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ELISA方法检测MP-IgM与冷凝集试验对小儿肺炎支原体感染诊断价值的比较
目的 通过ELISA法与冷凝集试验两种方法检测小儿肺炎支原体肺炎(MPP)患者的血清,分析两种检验方法在小儿肺炎支原体感染的诊断的价值.方法 选择本院儿科收治确诊的157例肺炎支原体感染患儿,分别采用血清ELISA和冷凝集两种检测方法,分析探讨两组阳性率.结果 ELISA法检测MP-IgM阳性有142例,阳性检出率为90.4％;冷凝集试验方法检测阳性为126例,阳性检出率为80.3％,各年龄段阳性检出率差异具有统计学意义,两种检测方法学差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 ELISA法与冷凝集试验相比,敏感性更高,具有良好的实验室诊断价值.
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3764例呼吸道感染患者的肺炎支原体抗体检测结果分析
目的 探讨三河市肺炎支原体(MP)的病原学流行特点,为临床诊断MP感染提供病原学依据.方法 采用间接免疫荧光法检测3764例呼吸道感染患者血清中MP-IgM抗体,根据性别、年龄和季节的MP阳性率情况进行统计分析.结果 3764例患者MP-IgM抗体阳性率为15.8％,男性患者阳性率(15.1％)与女性患者阳性率(16.9％)比较差异无统计学意义(P＞0.05);各年龄组间MP-IgM抗体阳性率比较以学龄前及学龄期组的MP-IgM抗体阳性率(29.3％)为高,明显高于其他各年龄组(P＜0.01);以婴儿组的MP-IgM抗体阳性率(7.1％)为低,显著低于其余各组,结果比较有统计学意义(P＜0.01);不同季节患者MP-IgM抗体检测阳性率比较,秋季和春季的阳性率(23.4％和18.0％)明显高于夏季和冬季的阳性率(11.3％和10.2％),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 本地区MP感染有人群性和季节性流行特点,学龄期儿童和青少年为易感人群,秋季和春季为高发季节.
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北京地区儿童肺炎支原体感染的流行病学分析
目的 探讨北京地区儿童肺炎支原体(MP)的病原学流行特点,为临床诊断MP感染提供病原学依据.方法 采用间接免疫荧光法检测患儿血清中MP-IgM抗体,根据性别、年龄和季节的MP阳性率以及合并感染其他病原体的情况进行统计分析.结果 1985例患儿MP-IgM抗体阳性率为16.52％,男性患儿阳性率(15.55％)与女性患儿阳性率(18.13％)比较差异无统计学意义(P＞0.05);各年龄组间MP-IgM抗体阳性率有显著差异,婴儿组的MP-IgM抗体阳性率(7.09％)低,且随着年龄的增长阳性率逐渐上升,学龄期组(51.39％)明显高于其余各年龄组,差异比较有统计学意义(P＜0.01);不同季节患儿MP-IgM抗体检测阳性率有显著差异,秋季和春季的阳性率(27.92％和18.81％)明显高于夏季和冬季的阳性率(10.81％和7.87％),结果比较有统计学意义(P＜0.01);328例MP-IgM抗体阳性患儿中合并感染其他病原体的160例(48.78％),合并感染一种病原体的96例(29.27％),合并感染两种病原体的40例(12.20％),合并感染三种及三种以上病原体的24例(7.32％).结论 本地区儿童MP感染在年龄和季节上存在差异,在性别间无差异,与其他呼吸道病原体混合感染率高.
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肺炎衣原体及肺炎支原体临床血清学检测试剂的研发及应用
目的 通过实验获得工程重组肺炎支原体和肺炎衣原体的抗原,探讨其临床诊断价值;分析儿童肺炎支原体和肺炎衣原体的发病情况.方法 采集医院收治的社区获得性肺炎患儿的血标本进行肺炎支原体和肺炎衣原体检测,并通过PCR方法得到肺炎衣原体的特异性抗原Cpn-MOMP和Cpn-CPAF和肺炎支原体P1-C和P1-B基因片段,应用工程重组抗原进行肺炎衣原体抗原特异性及灵敏度检测和肺炎支原体的灵敏度实验.结果 肺炎支原体及肺炎衣原体感染的阳性率随着年龄的增长而增加,肺炎衣原体冬季发病率较高.PCR方法可以得到完整的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF基因片段,且Cpn-MOMP重组抗原产量高特异性较好.重组肺炎支原体P1-C和P1-B抗原产量较满意.结论 肺炎支原体及肺炎衣原体感染阳性率逐年升高,通过重组的Cpn-MOMP和Cpn-CPAF抗原可用于肺炎衣原体感染的血清学检测,具有临床应用前景.
