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多聚左旋赖氨酸协同超顺磁性氧化铁标记大鼠C6脑胶质瘤细胞
目的 观察多聚左旋赖氨酸(PLL)协同超顺磁性氧化铁(SPIO)对大鼠C6胶质瘤细胞的标记率及对标记细胞生物活性的影响.方法 将未标记的C6胶质瘤细胞设为对照组,25 mg/L SPIO(A组)、25mg,LSPIO+0.75mg,LPLL(B组)、50mg,LSPIO+1.5mg,LPLL(C组)标记的C6胶质瘤细胞设为实验组.各组细胞处理后分别培养6、24及48 h进行MTS细胞活性检测;普鲁士蓝染色评定标记率;3.0 T MRI GRE/30° T2*WI序列对各组细胞体外成像,比较R2*值及信号强度差异.结果 各实验组细胞处理后48 h均未见细胞活性显著降低(均P>0.05).普鲁士蓝染色显示B组、C组细胞标记率均达到98%以上,而A组约为70%,SPIO与PLL混合标记细胞随SPIO浓度增高染色程度逐渐加深.3.0T MRI体外细胞成像对标记细胞有较敏感的信号变化,对照组及A、B、C组R2*值分别为11.76±5.74、12.13±4.39、61.22±27.85、90.07±35.59,对照组与A组间R2*值差异无统计学意义(P>0.05);B、C组分别与其它各组间比较差异均有统计学意义,且此两组之间差异亦有统计学意义(均P<0.01).结论 PLL可增强SPIO对C6脑胶质瘤细胞的标记作用并对标记细胞活性未产生明显影响.3.0T MRI GRE/30°T2*WI序列对离体标记细胞有较敏感的信号变化,R2*值随着细胞内SPIO浓度的增加而增大.25 mg/L SPIO+0.75 mg,L PLL可获得满意的体外标记效果.
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Angiopep-2修饰载盐酸多柔比星脂质体的制备与评价
目的 研究用靶向功能基Angiopep-2修饰多柔比星(DOX)脂质体,增加药物在脑胶质瘤部位递送.方法 薄膜分散法制备空白脂质体,靶向功能基Angiopep-2通过膜材料中DSPE-PEG-MAL连接对其进行修饰,DOX作为模型药物通过pH梯度法装载,制得Angiopep-2修饰脂质体(Dox-AL).体外实验中,初步考察了大鼠C6细胞对游离DOX、普通DOX脂质体(DOX-NL)和DOX-AL的摄取.C6脑胶质瘤模型小鼠尾静脉注射DOX、DOX-NL和DOX-AL,LC-MS/MS检测小鼠血浆、脑和肿瘤组织DOX浓度.结果 DOX脂质体粒径约为100 nm,包封率99%;大鼠C6细胞对DOX-AL的摄取高于DOX-NL;C6脑胶质瘤模型小鼠iv给予剂量为5 mg·kg-1DOX、DOX-NL和DOX-AL后,3组制剂药物在体内快速分布,较缓慢消除,均符合三室模型.与DOX相比,脂质体制剂能显著延长DOX血液循环时间,增加药物入脑机会;DOX-AL在脑和肿瘤中的AUC0-t分别是DOX-NL的2.92和7.76倍.结论 Angiopep-2修饰的脂质体作为载体可通过受体介导的方式促进药物胶质瘤靶向递送.
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全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究
目的:探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖抑制及其分子机制.方法:MTT法检测全反式维甲酸作用于大鼠C6脑胶质瘤细胞后,观察其对细胞增殖抑制率的影响.流式细胞仪观察肿瘤细胞周期及凋亡率的变化.电镜观察C6细胞超微结构变化.Western blot法在不同时间点对凋亡相关基因caspase-3活性蛋白产物的表达进行了检测.结果:MTT结果表明ATRA对C6细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性.流式细胞仪检测证明与对照组相比,处理组C6细胞发生G1期阻滞;S、G2期细胞比例下降;细胞出现亚二倍峰,凋亡比例明显增加.电镜下全反式维甲酸作用72h后处理组C6细胞呈凋亡改变:如核固缩、染色质趋边凝聚.Western blot检测发现,处理组出现了caspase-3蛋白活性裂解片段.结论:全反式维甲酸抑制C6脑胶质瘤细胞生长,全反式维甲酸抑制脑胶质瘤的作用机理可能至少通过改变细胞周期分布、诱导凋亡来实现.
