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MicroRNA-182在判断淋巴细胞肿瘤患者糖皮质激素耐药中的应用
目的:研究淋巴细胞肿瘤患者miR-182表达与糖皮质激素耐药的相关性及其诊断价值.方法:运用RT-PCR方法检测淋巴瘤患者(68例,骨髓标本20例,血浆标本48例),多发性骨髓瘤患者(24例,骨髓标本14例,血浆标本10例),急性淋巴细胞白血病患者(3例,血浆3例),非淋巴系统疾病患者(18例,骨髓8例,血浆10例)miR-182的表达.结果:难治的淋巴细胞肿瘤患者的miR-182的表达量明显高于初治患者(P＜0.05).初治淋巴细胞肿瘤患者的miR-182的表达量同正常对照组之间无显著差异.患者的miR-182的表达,随糖皮质激素用量增加而增高(P＜0.01).当骨髓淋巴细胞miR-182表达为10.09,诊断淋巴肿瘤细胞糖皮质激素耐药的灵敏度为100％,特异度为88.2％;血浆miR-182为1.393,诊断淋巴肿瘤细胞糖皮质耐药的灵敏度为90.9％,特异度为51.3％.结论:发生糖皮质激素耐药的淋巴细胞肿瘤的miR-182表达明显上调.miR-182作为一种新的生物标志物可以应用于淋巴细胞肿瘤糖皮质激素耐药的诊断.
关键词： 淋巴瘤 糖皮质激素耐药 microRNA-182 实时荧光定量PCR -
原发性肾病综合征患儿血、尿MIF和IL-1β与糖皮质激素反应异质性相关研究
目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory fact,MIF)、白介素-1β(interleukin-lβ,IL-1β)与原发性肾病综合征(primary nephritic syndrome,PNS)患儿糖皮质激素(glucocorticoid,GC)反应的相关性,了解MIF、IL-1β在原发性肾病综合征GC反应异质性中的意义.方法 选取40例初发肾病综合征患儿为研究对象,根据随访1年的结果,4例患儿失访,予以剔除,36例患儿按照对GC的疗效分为两组,GC敏感型肾病综合征(steroid-sensitive nephritic syndrome,SSNS)组22例,GC耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephritic syndrome,SRNS)组14例,另选12例健康体检儿童作为正常对照组,各组入选儿童均于同一时间点分别收集外周静脉血2ml、尿液10ml作为待测标本.采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测各组患儿血清、尿液MIF和IL-1β蛋白表达水平,并对其结果进行分析比较.结果 GC治疗前,SRNS组患儿血清、尿液中MIF、IL-1β蛋白表达水平高于SSNS组及正常对照组(P ＜0.05);GC治疗4周时,SRNS组和SSNS组患儿血清、尿液MIF、IL-1β蛋白表达水平分别与治疗前比较,差异有统计学意义(P ＜0.05);PNS患儿血清MIF表达水平与IL-1β表达水平呈正相关,相关系数r1=0.826,P1＜0.01,尿液MIF表达水平与IL-1β表达水平也呈正相关,相关系数r2=0.548,P2＜0.01.结论 不同GC反应PNS患儿血清、尿液MIF和IL-1β蛋白表达水平有统计学差异,MIF表达异常与GC应用密切相关,GC应用可不同程度影响GC反应差异PNS患儿血清、尿液MIF表达水平,并导致IL-1β表达水平改变.
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 白介素-1β 肾病综合征 糖皮质激素耐药 -
雷帕霉素逆转急性淋巴细胞白血病CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药的研究
目的 探讨雷帕霉素是否可以逆转地塞米松(DEX)耐药的急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株CEM-C1细胞的GC耐药性.方法 以儿童T-ALL GC耐药株CEM-C1和GC敏感株CEM-C7为研究对象,MTT法检测不同浓度(1 000 ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml 和0.1 ng/ml)雷帕霉素及其联合1 μmol/L地塞米松(DEX)作用后对细胞增殖的影响;细胞离心甩片瑞氏染色法观察细胞形态学变化;Annexin V/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;PI染色法检测细胞周期改变.结果 ①不同浓度雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞,对细胞生长的抑制作用均呈时间和浓度依赖性,联合应用1 μmol/L DEX后,这一生长抑制作用显著增强,24 h IC50约为100 ng/ml.②以终浓度100 ng/ml雷帕霉素作用于CEM-C1和CEM-C7细胞18、24及48 h,细胞形态学与对照相比均无明显变化;Annexin V-PI双染流式细胞术检测均未见明显凋亡;细胞周期测定发现两种细胞均阻滞于G1期,S期细胞比例均明显降低.③以终浓度100 ng/ml雷帕霉素联合1 μmol/L DEX作用于CEM-C1细胞后,瑞氏染色发现CEM-C1细胞于24 h出现细胞核改变,48 h出现明显凋亡;Annexin V/PI 双染细胞凋亡检测显示细胞凋亡率较单用雷帕霉素及DEX时显著增加,18 h时早期凋亡细胞开始增多,24 h时为明显;细胞周期测定显示S期细胞比率较单用雷帕霉素时显著降低,而G1期细胞显著增多.结论 雷帕霉素能够逆转CEM-C1细胞对GC的耐药性,其机制有待进一步深入研究.
