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何首乌水提物大鼠连续灌胃给药28 d肝毒性研究——胆汁淤积相关机制探讨
目的:考察何首乌水提物(AEPM)对大鼠肝脏中胆汁酸合成、代谢、转运相关分子影响,探讨何首乌肝毒性相关机制.方法:SD大鼠分别灌胃AEPM60,30 g·kg-1,每天1次,连续28 d.28 d后解剖取肝脏,分别采用荧光定量PCR和Westernblot检测肝脏MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1等分子的mRNA和蛋白表达水平.结果:与正常组相比,AEPM高剂量组雄性大鼠肝脏中MRP3和BSEP的mRNA表达均显著升高(P＜0.05),而AEPM高、低剂量组肝脏FXR的mRNA表达均显著降低(P＜0.05);AEPM高、低剂量组雌性大鼠肝脏MRP3,MRP2,BSEP,CYP7A1的mRNA表达均显著升高(P＜0.05).Westernblot检测结果显示,AEPM高、低剂量给药组雄性和雌性大鼠肝脏中MRP3,MRP2,BSEP,FXR,CYP7A1蛋白表达水平与mRNA变化基本一致,但均未达统计学显著差异.结论:AEPM大鼠灌胃给药28 d对肝脏胆汁酸合成、转运、排泄相关蛋白的表达具有一定的影响,在mRNA表达水平既具有胆汁淤积分子特征,同时也可见促进胆汁酸排泄的分子特征.
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内毒素对小鼠胆汁酸转运体Ntcp mRNA和Bsep mRNA表达及肝功能的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)建立内毒素血症小鼠模型中,LPS剂量和作用时间对肝脏胆汁酸转运体钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白(Ntcp)和胆盐输出泵(Bsep) mRNA表达,以及肝功能的影响.方法 128只雄性C57 BL/6小鼠,腹腔注射LPS(剂量分别是5、10、20、40 mg/kg),制作内毒素血症模型;并设生理盐水(NS)对照组、健康对照组;按给药后取材时间进一步分为24 h、48 h、72 h组,每组8只.留取小鼠血液样本测定血清TBIL、TBA、ALT、AST水平,留取肝脏标本,实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-qPCR)测胆汁酸转运体Ntcp mRNA和BsepmRNA表达量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理学变化.各组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验进行统计.结果 (1)内毒素血症各组小鼠Ntcp mRNA、BsepmRNA相对表达量在24～72 h内下降,24 h表达低[LPS 5、10、20、40 mg/kg组Ntcp mRNA相对表达量分别为(0.64±0.02)、(0.53±0.14)、(0.25 ±0.09)、(0.15 ±0.07),Bsep mRNA相对表达量分别为(0.74 ±0.12)、(0.58±0.11)、(0.41±0.09)、(0.27±0.11)],并随着LPS剂量增加逐渐降低,24 h各组差异均有统计学意义(Ntcp mRNA、Bsep mRNA对应F=5.29、F=9.31,P=0.04、P=0.02).(2)内毒素血症小鼠各组总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)较对照组均升高(P＜0.05),24 h达峰值;其中40 mg/kg LPS处理后72 h较24 h均有显著降低,TBIL浓度为(1.29±0.25)μmol/L和(1.71±0.22) μmol/L,TBA浓度为(6.97±0.98) μmol/L和(8.96±1.01)μmol/L,ALT水平为(120.17±21.08) U/L和(179.22±16.57) U/L,AST水平为(360.34±35.31) U/L和(510.97±34.70) U/L,均P＜0.05.(3)5、10 mg/kg LPS组小鼠24 h见肝组织疏松淡染,间质炎性细胞浸润,48 h及72 h见肝细胞嗜酸性变、空泡样变,炎性细胞浸润,胆小管增生;20、40 mg/kg LPS组小鼠各时间点均见肝组织结构改变,灶性坏死,间质炎症细胞浸润,胆小管增生、扩张.结论 内毒素血症肝损伤模型24h时即出现Ntcp mRNA和Bsep mRNA表达下调,且随LPS剂量增加而加重,可能是内毒素肝损伤的重要机制.
