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沙苑子总黄酮对高脂大鼠的降甘油三酯作用及对肝脏DGAT2与ATGL的影响
目的:探讨沙苑子总黄酮对实验性高脂血症大鼠血脂及肝脏甘油三酯的影响及作用机制.方法:采用SD大鼠喂养高脂饲料的方法建立高脂血症大鼠模型.大鼠分为空白组、模型组、阳性药非诺贝特组、沙苑子总黄酮高、中、低剂量组,空白组和模型组给予0.9％氯化钠溶液,其余各组分别给予非诺贝特(100mg/kg)、沙苑子总黄酮(136、68、34mg/kg),连续灌胃4周.结果:沙苑子总黄酮高、中剂量可以显著降低血清甘油三酯水平(TG)、胆固醇水平(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDH-C)水平(P＜0.05);沙苑子总黄酮各剂量组均可显著降低肝脏TG、TC含量(P＜0.05).沙苑子总黄酮各剂量组均可下调肝脏DGAT2表达(P＜0.05),而对大鼠肝脏ATGL表达没有显著影响.结论:沙苑子总黄酮可以调节高脂血症大鼠血清及肝脏脂质水平,沙苑子可通过下调肝脏DGAT2的表达而减少肝脏TG的合成,从而达到降低TG的作用.
关键词： 沙苑子总黄酮 高脂血症 甘油三酯 甘油二酯酰基转移酶2 甘油三酯脂肪酶 -
沙苑子总黄酮对肾阳虚高脂血症模型大鼠ERα介导的调脂作用机制研究
绝经期妇女随着卵巢功能衰退,体内雌激素水平下降明显,出现脂代谢紊乱.现代临床上多采用雌激素替代疗法,长期使用该疗法,易出现多种严重并发症,中医常采用温补肾阳,化浊降脂的治法.课题组前期研究亦表明中药传统温阳药物沙苑子具有良好的调节血脂的作用,而肝脏是体内调节脂肪代谢主要的器官,在脂代谢紊乱中发挥重要作用.故该实验以观察沙苑子总黄酮(TFS)对肾阳虚高脂血症模型大鼠肝脂以及对肝脏雌激素受体的影响为切入点,探讨沙苑子调脂作用的物质基础及机制,阐明中药调脂的优势和特色.该实验采用双侧卵巢切除术联合6周喂养高脂饲料制备肾阳虚高脂血症大鼠模型,假手术组和模型组灌胃浓度0.9％生理盐水;雌激素组灌胃戊酸雌二醇(0.2 mg·kg-1);沙苑子低、中、高剂量组灌胃剂量分别为28.5,57,114 mg·kg-1(相当于正常成人沙苑子生药量的7.5,15,30 g),用药体积按每100 g体质量灌胃1 mL计算,持续给药8周后取材.检测肝脏TG,TC,LDL-C,HDL-C水平、肝脏质量、肝脏指数、子宫质量、子宫指数、血清雌激素水平、FSH水平以及肝脏病理切片、肝脏雌激素受体表达水平.与模型组相比,沙苑子总黄酮高剂量组大鼠肝脏TG,TC,LDL-C水平显著降低(P＜0.001,P＜0.05),肝脏HDL-C水平显著升高(P＜0.05).与模型组相比,雌激素组大鼠血清激素水平显著升高(P＜0.001),血清FSH水平显著降低(P＜0.001).与假手术组相比,PCR结果显示模型组大鼠ERα mRNA表达量显著减少(P＜0.01);与模型组相比,雌激素组大鼠ERα mRNA表达量显著增加(P＜0.001),沙苑子总黄酮中、高剂量组大鼠ERα mRNA表达量均增加(P ＜0.01,P＜0.001).该实验研究结果表明,沙苑子总黄酮是沙苑子发挥调脂作用的主要有效成分,其调脂作用机制可能是通过增强雌激素受体的敏感性或增加雌激素受体的数量,放大雌激素受体后传导的信号,产生调脂作用.