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雷帕霉素逆转T-ALL Jurkat细胞对糖皮质激素耐药
目的 探讨雷帕霉素能否有效逆转T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞对糖皮质激素(GC)的耐药.方法 用10 nmol/L雷帕霉素(Rap 组)、1 μmol/L 地塞米松(Dex 组)、10 nmol/L雷帕霉素联合1 μmol/L地塞米松(Rap + Dex 组)和0.05% DMSO和 0.01% 乙醇(对照组)分别处理Jurkat细胞.MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot法分析mTOR及细胞周期、凋亡相关蛋白表达情况.结果 10 nmol/L雷帕霉素能有效抑制mTOR信号通路,逆转Jurkat细胞对GC耐药.雷帕霉素和地塞米松协同作用可有效上调细胞周期抑制蛋白p21和p27的表达,并协同下调细胞周期素D1的表达,从而阻抑细胞在G1期.雷帕霉素协同地塞米松,通过上调Bim表达,活化caspase-3,促进Jurkat细胞凋亡.结论 雷帕霉素可有效逆转T-ALL Jurkat细胞对GC耐药.包含雷帕霉素和地塞米松的化疗方案有望成为治疗耐药T-ALL的有效方案.
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肾病综合征外周血单个核细胞凋亡与P-糖蛋白170表达
目的 检测原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)细胞凋亡、P-糖蛋白170(P-gp170)的表达情况,分析二者关系,探讨其在糖皮质激素(GC)耐药中的作用.方法 对28例PNS患儿分别于GC(强的松)治疗前和治疗4周时采血,流式细胞仪(FCM)检测PBMC细胞凋亡、P-gp170表达情况,并进行相关性分析.依据对GC的反应分为激素敏感组(SSNS组,16例)、激素耐药组(SRNS组,12例),另设10例健康体检儿童作为对照组.结果 (1)GC治疗前PBMC在SSNS组、SRNS组及对照组均有凋亡,凋亡率分别为(6.14±1.85)％、(6.44±1.83)％和(5.56±1.53)％,3组间差异无统计学意义(P＞0.05)；与治疗前比较,治疗4周后SSNS组凋亡率增高为(11.48 ±6.25)％(P＜0.01),SRNS组无明显变化[(6.94±1.87)％,P＞0.05].(2)GC治疗前P-gp170在SSNS、SRNS、对照组表达率分别为(4.54±3.10)％、(11.78±4.52)％和(2.30±2.07)％,3组间差异有统计学意义(P＜0.01),SRNS组高于其他2组,SSNS组高于对照组；治疗后P-gp170在SSNS、SRNS组的表达率较治疗前增高为(7.29±2.69)％、(15.36±4.36)％,差异有统计学意义(P均＜0.01),且SRNS组高于SSNS组(P＜0.01).(3)PBMC细胞凋亡与P-gp170表达未见线性相关(r=-0.174,P＞0.05).结论 (1)PBMC的凋亡延迟可能参与PNS患儿GC耐药.(2)外周血P-gp170表达增高可能与PNS患儿GC耐药有关.(3)PBMC细胞凋亡率及P-gp170表达情况可作为判断PNS患儿预后的指标.