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何首乌4种单体成分灌胃14天的小鼠肝肾毒性研究
目的 研究何首乌中的4种单体成分二苯乙烯苷、大黄酸、大黄素甲醚、大黄素的肝肾毒性,为何首乌的肝毒性研究提供有益探索.方法 50只ICR小鼠随机分为对照组、二苯乙烯苷组、大黄酸组、大黄素甲醚组和大黄素组.每组按照100 mg·kg-1剂量灌胃给药,每天给药1次,对照组给予相应量的生理盐水,连续给药14 d.末次给药结束后,各组小鼠禁食不禁水12 h,称重,取血并剖取肝脏、肾脏,计算肝系数和肾系数,检测血清生化指标和肝脏胆汁酸转运体mRNA变化.结果 大黄酸、大黄素甲醚和大黄素组小鼠体重显著降低(P＜0.05),大黄酸给药组小鼠的肝系数显著升高(P＜0.05);二苯乙烯苷可同时显著升高TG、CRE、ALB和GLU的水平(P＜0.05或P＜0.01),蒽醌类成分大黄素、大黄酸、大黄素甲醚均可引起BUN显著降低(P＜0.05或P＜0.01),大黄酸和大黄素均可引起TG显著下降(P ＜0.05或P＜0.01);4种单体成分对胆汁酸转运体MRP2、BSEP等作用显著(P＜0.05或P＜0.01).结论 何首乌的4种单体成分二苯乙烯苷、大黄酸、大黄素甲醚、大黄素按照100 mg·kg-1剂量灌胃给药14 d可改变ICR小鼠的血清生化指标,对不同胆汁酸转运体有明显的作用.
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胆汁酸与慢性功能性便秘
慢性功能性便秘(chronic functional constipation,CFC)是一种病因繁多、病机复杂、以排便障碍为主要症状且多伴有精神心理异常的疾病,属于临床上难治性疾病,严重影响以老年女性为主要发病群体患者的生活质量并且造成精神心理障碍.便秘患病率在亚洲为8.75％,老年女性为主要发病人群,尤其是65岁以后的女性[1].目前关于CFC发病机制的研究已经涉及多个方面,而关于胆汁酸(bile acids,BA)对CFC调节作用的研究甚少.
关键词： 胆汁酸 慢性功能性便秘 胆汁酸转运体 G蛋白耦联胆汁酸受体 -
肝内胆汁淤积的基础和临床研究现状
胆汁淤积(cholestasis)因胆汁摄取、合成或分泌障碍引起,也可因胆道梗阻形成[1].引起胆汁淤积的病因多样,肝细胞、胆管细胞以及肠道的胆汁酸转运体密切参与胆汁淤积的发病,近年来的研究以此为靶点取得诸多进展,并为胆汁淤积的诊断和治疗提供了新的思路和方法.
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清热化湿疏肝祛瘀法对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织Ntcp、Bsep及Mrp2表达的影响
目的:观察清热化湿疏肝祛瘀法配伍的中药复方对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织Ntcp、Bsep及Mrp2表达的影响.方法:使用异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导大鼠急性肝内胆汁淤积,并以5g/kg·d的清热化湿疏肝祛中药复方干预,同时以熊去氧胆酸(90mg/kg·d)为对照,于ANIT给药后24、48及72h随机处死模型组及药物干预组中1/3数量的大鼠,取肝组织行免疫组化检测Ntcp、Bsep及Mrp2蛋白表达.结果:模型组24、48、72h肝组织Ntcp、Bsep及Mrp2蛋白表达均较正常组明显下降(P＜0.05,P＜0.01);复方组24及48h的Ntcp蛋白表达较模型组明显增加(P＜0.05);复方组及熊去氧胆酸组三个时相点Bsep、Mrp2蛋白表达较模型组明显增加(P＜0.05,P＜0.01).结论:清热化湿疏肝祛瘀法中药能够上调ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积大鼠肝脏细胞Ntcp、Bsep和Mrp2的表达,这可能是其防治急性肝内胆汁淤积的重要作用机制之一.