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温阳通窍中药复方对大鼠脑胶质瘤作用机制的体内实验研究
[目的]研究温阳通窍中药复方对大鼠C6脑胶质瘤的抑制作用机制.[方法]C6胶质瘤细胞大鼠颅内接种,建立脑胶质瘤模型.磁共振成像(MRI)条件下将模型动物随机分为对照组、温阳通窍复方低剂量组和高剂量组.除对照组外,其余各组给予对应剂量的药物,3周后取脑胶质瘤组织,进行病理组织学检测并进行相关分析,检测基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、结缔组织生长因子(CTGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)指标.[结果]MRI检测表明体内实验成功构建大鼠脑胶质瘤模型.组织病理学观察结果显示,与对照组动物相比,给药组动物肿瘤微血管减少,可见变性坏死瘤细胞,瘤组织坏死较对照组明显,高剂量治疗组略强.温阳通窍给药组SDF-1、CTGF、bFGF较对照组呈降低趋势.[结论]温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的增殖确有抑制作用,该作用或许与肿瘤组织中SDF-1、CTGF、bFGF的表达相关.
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氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
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近红外光谱活体在位测量C6荷瘤鼠脑局部血氧饱和度
目的 探讨新的近红外光谱技术来测量C6 胶质瘤荷瘤鼠脑局部血氧饱和度(SO2)的特点.方法 利用光学探头微创测量30只C6 荷瘤鼠瘤体局部SO2,并与对侧脑组织SO2进行比较.结果 瘤体内SO2较正常脑组织SO2低,两者差异有统计学意义(P＜0.05);有坏死或出血个体SO2曲线出现明显低峰.结论 通过微创光学探头可以测量胶质瘤内SO2.
关键词： C6脑胶质瘤 血氧饱和度(SO2) 近红外光谱(NIRS) -
胶质瘤模型单剂量全脑放疗后血脑屏障开放的时间阈及紧密连接变化的研究
目的 观察C6脑胶质瘤15 Gy单次全脑放射线照射后血-脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的动态变化及紧密连接蛋白claudin-5的表达变化,观察大鼠血-脑屏障(BBB)开放的时间阈.方法 荷瘤鼠(建模后17天)60只,行15 Gy全脑放射线单次照射,并于照射后24h、3d、7d、14d、21d、28d各处死10只,各5只分别行硝酸镧(La+)透射电子显微镜示踪法观察肿瘤邻近处(brain adjacent to tumor,BAT)即距肿瘤边界2mm以内BBB通透性及免疫组织化学法测定紧密连接蛋白claudin-5的变化研究.结果 (1)照射后24h、3d硝酸镧渗出广泛,基底膜、血管腔外、脑组织间隙内及细胞内均可见；第7d为La3渗出减弱,基底膜及脑组织间隙内见细小的镧颗粒；第14d为La3+渗出至局部基底膜,较前减少；第21d、28d均为La3+无渗出.统计学分析硝酸镧渗出程度显示:24h和3d＞7d＞14d＞21d和28d(P＜0.05).(2)照射后24h、3d紧密连接蛋白claudin-5呈轻度表达,呈碎片状表达；照射后第7d为轻中度表达,血管扭曲、变形:照射后第14d为中度表达,血管扭曲、变形,但仍呈连续状态；照射后第21d、28d为中强度表达,出现连续与碎片表达并存.统计学分析claudin-5表达程度显示:24h和3d＜7d＜14d＜21d和28d(P＜0.05).结论 荷瘤鼠单次15 Gy照射后BBB开放,且2周后BBB通透性逐渐消失,表现出时间依赖性.
