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切割穹窿海马伞大鼠海马内Brn-4 mRNA的表达变化——原位杂交法
目的 探讨大鼠穹隆海马伞切割侧与正常侧海马内Brn-4 mRNA表达的差异.方法 切割大鼠右侧穹窿海马伞,切割后14d制备海马冰冻切片,用体外转录法制备地高辛标记的Brn-4 RNA探针进行原位杂交.每只动物随机计数3张切片切割侧和正常侧Brn-4 mRNA的阳性细胞,测定其吸光度(A)值,进行配对t检验分析.结果 切割侧和正常侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层均见Brn-4 mRNA阳性细胞,两侧细胞数无明显差异,但切割侧阳性细胞平均吸光度值较正常侧明显增加(P＜0.01);而在齿状回门区和颗粒下层,切割侧Brn-4 mRNA阳性细胞数和平均吸光度值均较正常侧升高(均P＜0.01).结论 穹窿海马伞切割侧海马锥体细胞层和齿状回颗粒层细胞中Brn-4 mRNA的表达量明显增强,而在齿状回门区和颗粒下层中,其阳性细胞数和表达量均较正常侧明显升高.结合本课题组以往的工作,提示切割穹窿海马伞后,海马中Brn-4 mRNA表达的增高可能与促进其中的神经干细胞向神经元分化有关.
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穹窿海马伞切割大鼠海马内Brn-4 mRNA 的表达变化
目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异.方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割海马伞后1、3、7、14、21及28 d组.取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA表达水平的变化.结果海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3 d开始升高,14 d达到高水平,随后下降,28 d左右恢复至正常水平.结论切割穹窿海马伞后海马内Brn-4 mRNA表达明显上调,可能与促进神经干细胞更多地向神经元和AChE阳性神经元分化有关.
关键词： 穹窿海马伞切割 海马 Brn-4 逆转录-聚合酶链反应 大鼠 -
RT-PCR/Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4 mRNA的表达变化
目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异.方法:42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹窿海马伞后1、3、7、14、21及28 d组.取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用RT-PCR/Southern杂交方法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA的表达变化.结果:海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3 d开始升高,14 d达到高水平,随后下降,28 d左右恢复至正常水平.结论:切割穹窿海马伞后海马内Brn-4 mRNA表达明显上调,可能与促进海马内移植的或自体的神经干细胞向神经元分化有关.
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Brn-4在偏侧帕金森病大鼠模型纹状体中的表达变化
目的:探讨Brn-4在偏侧帕金森病大鼠模型纹状体中的表达变化.方法:用6-OHDA注入80只SD大鼠右侧前脑内侧束(medial forebrain bundle,MFB),行为学检测得成功PD模型48只,随机分成7d、14d、21d、28d 4组,每组各12只.每组中的6只动物和6只正常对照大鼠的纹状体进行Brn-4 Western blot检测;另6只动物的纹状体进行Brn-4免疫组化染色.结果:Western blot检测发现Brn-4的相对表达量(Brn-4/β-actin)正常对照组为0.123±0.02,7d组为0.538±0.04,14d组为0.192±0.05,21d组为0.122±0.02,28d组为0.084±0.02;而模型侧/正常侧纹状体Brn-4阳性细胞的比值7d、14d、21d和28d组分别为1.560±0.14,0.855±0.15,0.638±0.11和0.369±0.10.结论:PD大鼠模型纹状体中Brn-4蛋白于前脑内侧束注射6-OHDA后7d表达量急剧增高,而14d后则急剧下降,到28d时已低于正常水平.
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大鼠海马神经干细胞Brn-4基因的特异性siRNA研究
目的 筛选出高效针对大鼠海马神经干细胞Brn-4基因沉默的特异性siRNA.方法 设计4对抑制Brn-4基因表达的特异性siRNA序列,通过脂质体转染人体外培养的大鼠海马神经干细胞中,采用RT-PCR和免疫荧光检测转染细胞Bin-4基因的表达,筛选出沉默Brn-4基因为有效的siRNA序列,并优化其转染条件.结果 4对siRNA不同程度地阻断了海马神经干细胞Brn-4基因的表达,阻断效率高的1~#siRNA适转染剂浓度为0.5 μmol/L,佳转染时长为48 h.结论 应用1~#siRNA可以高效率地沉默大鼠海马神经干细胞Bin-4基因的表达.
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Brn-4在大鼠海马神经干细胞向神经元分化中的作用
为探讨Brn-4在海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备切割海马伞侧和正常侧海马提取液,将鼠胚海马神经干细胞球分成3组:(1)切割组加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(2)正常组加入含正常侧海马提取液的DMEM/F12无血清培养基;(3)对照组加入单纯的DMEM/F12无血清培养基.培养后第14 d行Brn-4/MAP-2免疫荧光双标染色.在荧光显微镜下分别计数每个视野下Brn-4单标神经元和Brn-4/MAP-2双标神经元的数量,并测量双标神经元的胞体面积、细胞周长以及Brn-4的免疫荧光强度.用图像处理系统和Stata7.0软件对所得数据进行统计学分析.结果显示:Brn-4/MAP-2双标神经元数在切割组中较多、胞体较大、突起较丰富,且Brn-4的免疫荧光亦较强;正常组次之,对照组差.上述数据经组间比较分析,3组间差异有显著性意义(P＜0.01).本研究结果提示Brn-4在海马神经干细胞向神经元分化过程中可能发挥重要作用.