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儿童原发性肾病综合征外周血GRβ及TNF-α的变化及意义
目的 探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)上糖皮质激素受体β(GRβ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)与糖皮质激素治疗效应之间的关系.方法 以30例PNS患儿作为观察组,根据随访结果分成激素耐药型(SRNS)和激素敏感型(SSNS)2 组,各15例.10名健康儿童作为正常对照组.应用RT-PCR 检测各组PBMC上GRβmRNA的表达;采用ELISA方法检测各组血浆中TNF-α的含量;并分析以上指标与肾脏病理及相关实验室指标的关系.结果 (1)SSNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达及血浆TNF-α水平均高于对照组(P＜0.05).(2)SRNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达及血浆TNF-α水平均高于SSNS组(P＜0.01).(3)15例SRNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达与肾脏病理分级成等级正相关(r=0.496,P＜0.05);与24小时尿蛋白定量(24hUTP)成等级正相关(r=0.458,P＜0.05).(4)15例SSNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达与24hUTP无相关性(P＞0.05).(5)30例PNS患儿PBMC GRβmRNA的表达与血浆TNF-α水平成等级正相关(r=0.450,P＜0.05).结论 GRβ可以作为监测PNS患儿病情以及预后的指标之一.TNF-α升高可能导致GRβmRNA的表达升高,在SRNS形成与发展中起到重要作用.
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儿童原发性肾病综合征外周血糖皮质激素受体β及热休克蛋白90的变化及其意义
目的 探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)上糖皮质激素受体β(GRβ)及热休克蛋白90(HSP90)与糖皮质激素治疗效应之间的关系.方法 以30例PNS患儿作为观察组,根据随访结果分成激素耐药型肾病综合征(SRNS)和激素敏感型肾病综合征(SSNS)2组,各15例.10例健康儿童作为正常对照组.应用RT-PCR检测了各组PBMC上GRβmRNA及HSP90mRNA的表达；并分析以上指标与肾脏病理及相关临床实验室指标的关系.结果 (1) SSNS组患儿PBMC上GRβmRNA、HSP90mRNA的表达均高于对照组(均P＜0.05).(2)SRNS组患儿PBMC上GRβmRNA、HSP90mRNA的表达均高于SSNS组(均P＜0.01).(3)SRNS组患儿PBMC上GRβmRNA的表达与肾脏病理分级成等级正相关(r=0.496,P＜0.05)；与24h尿蛋白定量(24 h UTP)成等级正相关(r =0.458,P＜0.05).(4) SSNS组患儿PBMC上GRβmRNA的表达与24 h UTP无相关性(P＞0.05).结论 GRβ及HSP90可能参与了SRNS的发生与发展.GRβ可以作为监测PNS患儿病情以及预后的指标之一.
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基于GEO数据库筛查急性淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药相关基因
目的:基于全基因组表达芯片筛查急性淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药相关的基因,分析其可能参与的信号传导通路.方法:从GEO数据库中下载表达谱数据集,应用R软件分析急性淋巴细胞白血病糖皮质激素敏感组与耐药组差异表达基因(DEGs),并对差异基因进行基因功能(GO)分析和信号通路富集分析,构建基因间相互作用网络,筛选出关键基因.结果:共筛选出差异基因109个,其中表达上调基因86个,下调基因23个.GO富集分析得到DEGs主要涉及免疫应答,凝血调节,细胞增殖和凋亡、细胞迁移等生物过程;pathway分析发现DEGs主要富集参与MAPK信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB-MAP通路、细胞凋亡等;互作网络分析挖掘出的关键基因FOS、NFKB1、MAP2 K1、IRS1、CASP3.结论:糖皮质激素耐药的急性淋巴细胞白血病存在基因差异表达,筛选出耐药相关的重要作用基因及信号通路.
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急性淋巴细胞白血病治疗中糖皮质激素耐药的机制研究进展
目的:急性淋巴细胞白血病是起源于造血干细胞的,具有高度侵袭性的恶性肿瘤,其主要特点为外周血及骨髓中极度增多的异常淋巴细胞,通常伴有正常造血功能受抑制.糖皮质激素作为一种重要的抗炎及免疫抑制剂,被广泛用于各类急慢性感染、 自身免疫性疾病、 过敏性疾病、 淋巴细胞白血病、 淋巴瘤、 器官移植后的抗排异治疗等.在治疗急性淋巴细胞白血病的过程中,对于那些化疗失败的患者,主要原因为化疗药物耐药,其中糖皮质激素耐药占了很大一部分,然而,对于糖皮质激素耐药在急性淋巴细胞性白血病的发生发展及作用机理,目前研究得并不十分透彻.本文对在治疗急性淋巴细胞白血病过程中可能导致糖皮质激素耐药的分子机制进行综述和探讨.
