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遗传性铁粒幼细胞贫血研究进展及基因治疗的可能性
δ-氨基-γ酮戊酸合酶(ALAS)是血红蛋白合成重要的限速酶,目前发现实际有两种ALAS,真正影响血红素合成的是δ-氨基-γ酮戊酸合酶2(ALAS2).X连锁铁粒幼细胞贫血(XLSA)与ALAS2的基因突变有明确的关系,近年陆续报道25种可导致XLSA的ALAS2的基因突变,其中两种是本课题组首次报道的.针对这种明确的单基因疾病有可能开展基因治疗.
关键词： 遗传性铁粒幼细胞贫血 X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血 ALAS2 基因突变 基因治疗 -
CTCF通过ALAS2调控K562细胞红系分化
目的 研究CTCF对红系分化的影响及相应调控机制.方法 敲低K562细胞中的CTCF,通过Hemin诱导和荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术,分析Hemin诱导0到4天的对照和CTCF敲低细胞的珠蛋白基因表达水平,研究CTCF敲低对红系分化的影响.利用基因表达芯片全基因组范围分析CTCF敲低造成的影响.根据公共数据分析推测CTCF调控红系分化的潜在机制,通过染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)验证.结果 随着诱导的进行,对照和敲低细胞中的珠蛋白基因HBE和HBG表达均逐渐升高,但CTCF敲低细胞中HBE和HBG基因水平均低于对照细胞,提示CTCF敲低能够抑制K562细胞分化过程中珠蛋白基因的表达.通过检测全基因组范围的基因表达水平,共筛选到1 128个差异表达基因,其中616个基因在CTCF敲低样本中表达上调,512个基因表达下调.利用IPA软件进行功能富集分析,显示主要相关的生理系统发育与功能包括血液系统的发育与功能.公共数据显示存在CTCF-GATA1-ALAS2作用关系,ALAS2基因上存在GATA1结合;对照和CTCF敲低细胞的ChIP-qPCR结果表明,敲低CTCF能够降低GATA1在ALAS2基因区的结合.结论 CTCF可能通过影响GATAI在ALAS2基因区的结合来调控K562细胞红系分化.
