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健脾软肝方对四氯化碳致肝纤维化大鼠α-SMA 及其mRNA表达的影响
目的:明确健脾软肝方对肝纤维化大鼠α-SMA及其mRNA表达的影响,初步探讨健脾软肝方防治肝纤维化的作用机制,为肝纤维化的中医临床治疗提供实验依据.方法:选取Wistar雄性大鼠72只,随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高、中、低剂量组.模型组利用CCl4对大鼠进行腹腔注射,按0.2 mL/100 g腹腔注射30％CCl4与70％橄榄油混合溶液,正常组注射等量生理盐水,2次/周,4周后复制大鼠肝纤维化动物模型,该实验采用免疫组化ABC法检测肝纤维化大鼠α-SMA蛋白的表达水平,采用Real-time PCR法检测肝纤维化大鼠α-SMA mRNA的表达水平,采用H-E染色和Mallory染色观察大鼠肝纤维化的病变程度.结果:模型组α-SMA蛋白表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中高、中、低剂量组之间α-SMA蛋白阳性表达逐渐升高,可以呈一定的药物依赖关系.模型组α-SMA mRNA表达显著上升(P<0.05);健脾软肝方高、中、低剂量组组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且高、中、低剂量组之间α-SMA mRNA表达水平逐渐升高,呈一定的药物依赖关系.结论:健脾软肝方抗肝纤维化的作用机制可能与抑制大鼠肝脏内α-SMA及其mRNA的表达有关.
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健脾软肝方预防给药降低TGF-β1表达延缓肝纤维化进程研究
目的:研究自拟健脾软肝方预防给药对CCl4肝纤维化大鼠的作用,着重分析其对转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)的影响.方法:60只清洁级雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常组,CCl4模型组,健脾软肝方低、中、高剂量组以及阳性药物扶正化瘀胶囊组,n=10.适应性喂养1周后给予CCl4腹腔注射复制肝纤维化大鼠模型,期间所有大鼠均接受预防给药,其中正常组和CCl4模型组给予生理盐水灌胃(1 mL·kg-1·d-1),阳性药物组给予扶正化瘀胶囊(0.405 g·kg-1·d-1)灌胃,健脾软肝方3个剂量组给予健脾软肝冲剂(2.7 g· kg-1·d-1)、(5.4 g·kg-1·d-1)和(10.8 g·kg-1·d-1)灌胃[1次/(kg·d)],全程密切监测大鼠一般情况,4周后处死大鼠检测肝功能、肝纤维化指标、肝脏病理学,同时Western blot检测TGF-β1的表达特点.结果:与正常组相比,CCl4模型组毛色变暗,食欲减退,3个预防给药组和扶正化瘀胶囊组上述症状明显好转,同时健脾软肝方高剂量组明显好于扶正化瘀胶囊组;与正常组相比,模型组ALT和AST以及肝纤维化指标HA、PCⅢ、Ⅳ-C和LN明显增加(P＜0.05),3个预防给药组和扶正化瘀胶囊组则可以明显降低其含量(P＜0.05);HE及Masson染色可见,与正常组相比,CCl4模型组肝组织切片肝细胞肿胀明显,肝窦以及门静脉周围结缔组织明显增生,有假小叶形成,3个预防给药组和扶正化瘀胶囊组上述症状明显好转;与正常组相比,模型组TGF-β1表达明显升高(P＜0.05),健脾软肝方3个预防给药组则可以明显降低其表达(P＜0.05).结论:健脾软肝方预防给药可以明显延缓CCl4肝纤维化大鼠进展,其作用机制可能是通过降低TGF-β1表达而实现.
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健脾软肝方治疗脾虚瘀结型失代偿期乙型肝炎肝硬化临床观察
目的 观察健脾软肝方治疗脾虚瘀结型失代偿期乙型肝炎肝硬化的临床疗效.方法 将85例脾虚瘀结型失代偿期乙型肝炎肝硬化患者随机分为治疗组(43例)与对照组(42例).两组均予西药常规治疗,对照组加服扶正化瘀胶囊,治疗组加服健脾软肝方.两组疗程均为1年,观察临床疗效,比较慢性肝病量表(CLDQ、CTP)评分、肝功能、乙肝病毒载量(HBV-DNA)、肝纤维化指标、肝脏B超及硬度值的变化情况.结果 ①治疗组、对照组临床总有效率分别为93.02％和75.61％;组间临床疗效比较,差异有统计学意义(P＜0.05).②组间治疗后比较,CLDQ与CPT评分差异有统计学意义(P＜0.05).③组间治疗后比较,治疗组ALT、AST、TBIL、HBV-DNA降低与ALB、CHE升高更显著,差异有统计学意义(P＜0.05).④组间治疗后比较,HA和Ⅳ-C水平差异有统计学意义(P＜0.05).⑤组间治疗后比较,MPV、SV、脾长、脾厚、硬度值差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 健脾软肝方治疗脾虚瘀结型乙型肝炎肝硬化代偿期患者,疗效满意,可有效改善肝功能与肝硬化程度,提高生活质量.
