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“肾主骨”机理研究——左归丸对Hepcidin、Fpn1及OPG/RANKL mRNA表达的影响
目的:从Hepcidin对其下游OPG/RANKL通路调节的角度,初步探讨左归丸对骨质疏松症的作用机理,并为进一步揭示“肾主骨”理论的科学内涵提供实验依据.方法:60只雌性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组12只,假手术组12只,造模组36只共3组,造模组大鼠实行双侧卵巢切除术以制作骨质疏松症模型.造模结束后再将造模组大鼠随机分为OVX组、E2组、左归丸组,每组各12只,开始给予相应药物.给药3个月后,检测大鼠胫骨骨量(TBV％)、骨吸收(TRS％)和骨形成(TFS％、OSW、MAR、mAR)情况;采用原位杂交法检测各组大鼠肝组织中Hepcidin mRNA及胫骨骨髓中Fpn1、OPG及RANKL mRNA的表达.结果:OVX组大鼠胫骨TBV％较假手术组显著降低,而TRS％、TFS％、OSW、MAR、mAR较假手术组均有显著增高;与OVX组比较,左归丸组的TBV％显著增高,而TRS％、TFS％、OSW、MAR、mAR水平明显低于OVX组.与假手术组比较,OVX组大鼠肝脏中Hepcidin的mRNA表达强度均明显降低,大鼠胫骨骨髓中Fpn1和RANKL mRNA表达强度则明显增强,OPG mRNA的表达强度明显降低.与OVX组比较,左归丸组的大鼠肝组织中Hepcidin mRNA表达强度明显增高,胫骨骨髓中OPG mRNA表达强度明显增高,Fpn1和RANKL mRNA表达强度则明显下调.结论:左归丸可通过提高Hepcidin水平,增加与受体Fpn1的结合,进而对下游OPG/RANKL信号通路起到一定的调节作用,使OPG表达上调而下调RANKL的表达,从而降低破骨细胞活性,减少骨量丢失,这是其能够治疗骨质疏松症的机理之一.
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不同浓度铁离子对成骨细胞铁离子通道蛋白的影响
目的 铁过载与骨代谢相关,在人成骨细胞(hFOB1.19)中,膜转铁蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体(TfR)和二价金属转运蛋白1(DMT1)是细胞内铁离子进入和排除的重要通道蛋白;本研究用不同浓度铁离子干预成骨细胞培养,观察成骨细胞铁离子通道蛋白基因表达变化和相互联系,了解铁过载对相关通道蛋白的影响意义.方法人成骨细胞在34℃下进行体外培养,以不同浓度枸橼酸铁铵FAC(50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L)干预成骨细胞培养,48小时后收集细胞,按不同干预组抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中TfR、DMT1、FPN1 mRNA的表达.结果①RT-PCR检测显示不同浓度FAC干预成骨细胞后,各组FPN1、TfR、DMT1 mRNA均有表达;②不同浓度组FPN1、TfR、DMT1 mRNA表达光密度比值不同,组间密度比值比较存在统计学意义(P<0.05);③培养环境铁离子浓度增高可以使得FPN1的mRNA表达上调,而TfR、DMT1的mRNA表达下调.结论 成骨细胞的铁通道蛋白受环境铁离子影响,在一定范围内随着细胞外铁离子浓度增加,细胞膜铁离子进入通道功能下调、排除通道功能上调,说明铁过载对成骨细胞内铁离子水平有明显影响.
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肠癌组织铁调素和膜转铁蛋白的表达及其与临床病理特征、贫血的关系
目的 探讨肠癌患者与铁代谢相关的铁调素、膜转铁蛋白(FPN)的表达特点及其与临床特征、贫血的相关性.方法 选取2009年1月至2014年1月在苏州大学附属太仓医院手术切除的62例肠癌患者的病理标本,另选择15例肠癌患者的癌旁正常肠粘膜组织作为对照组.应用SABC免疫组化方法检测62例肠癌患者癌组织中的铁调素及FPN的表达情况,并分析它们之间的相关性及其与临床病理特征、贫血的关系.结果 (1)铁调素在正常肠黏膜组织中阳性表达率为20.0％,肠癌组织中阳性表达率为66.1％,差异有统计学意义(P＜0.01);FPN在正常肠黏膜组织中阳性表达率为86.7％,肠癌组织中阳性表达率为64.5％,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)铁调素的表达与肿瘤T分期有关(P＜0.05),而与年龄、性别、淋巴结转移、远处转移均无关(P均＞0.05);FPN的表达与T分期及淋巴结转移有关(P ＜0.05,P＜0.01),而与年龄、性别、远处转移均无关(P均＞0.05).(3)贫血与铁调素及FPN的表达无相关性(r=0.08,-0.04;P均＞0.05);铁调素与FPN表达呈负相关(r=-0.39,P＜0.01).结论 肠癌组织中铁调素的表达与患者肿瘤分期有关,并与FPN表达呈负相关,FPN表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关.联合检测铁调素及FPN可作为反映肠道肿瘤生物学行为的客观指标.肠道肿瘤患者术前贫血与肿瘤组织中铁调素及FPN的表达无关.