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肺炎支原体感染患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义
探讨肺炎支原体(MP)感染患儿外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)频率变化及其意义.选取32例肺炎支原体感染患儿,其中肺炎支原体肺炎18例,肺炎支原体肺炎合并肺外症状14例；26名健康儿童,分离其外周血单个核细胞,以CD4、CD25单克隆抗体标记细胞后,用流式细胞仪(FACS)检测Treg细胞频率.FACS检测结果显示,MP肺炎组和MP肺炎合并肺外症状组患者的外周血CD4+ CD25+ Treg的频率均明显低于健康对照组(P＜0.01)；MP肺炎合并肺外症状组外周血CD4+ CD25+ Treg的频率明显低于MP肺炎组(P＜0.01).结论:儿童MP感染者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞频率降低,免疫抑制功能下降,导致MP感染后免疫反应增强,在多脏器功能损害中起重要作用.
关键词： 肺炎支原体 CD4+ CD25+调节性T细胞 -
九种呼吸道感染病原体的IgM抗体检测结果分析
目的 分析九种常见呼吸道病原体在我院的检测结果,了解其流行情况,指导临床用药.方法 使用九种呼吸道感染病原体[肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、嗜肺军团菌血清1型(LP1)、腺病毒(ADV)、Q热立克次体(COX)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A(INFA)、流感病毒B(INFB)和副流感病毒1、2、3(PIVs)] IgM检测试剂,检测2012年10月至2013年9月在我院门诊与住院患者血清中各种病原体的检出情况,以及各种病原体阳性率与性别、年龄及季节性的相关性.结果 共检测4205份血清,1055份阳性,总阳性率为25.09％;其中MP为阳性率高的病原体,阳性率达到了18.36％;各病原体在不同性别间的感染率差异无统计学意义;在不同年龄段方面,MP和PIVs在60～ 103岁年龄段的感染率明显低于其他人群(P＜0.05),INFB在儿童期0～ 14岁的感染率明显高于其他年龄段(P ＜0.01);LP1春季和冬季较其余两个季节高(P＜0.01);MP和ADV秋季感染率明显高于春季(P＜0.01);PIVs春季感染率明显低于其余三个季节(P＜0.01).结论 MP是引起我院呼吸道感染的重要的病原体;同时应针对不同人群不同季节病原体的流行情况,做好防范工作.
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儿童肺炎支原体感染检测MBL和CRP的意义
探讨肺炎支原体(MP)感染患儿血清甘露糖结合凝集素(MBL)和C-反应蛋白(CRP)水平变化的意义.用ELISA和速率散射比浊法分别检测患儿血清MBL和CRP水平.结果显示,57例MP感染患儿MBL水平(3.64±1.72mg/L)和CRP(21.44±15.02mg/L)比对照组(2.18±1.05mg/L和2.76±1.81mg/L)显著增高﹙P＜0.001﹚.年龄小于8岁患儿MBL水平低于年龄大于8岁患儿,其中8例反复呼吸道感染患儿MBL水平﹙2.02±1.21mg/L)显著低于其它患儿(3.95±1.63mg/L,P＜0.01﹚.患儿恢复期CRP水平明显降低.结果提示,血清MBL和CRP水平可作为监测MP感染患儿天然免疫功能的指标,动态检测有助于评价疗效.