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健脾软肝方对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝窦基底膜形成的影响
目的 探讨健脾软肝方对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝窦基底膜形成的影响.方法 选择雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、模型组、扶正化瘀胶囊组及健脾软肝方高、中、低剂量组,每组10只.除正常对照组外,其余各组腹腔注射30％CCl4橄榄油溶液2 mL/kg,每周2次,连续注射4周;造模同时,健脾软肝方高、中、低剂量组分别给予健脾软肝方10.8、5.4、2.7 g/(kg·d)灌胃,扶正化瘀胶囊组给予扶正化瘀胶囊0.4 g/(kg·d)灌胃,正常对照组和模型组给予生理盐水15 mL/(kg·d)灌胃,连续灌胃4周.末次灌胃结束,取肝组织,采用Mallory染色法观察各组肝纤维化程度,透射电镜下观察各组肝窦基底膜超微结构;采用Real-time PCR法检测肝组织Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、层黏连蛋白(LN) mRNA表达,采用免疫组化ABC法检测肝组织LN蛋白表达.结果 与模型组相比,扶正化瘀胶囊组及健脾软肝方高、中、低剂量组肝组织中胶原纤维沉积减少,面积相对减小,分割包绕程度减轻;扶正化瘀胶囊组及健脾软肝方高、中、低剂量组肝窦内皮下基底膜不完整,Disse间隙内胶原纤维较少,均较模型组有所改善.与模型组比较,健脾软肝方中剂量组和扶正化瘀胶囊组ColⅣ mRNA相对表达量明显降低(P<0.05),而健脾软肝方高、低剂量组虽然ColⅣ mRNA相对表达量降低,但差异无统计学意义(P均>0.05).健脾软肝方高、中、低剂量组ColⅣ mRNA相对表达量两两比较P均>0.05.扶正化瘀胶囊组及健脾软肝方高、中、低剂量组均可降低LN mRNA及蛋白表达(P均<0.05),但扶正化瘀胶囊组、健脾软肝方高剂量组比健脾软肝方低剂量组降低更明显(P均<0.05),其他组间两两比较P均>0.05.结论 健脾软肝方能通过延缓肝纤维化大鼠肝组织基底膜形成,发挥抗肝纤维化作用;其作用机制可能与降低肝组织ColⅣ、LN表达有关.
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健脾软肝方对CCL4诱导的肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞失窗孔的影响
目的:探讨健脾软肝方对CCL4诱导的肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞失窗孔的影响.方法:60只雄性Wistar大鼠随机分为6组,采用2mL/kg的30％CCL4与70％橄榄油混合液腹腔注射,2次/周,复制肝纤维化模型.造模同时给予药物干预,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,阳性对照组用扶正化瘀方灌胃,健脾软肝方高、中、低剂量组分别给予不同剂量的健脾软肝方灌胃.4周后,采用HE染色和Mallory染色观察肝组织纤维化程度,透射电镜观察肝窦内皮细胞窗孔变化,ELISA法检测血清HA含量、Real-time PCR及免疫组化ABC法检测CD31、CD44mRNA及蛋白表达.结果:健脾软肝方干预后,光镜显示肝纤维化程度比模型组减轻;电镜显示大鼠肝窦内皮细胞窗孔直径变大、数目增多;HA含量降低(P＜0.01),且高、中、低剂量组血清HA的降低随剂量的升高而变化,表现为一定的剂量依赖关系;CD44阳性及mRNA表达增高(P＜0.05),CD31阳性及mRNA表达降低(P＜0.05),且表达量随剂量的升高而逐渐降低,呈一定的剂量依赖关系.结论:健脾软肝方可减轻肝纤维化大鼠LSEC失窗孔的作用.