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铁代谢在大鼠缺血再灌注急性肾损伤后的变化
目的:研究SD大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)后铁代谢的变化特点,探讨IRI后铁调素和铁代谢的变化及意义. 方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(n=6)和IRI模型组,模型组分别在IRI后1h、4h、8h、12h、16h、20h、24h 7个时间点(n=6/组),检测大鼠血生化及铁代谢指标,以及肝组织铁调素mRNA和肾组织膜转铁蛋白1 (FPN1) mRNA和蛋白的表达水平. 结果:与对照组相比,IRI组肾组织铁含量、血清铁、铁蛋白在再灌注早期升高(P＜0.05),并随再灌注时间的延长逐渐下降.IRI组肝组织铁调素mRNA表达水平在再灌注早期明显升高,再灌注4h达峰值后开始下降,而血清铁调素于再灌注8h后升高,并于再灌注16h达峰值后开始下降,两者在再灌注24h后仍高于对照组(P＜0.05).IRI组肾组织FPN1 mRNA和FPN1蛋白的表达水平随再灌注时间的延长逐渐下降,两者表达水平明显低于对照组(P＜0.05). 结论:大鼠肾脏IRI过程中伴有铁代谢的紊乱,铁调素和肾脏FPN1可能参与了IRI过程中铁稳态的调控.
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铁调素和膜转铁蛋白在胃癌中表达及其临床意义
目的 研究铁调素和膜转铁蛋白(FPN)在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化染色法检测62例胃癌组织和15例癌旁正常胃黏膜组织中铁调素和FPN的蛋白表达,分析其与临床病理特征的关系.结果 与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中铁调素阳性表达率增加(56.5％ vs.20.0％)(P＜0.05),而FPN阳性表达率减少(54.8％ vs.80.0％) (P＜0.05).铁调素和FPN表达均与TNM分期有关(P＜0.05),而与年龄、性别、淋巴结转移、远处转移及贫血无关(P＞0.05).铁调素与FPN表达呈负相关(r=-0.27,P＜0.05).结论 胃癌组织高表达铁调素、低表达FPN,联合检测铁调素和FPN可以作为反映胃癌生物学行为的客观指标.
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癌性贫血患者 Hep、EPO、HJV、FPN 和 TFR2的表达特点及其意义
目的：研究癌性贫血患者中铁调素（Hepcidin）、促红细胞生成素（EPO）、铁调素调节蛋白（HJV）、膜转铁蛋白（FPN）和转铁蛋白受体2（TFR2）的表达特点及其意义。方法应用双抗夹心生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验（ABC-ELISA）检测51例癌性贫血患者和51例癌无贫血患者的血清 Hep、EPO、HJV、FPN、TFR2及铁蛋白，并分析它们之间的相互关系。结果（1）贫血组 Hepcidin、TFR2、EPO 均高于无贫血组（均 P ＜0．05），而贫血组的 HJV 及 FPN 明显低于无贫血组（均 P ＜0．05）。（2）贫血组铁蛋白与 Hepcidin 及 TFR2呈负相关（r＝-0．38及-0．22，均 P ＜0．05）。EPO、Hepcidin 及 TFR2与血红蛋白呈负相关（r ＝-0．328、-0．211及-0．295，均 P ＜0．05）。结论癌性贫血的发生是一个复杂的过程，在此过程中 EPO 的水平升高但相对不足，TFR2、HJV、Hepci-din、FPN 的表达异常导致的铁失利用是其中的关键因素。
