-2.结论:该小干扰RNA真核表达载体能在一定程度上逆转了白血病细胞的耐药性.
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ZNRD1在肝癌中的表达及对HepG2细胞增殖的影响
[目的]检测ZNRD1基因在肝癌中的表达并探讨其对HepG2细胞增殖的影响.[方法]Western blot技术检测ZNRD1在7例肝癌组织和相应癌旁组织中的表达;脂质体介导法将ZNRD1的真核表达载体转染肝癌细胞系HepG2,G418筛选后应用Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度的变化.[结果]ZNRD1基因在肝癌组织中的表达显著低于癌旁组织;成功建立了ZNRD1高表达的肝癌细胞模型;转染后的肝癌细胞生长速度明显下降.[结论]ZNRD1基因可能参与肝癌的发生,对肝癌细胞的生长可能起重要调控作用,具备一定的基因治疗应用前景.
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PRM1及 ZNRD1表达在结肠癌生长侵袭转移中的作用研究
目的：探讨鱼精蛋白（PRM1）及锌带蛋白（ZNRD1）在结肠癌中的表达及在结肠癌生长侵袭转移中的作用。方法：RT-PCR 检测 PRM1及 ZNRD1在结肠癌患者和正常人中的表达；ZNRD1过表达细胞系构建及慢病毒包装 PRM1-RNAi ；MTT 法检测细胞活力，transwell 迁移和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力，western blot 检测 Bax， Bcl-2，基质金属蛋白酶（MMP 2），MMP 9的表达。结果：与正常组比较，结肠癌患者中 PRM1表达量过高，ZNRD1表达量较低，差异具有显著性。与正常组比较，PRM1表达下降及 ZNRD1表达上升能降低结肠癌细胞 RKO 活力和迁移侵袭能力，并下调 Bcl-2，MMP 2，及 MMP 9表达，上调 Bax 表达。结论：PRM1及 ZNRD1在结肠癌表达异常，并参与结肠癌细胞的生长侵袭转移。
