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急性髓系白血病预后相关的分子标志
众多的无法被细胞遗传学方法检测出来的基因异常(如基因突变及表达异常等)已越来越多的被发现.这使得对不同预后的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分析进入分子水平.例如:存在转录因子C/EBPα(CCAAT enhancer binding factor alpha,CCAAT增强结合因子α亚单位)或核磷蛋白(nucleophosmin-1,NPM)基因突变的AML往往提示有较好的预后,而有着MLL基因(mixed-lineage leukemia,混合系白血病基因)部分串联重复突变(MLL-PTD),FLT3(FLM样酪氨酸激酶3)基因串联重复突变(FLT3-ITD)以及wT-1(Wilms'Tumor 1,肾母细胞瘤1)基因突变的AML却提示不良预后.本文将探讨这些异常基因分子的特点,联系及其对AML预后的影响.
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荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者BAALC基因及临床意义
目的 研究急性髓细胞白血病(AML)患者BAALC(brain and acute leukemia cytoplasmic)基因的表达水平及其临床意义.方法 构建实时定量PCR检测BAALC基因表达的技术,并定量检测63例初治AML患者BAALC基因的表达水平及分析其与临床疗效的关系.结果 建立的实时定量PCR方法的标准曲线相关系数大于0.99.49例(78%)初治AML患者存在BAALC基因表达;BAALC基因高表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(26.3±18.1)×109/L、(78.3±21.8)g/L、(76.9±64.5)×109/L和(61.2±22.3)%,低表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(30.2±21.7)×109/L、(81.6±30.9)g/L、(73.9±57.2)×109/L和(54.3±16.3)%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05);正常核型初治AML患者中BAALC高表达率为68%(25/37),高于非正常核型AML患者[23%(6/26)],差异有统计学意义(x2=12.093,P=0.001);正常核型初治AML患者中BAALC基因高表达患者化疗的完全缓解率(CR)为65%(20/31),低于低表达患者[84%(27/32)],差异有统计学意义(x2=6.573,P=0.013).结论 BAALC基因高表达是正常核型AML患者一个重要不良预后因素.
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实时定量逆转录PCR检测急性髓系白血病患者骨髓细胞BAALC基因表达
目的:建立实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性髓系白血病(AML)骨髓细胞BAALCmRNA的方法,并对24例初诊AML患者骨髓标本进行检测,初步观察其表达及意义.方法:构建BAALC基因转录本的阳性标准品质粒,利用ABI Prism7300型实时定量PCR仪进行检测,BAALC mRNA定量结果以校正比值(NQ)表示,NQ=BAALC mRNA拷贝数/ABL mRNA拷贝数.结果:RQ-PCR实验敏感度为5个拷贝.ABL及BAALC基因CT值的批内差及批间差均<2.26%.FAB各亚型中,M2型BAALC基因高表达率高于M3(P=0.182).结论:建立的RQ-PCR检测AML患者骨髓细胞BAALC mRNA的方法稳定可靠,敏感度高.BAALC基因高表达可能是原发性AML患者一个重要不良预后因素.
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急性髓系白血病患者BAALC的表达及其临床意义
目的:检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者BAALC(brain and acute leukemia,cytoplasmic)基因的表达并探讨其临床意义.方法:收集93例初诊AML患者(研究组)和36例非恶性血液病患者(对照组)骨髓,应用实时定量PCR (real-time quantitative PCR,RQ-PCR)法检测骨髓单个核细胞中BAALC转录本水平.采用ROC曲线根据其表达水平对AML患者再次分组并比较组间临床参数的异同,分析其临床意义.结果:AML患者BAALC表达水平明显高于对照组(P ＜0.001).AML患者的BAALC表达水平根据临界值2.107(ROC曲线敏感度51％、特异性100％)分为高表达组和低表达组.两组患者的性别、年龄、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量和基因突变差异无统计学意义(P＞0.05),但FAB分型、WHO分型、不同核型以及染色体危险程度分型差异有统计学意义(P＜0.05),BAALC高表达组原始细胞计数明显高于低表达组(P＜0.001).BAALC高表达组治疗后完全缓解率低于BAALC低表达组(P=0.087);BAALC高表达组患者总体生存时间明显低于BAALC低表达组(P=0.031),正常核型AML患者中BAALC高表达组总体生存时间也明显低于低表达组(P =0.043).结论:BAALC高表达是AML患者预后不良的影响因素,可作为AML辅助诊断的参考标志.
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BAALC转录本1-6-8逆转录病毒表达载体的构建
目的 构建含BAALC(brain and acute leukemia, cytoplasmic)1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体.方法 从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC 1-6-8获得目的 基因,选用pMDTM18-T Vector做TA克隆.分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNATM3.1/myc-His A+质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中.PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定.结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535 bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664 bp,双酶切及测序结果证实目的 基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中.结论 分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体.
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BAALC蛋白在急性白血病中的表达及其临床意义
目的 探讨脑和急性白血病胞质(Brain and acute leukemia cytoplasmic,BAALC)蛋白在急性髓细胞性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)的表达及其临床意义.方法 采用Western blot方法半定量检测BAALC 蛋白在58例AML患者(初诊24例、完全缓解28例和复发6例)的骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BM-MNCs)的表达水平,15例非恶性血液病患者以及AML细胞系KG1α和HL-60分别作为阴性和阳性对照.结果 KG1α和HL-60细胞BAALC均为阳性高表达,非恶性血液病对照者BAALC表达均为阴性.BAALC阳性率在AML初诊组(83.3％)与复发组(100％)均高于完全缓解(CR)组(7.1％)和阴性对照组(0) (P＜0.001);AML初诊组和复发组的BAALC蛋白相对含量明显高于CR组和阴性对照组(P＜0.01),且CR组和阴性对照组之间BAALC表达阳性率和相对含量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BAALC蛋白在AML中表达水平异常增高,提示BAALC可能与AML的发生发展密切相关.