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沙苑子总黄酮对肾阳虚高脂血症模型大鼠血脂、甘油三酯合成途径的影响
目的 探讨沙苑子总黄酮(TFS)对肾阳虚高脂血症的治疗作用及其对肝脏甘油三酯(TG)合成途径的影响.方法 10周龄雌性SD大鼠,按体重随机区组法分为6组,即假手术组,模型组,雌激素组和TFS高、中、低剂量组,每组10只.双侧卵巢切除手术并连续给予6周高脂饲料复制肾阳虚高脂血症大鼠模型.假手术组和模型组灌胃生理盐水(10 mL/kg),雌激素组灌胃戊酸雌二醇(0.2 mg/kg),其余分别灌胃TFS 28.5、57、114 mg/kg,持续给药8周.检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),酶免法检测肝脏脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性和甘油三磷酸酰基转移酶(GPAT)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1α(CPT-1α)、乙酰辅酶A氧化酶(ACO)水平,免疫组化法检测肝脏固醇调控元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)蛋白表达.结果 与模型组相比, TFS高剂量组大鼠血清TG、TC、LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C水平显著升高(P<0.05);肝脏ACC活性和GPAT水平显著降低(P<0.01,P<0.01),ACO、CPT-1α水平显著升高(P<0.01,P<0.05);肝细胞膜SREBP-1c蛋白表达量显著降低,肝细胞核PPARα蛋白表达量显著增加.结论 实验结果表明TFS具有良好的调节血脂代谢的作用,其作用机制可能是通过抑制肝脏SREBP-1c表达,降低TG合成途径中限速酶FAS、ACC、GPAT的活性及水平;上调PPARα蛋白表达,提高脂肪酸β氧化途径中ACO、CPT-1α的表达水平,两者共同发挥作用抑制肝脏中TG的合成,达到调脂作用.
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沙苑子总黄酮对百草枯致大鼠肺纤维化的干预及机制
目的 观察沙苑子总黄酮(total flavonoids from astragalus complanatus,FAC)对百草枯(paraquat,PQ)所致大鼠肺纤维化的干预作用并探讨其机制.方法 SD大鼠随机分为正常对照组、PQ染毒组、阳性对照泼尼松组和FAC 40、80、160 mg/kg剂量组.大鼠胃注PQ制备肺纤维化模型后,第2天给予相应药物,每天1次.连续给药28 d后称大鼠体重,处死大鼠检测血清中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、血清总抗氧化能力(total antioxidative capacity,T-AOC);取固定部位肺组织切片行HE染色进行病理学观察;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中仅-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2蛋白的表达.结果 沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织Smad2蛋白表达分别为0.31±0.11,0.45±0.12,0.30±0.05,均低于PQ染毒组(0.85±0.34),差异有统计学意义(P＜0.05);沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织α-SMA蛋白表达分别为0.31±0.11、0.35±0.07、0.32±0.10,均低于PQ染毒组(0.45±0.08),差异有统计学意义(P＜0.05);沙苑子总黄酮组低、中、高剂量组肺组织TGF-β蛋白表达分别为0.35±0.04、0.27±0.05、0.18±0.04,均低于PQ染毒组(0.63±0.11),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FAC可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路来减轻百草枯致大鼠肺纤维化.
