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外泌小体内miRNA在多发性骨髓瘤进展中的作用及可能机制
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种起源于B细胞系的浆细胞恶性增殖性疾病,位居血液系统恶性肿瘤发病率的第二位.尽管针对MM的治疗方法不断取得进展,但患者的生存率及预后仍然不理想.因此,进一步明确MM的发病机理,以求发现新的治疗方法提高生存率、改善预后显得尤为重要.现有的研究已证实,骨髓微环境在MM的发病及进展过程中起着重要作用,且肿瘤微环境可通过改变其内细胞分泌的外泌小体(exo-some)所含物质(miRNA、mRNA及蛋白质)调控肿瘤细胞的生物学特性,促进肿瘤进展及转移,其中外泌小体所含的miRNA因具有抑癌基因和癌基因功能受到了广泛关注.现有研究结果显示,此种外泌小体所含miR-15a低表达,同/或miR-135b及miR-21高表达时,可通过调控一系列信号通路,如PI3K/Akt/eNOS/VEGF、FIH-HIF、MAPK/ERK/Ras等影响MM的发生发展,有望成为治疗MM的新靶点.本文就现有关于MM分泌的外泌小体所含miRNA在MM的发生发展中的作用及其可能的机制作一综述.
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外泌小体在白血病细胞和骨髓间充质干细胞交叉对话中的作用
越来越多的证据提示,骨髓微环境在白血病的发生、发展和耐药等过程中发挥着重要的作用,其不仅是造血干细胞增殖、分化和成熟的土壤,也是白血病微小残留病灶潜在的天然庇护所以及复发和产生多药耐药的根源.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是骨髓微环境中重要的基质细胞,在近年来被证明是影响白血病细胞生物学特性的主要因素之一.MSC和白血病细胞不仅可以通过直接接触相互影响,还可以通过分泌外泌小体(exosome)进行交叉对话.外泌小体由多种活细胞分泌的纳米级囊泡小体,其中含有蛋白质、RNA和mRNA等多种组分,参与细胞间的物质交换和信息交流,在多种生理和病理过程中发挥着重要作用.外泌体的研究是白血病与微环境的一个新兴领域,将极大地推动有关白血病的研究进展,为白血病治疗带来新的契机.
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miR-214、miR-503在上皮性卵巢癌组织及血清外泌小体中表达的研究
目的 检测正常卵巢、化疗敏感上皮性卵巢癌(EOC)及化疗耐药EOC组织及血清外泌小体中p53相关miR-214、miR-503的表达差异,初探p53相关miRNA与EOC耐药的关系.方法 采用免疫荧光法检测正常卵巢、化疗敏感EOC及化疗耐药EOC组织中p53的表达;RT-PCR法检测血清外泌小体及上述3种组织中p53相关miR-214、miR-503表达的差异.结果 免疫荧光法发现,与正常组织相比,p53在EOC组织中荧光较弱,其中化疗耐药EOC组织与化疗敏感EOC组织间比较差异无统计学意义(P﹥0.05).与敏感组相比,耐药组血清外泌小体中miR-214上调3倍,miR-503下调3倍,与组织中变化一致.结论 p53相关miR-214及miR-503由外泌小体携带进入血液循环,并可能在EOC化疗耐药中发挥重要作用.
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3T3细胞源外泌小体对小鼠结直肠癌细胞CT26增殖的影响
目的 观察小鼠成纤维细胞株3T3来源的外泌小体(exosome)对小鼠结直肠癌细胞CT26增殖能力的影响,并探讨其机制.方法 通过PureExo exosome提取试剂盒提取3T3细胞培养基上清中的exosome,按照不同浓度及时间作用于CT26细胞,并利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测CT26细胞增殖能力,碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期改变,Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CT26中DNA甲基转移酶1(DNMT1)及抑癌基因p16的蛋白及mRNA表达.结果 CCK-8实验中450 nm处吸光度(A)值96 h时,exosome处理组(10 mg/L:1.17±0.04,50 mg/L:1.69±0.03,200 mg/L:2.08 ±0.05),显著高于对照组(Control):0.89 ±0.03,即随着exosome处理浓度的提高,CT26细胞增殖逐渐增快;同时细胞周期进程加快,表现为处于S期及G2/M期的细胞比例增多,处于G0/G1期比例减少.而Western blot提示调控DNA甲基化的重要蛋白DNMT1明显增多,同时伴有其下游蛋白及细胞增殖、周期相关的分子如p16、p21、细胞周期素(Cyclin) D1和CDK6的水平变化,RT-qPCR也验证了上述分子mRNA水平的变化.结论 小鼠成纤维细胞株3T3来源exosome可促进小鼠结直肠癌细胞CT26增殖,加快其细胞周期进程,并且可能通过DNMT1改变其下游分子发挥上述作用.
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成纤维细胞系3T3细胞来源exosome对小鼠乳腺癌细胞增殖能力的影响
目的 观察小鼠成纤维细胞系3T3来源的外泌小体(exosome)对小鼠乳腺癌细胞4T1增殖能力的影响,并探索其中可能的机制.方法 PureExo Exosome提取试剂盒提取3T3细胞上清液中的exosome,按照不同浓度及时间作用于4T1细胞,CCK8法检测4T1细胞的增殖能力,BrdU/PI双掺入法测定细胞DNA合成及细胞周期;免疫印迹法(Western blot)及荧光定量实时PCR(qPCR)检测人表皮生长因子受体2(epidermal growth factor receptor-2,EGFR2,也称HER2)及下游PI3K/AKT信号转导通路相关蛋白的变化.利用HER2单克隆抗体靶向药物赫赛汀(Herceptin),观察exosome是否影响4T1细胞对于Herceptin敏感度.结果 exosome处理组OD450吸光度值显著高于对照组(P＜0.05),细胞增殖及细胞周期进程加快.Western blot及qPCR实验提示随着exosome浓度的增加,HER2表达逐渐升高,AKT磷酸化水平增加.而同时给予exosome可明显增加4T1细胞对Herceptin的敏感度.结论 小鼠成纤维细胞系3T3来源exosome可促进小鼠乳腺癌细胞4T1增殖及周期进程,并且可能通过HER2激活其下游PI3K/AKT信号通路发挥上述作用.