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大鼠C6脑胶质瘤血-脑屏障的硝酸镧示踪电镜研究
目的 研究C6脑胶质瘤不同区域血-脑屏障(BBB)的超微结构特征及血-脑肿瘤屏障(BBTB)通透性增高的途径.方法 运用成瘤3周SD大鼠C6脑胶质瘤动物模型,取肿瘤中心、肿瘤边缘、距肿瘤边界2 mm以内及2 mm以外的同侧大脑半球和对侧大脑半球脑皮质等五个部位的脑组织,采用外源性硝酸镧透射电镜示踪法,观察BBB/BBTB超微结构特征.结果 La3+在肿瘤中心与边缘部充填并通过血管内皮细胞之紧密连接至血管腔外-脑间质裂隙内,距肿瘤边界2 mm以内的同侧大脑半球脑组织也有La3+渗出至局部基底膜,而其它观察脑区La3+则完全封闭于血管腔内;各部位脑血管内皮细胞胞浆内均无La3+;BM呈线状连续,管腔内无瘤细胞.结论 C6胶质瘤紧密连接开放导致BBTB通透性增高;C6胶质瘤诱导的屏障功能破坏随其至肿瘤距离的增加而减弱.
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大鼠C6脑胶质瘤血-瘤屏障的HRP示踪电镜研究
目的 研究C6脑胶质瘤不同区域BBB的通透性改变及超微结构特征.方法 运用中晚期SD大鼠C6脑胶质瘤动物模型,以肿瘤中心、肿瘤边缘、邻近肿瘤脑组织(BAT)、远隔肿瘤脑组织(BDT)和正常脑组织(NBT)为研究热点区,采用外源性辣根过氧化物酶(HRP)酶组化光镜、示踪透射电镜观察脑血管内皮细胞(BMECs)紧密连接(TJs)和胞饮的改变.结果 光镜观察肿瘤区HRP在血管腔及管壁周围弥散存在,而非肿瘤区则呈线状排列于血管内皮腔面;电镜示HRP在肿瘤中心与边缘部充填并通过BMECs之TJs至血管腔外-脑间质裂隙内,BAT有HRP渗出至局部基底膜(BM),而NBT和BDT则完全封闭于血管腔内;肿瘤BMECs胞浆内吞饮囊泡数显著高于非肿瘤组(P＜0.05),但两者几乎均无充填HRP的囊泡(P＞0.05).结论 TJs开放是C6脑胶质瘤血-瘤屏障(BTB)通透性增高的结构基础和物质血管外渗的主要途径,胞饮作用甚微;C6胶质瘤诱导的屏障功能破坏随肿瘤距离的增加而减弱.
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C6胶质瘤血管通透性改变与MMP-9、iNOS表达的相关性研究
目的 研究C6脑胶质瘤的不同区域BBB通透性改变与相关功能信号蛋白表达的关系.方法 运用中晚期SD大鼠C6脑胶质瘤动物模型,以肿瘤、邻近肿瘤脑组织(BAT)、远隔肿瘤脑组织(BDT)和正常脑组织(NBT)为研究热点区,通过免疫组化分析内源性血清清蛋白血管外渗,判定BBB破坏程度;免疫组化法测定C6胶质瘤MMP-9和iNOS表达,分析MMP-9、iNOS活性与微血管通透性改变之间的关系.结果 中-强度清蛋白弥散沉积于C6胶质瘤间质中,BAT弱阳性,BDT与NBT呈阴性(P＜0.05);C6脑胶质瘤中iNOS主要为轻度-中度表达,肿瘤血管内皮细胞呈强着色;MMP-9主要呈中度-强表达,侵袭边缘瘤细胞和血管内皮细胞呈强染色;BAT区多有iNOS与MMP-9轻度表达,NBT为阴性(P＜0.05).不同区域清蛋白渗出与iNOS、MMP-9表达均呈显著正相关(P＜0.05).结论 C6脑胶质瘤微血管通透性增高,MMP-9和iNOS参与介导了肿瘤血管内皮屏障功能受损.