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沙苑子总黄酮通过抑制内质网应激和JNK通路过度活化减轻百草枯中毒大鼠肺损伤
目的 探讨沙苑子总黄酮(FAC)是否可通过抑制内质网应激和c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路过度活化来减轻大鼠百草枯诱导的肺损伤.方法 48只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、二甲基亚砜(DMSO)对照组和FAC低、中、高剂量组6组,每组8只.模型组采用PQ 80 mg/kg灌胃诱导肺损伤;对照组则给予等量生理盐水灌胃;DMSO组于PQ灌胃前2h腹腔注射10％ DMSO 20 mL/kg;FAC低、中、高剂量组于PQ灌胃后腹腔注射40、80、160 mg· kg-1· d-1的FAC溶液.制模后72 h处死大鼠取肺,检测肺湿/干质量(W/D)比值、总肺水含量(TLW);光镜下观察肺组织病理学改变,并进行肺组织损伤评估;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织JNK和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织JNK、磷酸化JNK(p-JNK)和GRP78的蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组和DMSO组肺W/D比值、TLW、肺泡损伤定量评估指数(IQA)均明显升高,JNK、GRP78的mRNA表达和JNK、p-JNK、GRP78的蛋白表达均明显升高.与模型组比较,FAC各剂量组肺W/D比值、TLW、IQA以及JNK mRNA表达和p-JNK蛋白表达均明显下降,其中以FAC高剂量组降低为显著[肺W/D比值:3.0±0.3比5.5±0.5,TLW:2.2±0.3比4.7±0.4,IQA:(15.4±3.0)％比(40.0±5.7)％,JNK mRNA:0.21 ±0.08比0.82±0.27,p-JNK蛋白:0.31±0.09比0.78±0.25,均P＜0.01];FAC低、中、高剂量组GRP78 mRNA和JNK、GRP78蛋白均为高表达,与模型组比较差异均无统计学意义(GRP78 mRNA:0.54±0.18比0.74±0.20,JNK蛋白:0.76±0.27比0.80±0.28,GRP78蛋白:0.51 ±0.18比0.69±0.21,均P＞0.05).结论 百草枯中毒后肺组织发生了过度的内质网应激损伤;FAC可能通过抑制内质网应激及JNK信号通路过度活化起到保护肺组织的作用.
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沙苑子黄酮对60Coγ射线损伤作用的影响
目的 研究沙苑子黄酮(FAC)对辐射小鼠的保护作用.方法 雌性昆明小鼠随机分为6组进行饲养,其中3个实验组分别给予不同浓度的FAC,阳性对照组给予升白药利血升,辐射对照组和正常对照组给予去离子水,共17 d.饲养第7天,除正常对照组外各组小鼠均接受6 Gy 60Coγ射线一次性全身照射,观察FAC对辐射损害的保护效应及对抗氧化及免疫功能的影响.结果 FAC可提高受照射小鼠21 d存活率,延长受辐射小鼠的存活时间;可升高受辐射小鼠外周血中的白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白数;可促进辐射小鼠胸腺细胞和脾脏细胞的增殖;可升高超氧化物歧化酶和降低丙二醛的含量.结论 FAC对辐射小鼠有保护作用,这与其提高抗氧化能力及增强免疫功能有关.
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沙苑子总黄酮对内质网应激诱导的细胞凋亡在百草枯致大鼠肺损伤中的保护作用
目的：肺组织是百草枯中毒后主要损伤的靶器官，但其具体机制目前尚未完全清楚。内质网应激（ endoplasmic reticulum stress， ERS）与中毒相关性疾病密切相关，但其与百草枯中毒后肺损伤的关系鲜见报道。文中探讨ERS诱导的细胞凋亡在大鼠百草枯中毒后急性肺损伤（acute lung injury， ALI）中的作用及观察中药沙苑子黄酮（total flavonoids from astragalus complanatus， FAC）对其影响。方法30只Spragne-Dawley（SD）大鼠按随机数字表法分为对照组、肺损伤模型组（ALI组）和沙苑子黄酮处理组（ ALI＋FAC组）。采用生物化学法检测肺组织超氧化物歧化酶（ SOD）、过氧化氢酶（ CAT）和丙二醛（ MDA）含量；采用原位末端标记（ TUNEL）法观察肺组织凋亡情况；采用Western blot 及RT-PCR检测ALI后CCAAT增强子结合蛋白（ C/EBP）同源蛋白（ C/EBP homologous protein ，CHOP）、活化的转录因子4（ activating transcription factor 4，ATF4）和X-盒结合蛋白-1（X-box binding protein 1， XBP1）基因表达的改变；HE染色观察肺组织病理变化。结果与对照组相比，ALI组的肺组织中MDA水平明显升高[（3．26±0．24） vs （5．