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浓缩一步法新型肺炎支原体核酸检测试剂盒的临床应用初步评价
目的 通过对比实验,对新型肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)核酸检测试剂(采用浓缩一步法处理样本,以下简称“浓缩一步法”)的临床使用进行评价.方法 用浓缩一步法试剂与煮沸法试剂对临床收集的样本进行MP DNA检测并对比其结果,同时,将两种试剂的检测结果分别与金标准培养法检测结果进行对比.结果 新型肺炎支原体核酸检测试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比为98.36％,阴性一致性百分比为96.80％,总一致性百分比为97.68％;对5例不符样本进行测序复核,并对复核后的结果进行Kappa检验一致性分析,结果Kappa值=1.000,表明新型试剂的检测结果与煮沸法试剂及复核检测的结果具有很好的一致性.在与金标准培养法检测结果的对比中,两种试剂均表现出较好的准确性.结论 新型肺炎支原体核酸检测试剂与已上市的煮沸法试剂检测结果具有很好的一致性,操作简单快速,减少污染环节,并具有内标控制假阴性,结果准确,符合临床检测要求,具有较高的临床应用价值.
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肺炎支原体IgM在呼吸道感染中的检测与结果分析
肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)属原核生物,是介于病毒和细菌之间的一类在无生命培养基中生长繁殖的小微生物.通过飞沫以气溶胶微粒的形式经呼吸道传播.感染率占非细菌性肺炎的三分之一以上[1],约占各类肺炎的10%～20%[2].
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慢性喘息型支气管炎急性发作与肺炎支原体感染相关性观察
目前认为肺炎支原体(MP)感染是引起气道慢性炎症和气道反应性增高机制之一[1],可能参与支气管哮喘发病机制及病理过程.而慢性喘息型支气管炎的临床表现、发病机制与病理改变部分与支气管哮喘相同,MP感染与慢性喘息型支气管炎急性发作是否相关也值得探讨.本文用肺炎支原体抗体检测试剂盒,早期检测血清中支原体IgM抗体,并探讨其相关性.
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芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体的影响
目的 探讨芩百清肺浓缩丸对肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠NLRP3炎性体蛋白表达及IL-1β分泌的影响.方法 实验分为健康对照组、MP模型组、罗红霉素治疗组(50 mg/kg体重)及芩百清肺浓缩丸治疗组(3.3 g/kg体重),每组32只.滴鼻法建立MP感染模型,连续给予相应的药物14 d,健康对照组及模型组给予等容量蒸馏水.分别于给药后7、14、28 d,抽取肺泡灌洗液,ELISA检测IL-1β含量;留取肺组织,Western blot检测NLRP3炎性体相关蛋白表达.结果 MP模型组小鼠造模后7、14 d肺组织NLRP3、ASC、Caspase1蛋白相对表达量分别为0.93±0.07、0.72±0.02、0.65±0.03;0.41±0.04、0.47±0.02、0.43±0.02,与健康对照组0.30±0.02、0.29±0.02、0.31±0.03;0.27±0.03、0.23±0.02、0.34±0.02比较差异有统计学意义(P＜0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7d、14 d NL-RP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量分别为0.56土0.07、0.52±0.04、0.44±0.02;0.32±0.02、0.33±0.02、0.35±0.02,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).MP模型组小鼠给药后7、14 d肺泡灌洗液IL-1β分别为(69.98±8.97)pg/ml、(49.55土7.60)pg/ml,与健康对照组(37.39±4.28) pg/ml和(36.61±4.31)pg/ml比较,差异有统计学意义(P＜0.01);芩百清肺浓缩丸治疗组给药后7、14 d IL-1p分别为(59.70±8.16)pg/ml和(41.39±3.67)pg/ml与模型组比较差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 芩百清肺浓缩丸治疗可下调MP感染小鼠肺组织NLRP3炎性体蛋白的表达及IL-1β分泌.
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肺炎支原体OsmC蛋白的原核表达及活性分析
目的 表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)渗透压诱导蛋白C(OsmC)并测定其活性. 方法 在Mp中找出编码OsmC蛋白的基因,根据Mp OsmC基因序列设计特定引物,PCR扩增OsmC基因.利用EcoRI和XhoI对其进行双酶切,然后连接到表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a MpOsmC,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析对重组OsmC蛋白进行纯化,利用氧化铁二甲酚橙试剂(FOX)测定OsmC蛋白的活性. 结果 肺炎支原体Mpn625基因编码OsmC蛋白.PCR扩增OsmC基因片段大小为426 bp,连接到原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a MpOsmC.重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量单位为19.4 ku的重组Mp OsmC蛋白,与理论值相符.通过亲和层析,得到高纯度的目的蛋白.FOX试剂法测定Mp OsmC具有分解H2O2活性. 结论 重组Mp OsmC蛋白具有氧化酶活性,为探讨肺炎支原体的抗氧化机制提供了理论依据.
