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补肾增效液对辐射损伤小鼠脾组织p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响
目的:研究以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤小鼠p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响.方法:设正常对照组、模型组、中药高、中、低剂量组和阳性药组,共灌胃8天.灌胃7天后,除正常对照组外,其余各组以60Coγ射线照射小鼠造成辐射损伤.造模1天后取脾检测.p53 mRNA表达的检测采用原位杂交法;Caspase-3蛋白表达检测采用免疫组化法.结果:运用病理图像分析系统分析,各用药组均能上调辐射后小鼠脾组织p53 mRNA的表达,且与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P＜0.01);各用药组能下调Caspase-3蛋白表达,其中,阳性药组、高剂量组和中剂量组与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P＜0.01).结论:补肾增效液通过调控与DNA损伤密切相关的p53基因及相关Caspase-3蛋白的表达而促进辐射损伤的修复.
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mRNA氧化损伤检测方法的优化及p53 mRNA氧化损伤分析
目的 建立并优化检测真核细胞mRNA氧化损伤的方法——反转录阻断-双引物扩增法,检测p53 mRNA氧化损伤.方法 建立非细胞体系和细胞体系mRNA氧化损伤模型,提取RNA并反转录成cDNA,根据所检测mRNA的5’端和3’端各设计一对引物,以cDNA为模板进行实时定量PCR.结果 非细胞体系和细胞体系氧化处理组GAPDH和p53 mRNA的氧化损伤程度均明显高于对照组,且随着过氧化氢浓度增加RNA氧化损伤增强；同时一定限度内降低反转录酶用量能提高检测灵敏度.结论 本研究建立并优化的RNA氧化损伤检测方法能检测特定mRNA对氧化的敏感性及损伤程度,为分析相关疾病造成的RNA氧化损伤以及探索其发病机制和治疗方法提供了技术支持.
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诊断超声照射后人早孕绒毛细胞p53 mRNA bcl-2 mRNA表达改变
目的探讨诊断超声与人早孕绒毛p53 mRNA和bcl-2 mRNA表达的关系.方法对拟进行人工流产的24例早孕(45～60 d)妇女随机分为4组:对照组、10 min组、20 min组和30 min组.应用HP-8500彩色多普勒超声诊断仪,对孕囊进行不同时间的持续照射,照射后24 h取材.用原位杂交技术检测上述各组绒毛滋养层细胞p53mRNA和bcl-2mRNA表达情况.结果超声照射后10 min组绒毛滋养层细胞p53 mRNA和bcl-2 mRNA表达率与对照组差异无显著性(P＞0.05),20 min组和30 min组滋养层细胞p53 mRNA表达率明显增加,显著大于对照组和10 min组(P＜0.01);而bcl-2 mRNA表达率却明显下降,显著低于对照组和10 min组(P＜0.01).结论诊断超声持续照射早孕孕囊组织＞10 min可引起绒毛滋养层细胞p53 mRNA表达率增加和bcl-2 mRNA表达率下降,从而诱导滋养层细胞凋亡增加.
关键词： 超声检查 滋养层 p53 mRNA Bcl-2 mRNA -
清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡相关基因p53和bcl-2表达的影响
目的:观察清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜凋亡相关基因的影响.方法:采用牛Ⅱ型胶原制备大鼠胶原性关节炎模型,提取滑膜细胞总RNA,采用RT-PCR技术,检测药物对滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA的影响.结果:胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA表达较正常组明显升高(P＜0.01),清络通痹颗粒7.2g/kg可明显下调胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA的水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:清络通痹颗粒可能通过下调滑膜细胞凋亡相关基因p53 mRNA、bcl-2 mRNA表达,促进滑膜细胞的凋亡而发挥治疗作用.
关键词： 清络通痹颗粒 胶原性关节炎 p53 mRNA Bcl-2 mRNA -
甘氨脱氧胆酸诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响
目的 探讨甘氨脱氧胆酸(GDCA)在诱导SMMC-7721细胞凋亡中对P53表达的影响.方法 用膜联蛋白V(annexinV)检测细胞凋亡,RT-PCR分析p53 Mrna变化,免疫组化技术分析P53蛋白表达.结果 GDCA可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,具有明显的时间和剂量依赖.200 μmol/L GDCA处理组在48 h和72 h的细胞凋亡率分别为(7.67±2.35)%、(12.93±1.48)%;400 μmol/L GDCA处理组则分别为(13.14±2.56)%、(14.22±2.11)%.GDCA可明显提高p53 Mrna水平,且较强地抑制突变的P53蛋白的表达.结论 GDCA具有诱导SMMC-7721细胞凋亡作用.
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p53 mRNA、MDM2蛋白在肺癌组织中的表达
目的探讨原发性肺癌组织中MDM2、p53 mRNA表达水平及其与临床预后的关系.方法采用免疫组织化学Dako EnvisionTM二步法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别检测52例肺癌组织中MDM2、p53 mRNA的表达情况.结果在52例肺癌组织中有23例(44.2%)MDM2蛋白表达阳性,其中3例小细胞肺癌全部阳性,在非小细胞肺癌中MDM2蛋白呈过表达,低分化癌明显高于高、中分化肺癌(P＜0.01).有27例(51.9%)肺癌组织p53 mRNA表达阳性,其中Ⅰ期肺癌占82.3%(14例),Ⅱ期肺癌占71.4%(10例),明显高于Ⅲ期肺癌的14.3%(3例).高中分化肺癌的p53 mRNA表达显著高于低分化肺癌(P＜0.05).结论MDM2蛋白在低分化肺癌中呈过表达,p53 mRNA在早期和高中分化肺癌中呈高表达,它们分别是肺癌发生发展过程中不同的2个基因事件.
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缺血再灌注诱导交界区心肌细胞凋亡与Caspase-3的活化及p53、bcl-2基因表达的关系
目的探讨缺血再灌注(IR)损伤诱导交界区心肌细胞凋亡与Caspase-3的活化及p53、bcl-2基因动态表达的关系.方法建立家兔心肌IR模型,采用半定量RT-PCR技术,原位杂交技术,免疫组化技术等,观察缺血交界区Caspase-3mRNA变化规律,及p53、bcl-2、mRNA动态表达与细胞凋亡的关系.结果(1)IR损伤激发了Caspase-3的活化,交界区Caspase-3mRNA与心肌细胞凋亡在IR损伤8 h后开始升高,12 h达高峰,二者之间存在着明显的正相关性(r=0.9286,P＜0.001).(2)p53mRNA于IR 8 h开始升高.bcl-2mRNA在IR 8 h时开始激活,并持续维持低水平状态.p53mRNA和bcl-2mRNA二者的表达之间存在着明显的负相关性(r=-0.9648,P＜0.001).结论Caspase-3、bcl-2、p53三者之间形成一种网络调控构象,负责凋亡的促进和凋亡的抑制,共同调控着心肌细胞凋亡的发生发展.
