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神经节苷脂GM3诱导U266细胞凋亡及作用机制研究
目的:探讨神经节苷脂GM3对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用及其可能的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测不同浓度GM3作用U266细胞48 h后细胞增殖抑制及凋亡水平;实时荧光定量PCR检测不同浓度GM3对BCL-2、BAX mRNA表达水平的影响.结果:神经节苷脂GM3可以诱导U266细胞凋亡并抑制其增殖,且随着GM3浓度增加作用增强(早期凋亡率相关系数r=0.765,P＜0.05;细胞增殖抑制率相关系数r =0.899,P＜0.05);与对照组比较,实验组随着GM3浓度增加,凋亡基因BAX mRNA相对表达量逐渐升高(r =0.968,P＜0.05),而抗凋亡基因BCL-2 mRNA相对表达量逐渐降低(r=-0.727,P＜0.05).结论:GM3可诱导U266细胞凋亡并抑制其增殖,且具有浓度依赖性,其作用机制可能与上调BAX的表达和下调BCL-2有关.
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GM3通过MMP-9调节B16细胞的运动性
目的 通过不同的方法来研究GM3对MMP-9的调节作用.并进一步验证了GM3对细胞运动性的调节.方法 分别用RT-PCR,Zymography,HPTLC,western blotting和transwell的方法来检测MMP-9的mRNA表达水平,MMP-9的活性,GM3,Akt的磷酸化以及细胞的运动性.结果 通过几种不同的方法来研究是否GM3参与MMP-9的调空:a.通过转染半乳糖转移酶的顺反序列来调节GM3的表达,从而初步证明GM3可以调节MMP-9的表达;b.通过外加GM3可以清楚的观察到MMP-9的表达量升高.c.神经节苷脂抑制剂D-PDMP的加入更进一步的证明了MMP-9的表达始终与GM3的表达相关;另外,通过P13K抑制剂的试验进一步证明了GM3通过P13K来调节MMP-9的表达.在此基础上,更进一步的证明了神经节苷脂可以调节细胞的运动性.结论 GM3可以通过P13K/Akt信号传导途径来正调控MMP-9的表达,并且调节细胞的运动性.
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神经节苷脂GM3对小鼠巨噬细胞脂质含量的影响
目的:探讨神经节苷脂GM3对小鼠巨噬细胞(MΦ)脂质含量的影响.方法:采用45 g/L无菌可溶性淀粉溶液刺激后,收集昆明种小鼠腹腔MΦ ,经体外培养分为6组,应用常规酶法观察各组MΦ总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯和甘油三酯的变化.结果:GM3与低密度脂蛋白(LDL)同时存在,可促进MΦ对LDL的吸收,提高MΦ的脂质含量,而LDL、GM3单独存在时,不能显著升高MΦ内各种脂质含量.结论:GM3可能通过激活MΦ产生多种生物活性因子氧化LDL或通过GM3对LDL的非氧化修饰,促进MΦ对LDL的吸收,引起脂质堆积.
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神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和血管内皮生长因子表达的影响
目的 研究外源性神经节苷脂GM3对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和VEGF表达的影响.方法 不同浓度GM3干预HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞学技术检测细胞凋亡率,RT-PCR技术检测细胞VEGF mRNA表达水平,Western blot技术检测细胞VEGF蛋白水平.结果 (1) GM3浓度分别为2、10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞生长抑制率分别为9.8％、32.9％、50.7％和78.6％,半数抑制浓度(IC50)为49.8 μmol/L.(2) GM3浓度分别为10、50和250 μmol/L时,HeLa细胞凋亡率分别为(4.9±0.4)％、(15.1±0.3)％、(24.4±0.7)％.(3)当GM3浓度高于10 μmol/L时,HeLa细胞VEGF mRNA表达水平以及VEGF蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05).结论 外源性神经节苷脂GM3能呈浓度依赖性抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖,促进HeLa细胞凋亡,下调HeLa VEGF mRNA水平和蛋白水平,提示GM3可能通过调节肿瘤细胞凋亡和肿瘤血管生成而发挥双重抗肿瘤作用.