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肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及下游分子的表达
目的 观察肺炎支原体(Mycoplasma pneunoniae,Mp)感染RAW264.7细胞早期NLRP3炎性体及前炎性细胞因子的表达. 方法 将RAW264.7细胞随机分为5组,正常组用常规方法培养,不感染Mp;4个实验组RAW264.7细胞均用Mp感染4h,感染复数(细胞∶Mp)分别为1∶20、1∶40、1∶80、1∶100,采用FQ-PCR法检测细胞NL-RP3、ASC、caspase-1 mRNA表达和IL-1β、IL-18水平. 结果 Mp感染复数1∶20、1∶40、1∶80、1∶100组NL-RP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量分别为2.i0±0.62、2.14±0.66、2.66±0.69、3.29±0.64和3.91±0.83、4.21±0.95、4.25±0.86、4.30±0.99和1.65±0.48、1.65±0.36、1.94±0.51、2.00±0.57,与正常对照组0.98±0.08、1.00±0.08、0.99±0.09比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);感染复数1∶100组IL-1β为200.00士9.25 pg/ml,与对照组159.92±5.89 pg/ml比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 Mp感染可诱导RAW264.7细胞NLRP3炎性体活化.NLRP3炎性体可能参与了Mp的早期感染.
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不同浓度HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响
目的 观察在商品化肺炎支原体培养基中添加不同浓度的HEPES缓冲液对肺炎支原体培养效果的影响.方法 使用未添加及添加终浓度为10、20、30、40、50、60、80 mmol/L HEPES缓冲液的商品化培养基,分别接种相同菌量肺炎支原体标准株ATCC29342进行培养,每天采用微孔稀释法定时检测8种培养基中的活支原体数,同时测定8种培养基的pH值,连续检测13d,绘制8种培养基中肺炎支原体的生长曲线和培养基pH曲线.结果 肺炎支原体在液体培养基中的生长曲线平台期随HEPES浓度增加逐渐延长,且培养基pH下降速度及程度随HEPES浓度增加相应变慢、变缓.10 mmol/L的HEPES可提高肺炎支原体液体培养大菌量一个数量级,但pH缓冲能力有限,不能延长肺炎支原体生长曲线平台期;＞50 mmo/L的HEPES培养基缓冲能力强,可延长肺炎支原体培养平台期2d左右,但不能增加液体培养中肺炎支原体的大菌量.结论 10～80 mmol/L HEPES缓冲液均可影响肺炎支原体液体培养的生长曲线变化,较低浓度的HEPS可提高肺炎支原体液体培养的大菌量,较高浓度的HEPS可延长肺炎支原体培养平台期,因此可依据实验目的不同添加不同浓度HEPES缓冲液以获取实验结果优化.
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肺炎支原体重组蛋白抗原与膜蛋白抗原诊断试剂在临床应用中的比较
目的 以肺炎支原体(Mp)重组蛋白做包被抗原检测临床呼吸道感染患儿血清标本,验证重组蛋白抗原的诊断价值.方法利用Mp重组蛋白抗原包被酶标板,ELISA法检测临床疑似Mp感染患儿的血清标本,同时用Mp膜抗原被动凝集试验平行检测,并对比分析两种方法的检测结果.结果 重组蛋白抗原ELISA检测Mp抗体的阳性率为49.00%(98/200),膜抗原被动凝集试验Mp抗体的阳性率为63.50%(127/200).两种检测方法的总符合率为70.50%.阳性符合率为58.45%.结论 Mp重组蛋白抗原ELISA检测肺炎支原体感染有诊断价值,其特异性优于膜抗原被动凝集试验.
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肺炎支原体感染的中西医治疗进展
肺炎支原体(Mp)是常见的致病病原,不但能引起原发性非典型性肺炎,还可引起全身器官的病变.Mp感染被认为是免疫性疾病的一种,其治疗一直是各国学者致力研究的重点.本文对Mp感染大环内酯类等抗生素治疗、维生素A和糖皮质激素等免疫治疗、中药以及其他治疗方法、效果进行了综述.