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大鼠肝脏缺血再灌注损伤后胆汁酸转运体Bsep与Mrp2的表达及意义
目的 探讨大鼠肝缺血再灌注损伤(I/R)后高胆红素血症发生的分子机制.方法 60只健康雄性SD大鼠随机分成两组,A组为对照组,只解剖第一肝门,不行肝门阻断,B组为缺血再灌注后,阻断第一肝门30 min后开放.于术后的1h、6h、12 h、1d、3d开腹,每个预定时相点取5只大鼠进行取材和指标检测,应用全自动生化分析仪检测血清TBA、DBIL、ALT的含量,应用HE染色方法检测各组肝组织病理学改变,应用免疫组织化SP(Streptavidin-perosidase)法和实时定量逆转录-聚合酶链反应(Read time Reverse Transcriptase-PCR)技术,检测各组大鼠肝组织中的Bsep与Mrp2蛋白和mRNA表达情况.结果 鼠肝缺血30 min再灌注模型肝组织呈轻度炎症改变,各时相点均未见肝细胞坏死的发生.B组大鼠缺血再灌注后1h～1d血清中TBA、DBIL、ALT的含量明显增加,具有统计学意义(P＜0.05).B组大鼠缺血再灌注后1h～1d胆汁酸转运体Bsep mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),同时Bsep蛋白在肝细胞膜上染色不规则、稀疏,蛋白质的表达减少,胞浆内未见表达；再灌注后1 h～12h,Mrp2 mRNA表达水平下调(P＜0.05),再灌注后1d,Mrp2 mRNA表达水平恢复正常,而再灌注后的1 h～1d,Mrp2蛋白在肝细胞膜上染色稀疏、散乱,表达减少,并可见胞浆内表达.结论 大鼠缺血再灌注损伤(I/R)后肝脏组织中Bsep表达下调和Mrp2定位改变可能是鼠肝缺血再灌注损伤后高胆红素血症发生的重要机制.
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葡萄糖和胰岛素调节三明治肝细胞中胆酸相关转运体表达及功能
目的:测定葡萄糖、胰岛素等糖尿病血糖中的异常因素对体外培养肝细胞中胆汁酸相关转运体表达及功能的影响.方法:分离并用三明治法培养大鼠原代肝细胞,用不同浓度葡萄糖或胰岛素培养72 h,使用胆盐类似物Cholyl-lysyl-fluorescein(CLF)进行摄取转运体钠/胆汁酸共转运体(Na+/bile acid cotransporter,ntcp)及外排转运体胆盐外排泵(Bile salt export pump,bsep)转运体功能学实验,并用荧光定量PCR法测定胆汁酸相关转运体ntcp、bsep及调节胆汁酸代谢转运的核受体(Farnesoid X receptor,fxr)的mRNA表达变化.结果:高浓度的葡萄糖和胰岛素均使CLF的胆泡排泄减少.高糖和高胰岛素均能够降低ntcp的表达)3～4倍),增加bsep的表达(约2倍),高糖能够降低fxr的水平(约0.5倍),高胰岛素增加fxr的水平(约1.5倍).结论:葡萄糖和胰岛素水平异常均会对胆汁酸相关转运体表达和功能造成影响;三明治原代肝细胞可用于胆酸和药物肝胆分布研究.
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胎盘胆汁酸转运体及核受体与妊娠期肝内胆汁酸淤积症
妊娠期肝内胆汁酸淤积症(ICP)可由多种因素引起,如雌激素过高、遗传、免疫、环境等因素,但终结果均是胆汁酸在胎儿体循环增加了,而造成这一结果的原因可能是胎儿自身产生的胆汁酸不能有效通过胎盘转运体转运至母体代谢,也有可能是母体过多的胆汁酸经胎盘胆汁酸转运体转运至胎儿体循环,对胎儿造成不利影响.不管是哪种方式,胎盘胆汁酸转运体及其调控因子核受体在其中均起着关键作用.本文就胎盘胆汁酸转运体及其相关核受体与妊娠期肝内胆汁酸淤积的关系作一综述.
关键词： 胆汁酸转运体 核受体 妊娠期肝内胆汁淤积症