04±0．36），P＜0．01]，SOD和CAT活性明显降低，分别为[（300．26±35．69） vs （187．21±25．66）]、[（5．78±1．28） vs （2．15±1．12），P＜0．01]，细胞凋亡数增多，CHOP蛋白表达上调[（0．74±0．20） vs （0．23±0．07），P＜0．01]，XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达水平明显上调。而沙苑子黄酮作用后，肺组织MDA含量减少[（5．04±0．36） vs （3．99±0．27），P＜0．01]，SOD和CAT活性增加，细胞凋亡明显减少，CHOP蛋白表达下调[（0．74±0．20） vs （0．42±0．11），P＜0．01]，ATF4、XBP1和CHOP基因表达下调。结论内质网应激诱导的细胞凋亡参与百草枯中毒后肺损伤过程，沙苑子黄酮对百草枯中毒后肺组织保护作用与其减轻ERS诱导的细胞凋亡有关。
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沙苑子总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究
目的 探讨沙苑子总黄酮(FAC)对博莱霉素(BLM)所致实验性大鼠肺纤维化的干预作用,并探讨其作用机制.方法 采用气管内滴注博莱霉素法制作大鼠肺纤维化模型,并随机分为6组.给予沙苑子总黄酮灌胃(ig)治疗28 d后,腹主动脉放血法处死动物,测定血清和总抗氧化能力(T-AOC)及肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;ELISA的方法检测实验大鼠肺泡灌洗液中IL-1β和IL-6的含量;取固定部位肺组织作HE及Masson染色,进行病理组织学观察;电镜观察大鼠肺组织的超微结构变化;Westen blot法检测沙苑子总黄酮TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达.结果 与模型组相比,沙苑子总黄酮各组大鼠肺组织中HYP含量明显降低(P＜0.01或P＜0.05),且有剂量依赖趋势;大鼠血清及肺组织中T-AOC增强(P＜0.01或P＜0.05);肺泡灌洗液中细胞因子IL-1β及IL-6的含量明显降低(P＜0.01或P＜0.05);组织病理学观察肺泡炎症(P＜0.01或P＜0.05)及肺组织纤维化(P＜0.01或P＜0.05)的程度明显减轻;Western blot检测结果显示TGF-β/Smad信号通路相关蛋白TGF-β、Smad2、α-SMA含量均明显降低.结论 沙苑子总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化病变有一定的治疗作用,其作用机制可能与其抑制炎症细胞因子的活化、抗氧化作用、抑制胶原的形成以及调控TGF-β/Smad信号通路有关.
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沙苑子黄酮对MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及其对NF-кB表达的影响
目的 研究沙苑子总黄酮(FAC)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用、诱导凋亡作用以及其对NF-кB表达作用影响.方法 以不同浓度(0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ ml) 处理MCF-7细胞6,12,24,48,72 h后,SRB法测定细胞增殖抑制;FITC-AnnexinⅤ/PI 双染法检测凋亡率变化;用Western blot法检测NF-кB蛋白表达.结果 SRB法显示, 0.5,0.25 mg/ml浓度沙苑子黄酮作用24,48 72 h以及0.125 mg/ml作用48,72 h后MCF-7细胞增殖抑制作用与对照组相比差异具有显著性(P<0.01);0.062 5 mg/ml作用48,72 h后以及0.125 mg/ml作用24 h后对MCF-7的增殖抑制作用与对照组相比也有差异性(P<0.05).FITC-AnnexinⅤ/PI 双染法FCM(flow cytometry)检测显示,不同浓度沙苑子黄酮(0.5,0.25,0.125,0.062 5 mg/ ml)作用72 h后,MCF-7细胞早期凋亡率分别为71.46%,60.34%,51.27%,46.83%, 晚期凋亡率分别为4.12%,3.27%,2.59%,1.26%.与对照组比较0.5,0.25,0.125 mg/ml组早、晚期凋亡率差异具有显著性(P﹤0.01),0.062 5 mg/ml组的早、晚期凋亡率也有差异性(P﹤0.05),0.5 mg/ml剂量组的早、晚期凋亡率与5-Fu组比较差异无显著性(P﹥0.05).Western blot 检测NF-κB表达,再用 Band Leader软件分析.结果 0.125,0.25,0.5mg/ml浓度组与对照组相比NF-кB表达减少差异具有显著性(P<0.01);0.062 5 mg/ml组与对照组相比NF-кB表达也有差异性(P<0.05).结论 沙苑子黄酮对MCF-7具有增殖抑制和诱导凋亡作用;其作用可能与其下调NF-кB表达有关.