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肺炎支原体感染认识新进展
肺炎支原体在各个年龄段都是明确的呼吸道致病菌,它通过极样黏附细胞器吸附在宿主细胞表面,产生过氧化物离子和可能的外毒素,甚至可能直接入侵宿主细胞导致潜伏感染.诱发的免疫反应性损伤也是肺炎支原体引起临床症状的主要因素之一.肺炎支原体诊断好结合PCR和血清学检测,而且鼻咽和口咽标本同时取材进行PCR检测,不同病程2次血清学检测能获得可靠的诊断依据,培养方法对于肺外支原体感染和体外药物敏感试验十分重要.
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肺炎支原体感染研究新进展
肺炎支原体作为呼吸道感染的重要病原,不但可引起原发性非典型性肺炎,而且可引起全身器官的病变.肺炎支原体是学龄儿童呼吸道感染重要病原体之一,亦是成年人呼吸道感染不可忽视的致病原.深入研究肺炎支原体感染对其机体免疫作用对于开发靶向治疗药物具有重要意义,而对其流行病学和发病症状的研究有助于临床的预防和诊断,对于不同个体采取不同药物治疗的个体化治疗亦有重要意义.本文针对近年来肺炎支原体研究现状,针对以上三点加以综述.
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肺炎支原体及流感病毒致患者呼吸道感染流行病学特征分析
目的 探讨肺炎支原体及流感病毒致呼吸道感染的流行病学特点,为疾病诊疗提供依据. 方法 医院就诊患者722例,收集血清,采用间接免疫荧光法检测呼吸道病原体. 结果 722例患者中呼吸道感染229例,感染率31.72％.肺炎支原体、流感病毒、肺炎支原体合并流感病毒感染149、58和22例,感染率分别为20.64％、8.03％和3.05％.＜16、16～、30～、＞50岁患者感染数分别为93、56、51和29例,感染率分别为40.26％、43.08％、30.91％和14.80％,其中肺炎支原体感染率分别为21.21％、29.23％、24.85％和10.71％,流感病毒感染率分别为14.29％、9.23％、5.45％和2.04％,肺炎支原体合并流感病毒感染率分别为4.76％、4.62％、0.61％和2.04％;男性患者感染101例,感染率为26.04％,其中肺炎支原体、流感病毒、合并感染的感染率分别为17.71％、7.03％和1.56％;女性患者感染128例,感染率为35.50％,感染率分别为23.96％、9.17％和4.73％.春季、夏季、秋季、冬季呼吸道感染患并分别为49、82、29和69例,感染率分别为33.33％、33.47％、23.77％和33.17％;肺炎支原体感染率分别为23.13％、18.37％、15.57％和24.52％,流感病毒感染率分别为8.84％、10.61％、5.74％和5.77％,合并感染率分别为1.36％、4.49％、2.46％和2.88％. 结论 16～30岁的女性患者病原体感染率较高,以肺炎支原体感染为主,冬季肺炎支原体的感染率较高.
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新疆呼吸道感染患儿肺炎支原体抗体检测分析
目的 探讨血清肺炎支原体(MP)抗体IgM在新疆地区呼吸道感染患儿的阳性检出率及其感染与民族和季节的关系. 方法 2010年1月～2011年12月采用被动凝集法对14岁以下呼吸道感染患儿血清中肺炎支原体抗体IgM进行检测. 结果 1 000例患儿MP IgM抗体阳性361例,阳性率为36.10％,在9种常见的患儿呼吸道感染性疾病中,支气管炎高,为54.00％,先天性心脏病合并肺炎低,为10.00％；各民族呼吸道感染患儿均检出MP阳性,以哈萨克族高,阳性率为42.11％,汉族其次,为38.95％,维吾尔族低,为20.69％；秋、冬季的MP抗体阳性率为40.00％,高于春、夏季(31.52％). 结论 新疆地区呼吸道感染患儿MP感染率较高,检测MP IgM有利于对呼吸道感染病原体做出诊断,为治疗提供依据.