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健脾软肝方对肝纤维化TGF-β/Smad细胞信号转导通路的影响
目的:观察健脾软肝方对四氯化碳大鼠肝纤维化模型中TGF-β/Smad信号转导通路的影响.方法:复制CC14大鼠肝纤维化模型,观察不同剂量健脾软肝对模型大鼠肝纤维化TGF-β/Smad通路各位点的影响.利用RT-PCR方法检测TGF-β1 mRNA的表达水平,免疫组化法检测TGF-β1受体的表达和Western Blot法检测大鼠肝组织中Smad3、Smad7蛋白的表达.结果:健脾软肝方可以下调TGF-β1 mRNA和TGF-β1受体的表达,调节Smad3/Smad7的比例.结论:健脾软肝方对TGF-β/Smad细胞信号转导途径中多个位点均有抑制作用.
关键词： 健脾软肝方 抗肝纤维化 TGF-β/Smad -
健脾软肝方抗肝纤维化的临床观察
[目的]观察健脾软肝方对肝纤维化血清标志物的影响.[方法]将慢性乙型肝炎肝纤维化血清标志物异常及肝功能异常的患者62例随机分为治疗组(32例)及对照组(30例),两组均采用西药护肝治疗,治疗组加用健脾软肝方治疗,疗程3个月.[结果]中药健脾软肝方在降低HA,LN,PC-Ⅲ等肝纤维化指标上明显优于对照组(P＜0.01),在改善肝功能方面明显优于对照组(P＜0.05～0.01).[结论]健脾软肝中药具有良好的抗肝纤维化及保护肝功能的作用.
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健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响
目的:观察福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠脂质过氧化的影响.方法:复制CCl4肝纤维化大鼠模型,以等效剂量健脾软肝方及拆方灌胃,并以鳖甲软肝片为对照,观察模型大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Hyp含量显著增加,SOD活性明显下降,MDA含量显著升高,表现为显著的脂质过氧化损伤和肝损伤.经药物治疗后,各药物组SOD活性(除理气活血软肝方组、活血软肝方组外)均有不同程度升高,以健脾软肝方组和健脾活血软肝方组在升高SOD活性方面优于其它治疗组;各药物组MDA含量(除活血软肝组外)均有不同程度降低,以健脾软肝方组MDA含量降低较为明显,显示良好的抗肝脂质过氧化作用.结论:福尔肝健脾软肝方及拆方具有良好的抗肝纤维化作用,尤以健脾软肝方全方组作用为好.抗脂质过氧化可能是健脾软肝方及拆方抗肝损伤和抗肝纤维化作用的重要靶点之一.
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健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠MMP-2、MMP-9活性及蛋白表达的影响
目的:观察福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠MMP-2、MMP-9活性及蛋白表达的影响.方法:SD大鼠随机分成正常组、健脾软肝方及拆方组;复制CCl4肝纤维化大鼠模型,同时予等效剂量健脾软肝方及拆方灌胃,并以鳖甲软肝片为对照,观察血清肝功能;检测肝组织羟脯氨酸(Hyp),明胶酶图法观察组织MMP-2、MMP-9活性表达.结果:与正常组大鼠比较,模型组血清ALT、AST,肝组织中的Hyp含量与基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性及其蛋白表达都有显著增加.各组经相应药物治疗后,肝组织Hyp含量均有不同程度改善或降低,其中健脾软肝方全方组在降低ALT活性,肝组织Hyp含量较其他用药组为好,健脾软肝方全方组及部分拆方均能显著降低MMP-2、MMP-9酶活性;健脾软肝全方作用为显著.结论:福尔肝健脾软肝全方及拆方有明显抑制基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性及降低其蛋白表达作用,尤以健脾软肝方全方组尤为显著.此可能是福尔肝健脾软肝方抗肝纤维化作用机制之一.
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福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠肝功能的影响
目的:观察福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠肝功能的影响.方法:复制CCl4肝纤维化大鼠模型,观察等效剂量健脾软肝方及拆方灌胃,并以鳖甲软肝片为对照;观察血清肝功能ALT、AST、白蛋白、总蛋白;Jamall氏法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp).结果:与正常组大鼠比较,模型组血清ALT、AST明显升高,Alb、TP明显下降,肝组织Hyp含量显著增加,各组动物治疗后,肝功能、肝组织Hyp含量均有不同程度改善或降低,其中健脾软肝方全方组在降低ALT活性、肝组织Hyp含量较其他用药组为好,健脾理气类为主要治法的拆方组能提高白蛋白含量.结论:福尔肝肝健脾软肝方及拆方有良好的改善肝功能、抗肝纤维化作用,尤以健脾软肝方全方组作用为好.
