首页 > 文献资料
-
我国某地首株O139霍乱弧菌某些特征的研究
我国某地1996年6月从一名腹泻病人粪便中分离出首例O139霍乱弧菌,并将该菌与国内外菌株形态,生化和遗传学特性进行了比较研究,结果表明此菌株与国内外O139流行菌株具有相似的表型特性(Phenotype),形态,生化特性与O1群相似,但对弧菌抑制剂(O/129)不敏感,不被O1多价血清凝集;用已知的几种霍乱弧菌毒素基因探针与被测O139菌株DNA杂交,结果显示都具有ctx,zot,ace基因;PCR检测ctxA基因与O1群霍乱流行株具有相同的扩增产物;SDS-PAGE分析外膜蛋白所有O139菌株图谱相似;用16SrRNA基因探针与Bgl Ⅰ酶切的染色体DNA杂交,结果表明此菌株与中国及国外菌株分属于不同的核糖体基因型(Ribotype,RT),而且与当年的O1群流行菌株具有相似的RT型,推测该菌株可能是O1群的突变株,对新毒株O139的出现应引起我们高度重视.
-
棘阿米巴原虫对霍乱弧菌O139的生存影响研究
目的观察棘阿米巴原虫对霍乱弧菌O139的环境生存影响.方法采用共培养方法,通过染色和电镜超薄切片来观察霍乱弧菌O139在多噬棘阿米巴的滋养体和包囊内生存情况,经包囊传代及低温下生存耐受实验来观察阿米巴包囊能否提高霍乱弧菌O139的环境生存能力.结果与多噬棘阿米巴共培养8 h后,霍乱弧菌O139就能进入阿米巴滋养体内并在空泡内增殖.霍乱弧菌O139可生存于胞浆空泡内和(或)包囊内壁间,经包囊传代培养能再分离培养出此菌.在30℃时,在棘阿米巴环境下120 d仍能检测出霍乱弧菌O139,而在阿米巴生理盐水液中45 d后就检测不出霍乱弧菌O139.在4℃时,实验组和对照组培养液30 d后均未能培养出霍乱弧菌O139;而被感染包囊分别在30、45、60和75 d后复苏培养能再检测出霍乱弧菌O139;被感染包囊90 d后发育成滋养体能力下降,未能再培养出活的霍乱弧菌O139,在电镜下可见包囊被裂解死亡.结论霍乱弧菌O139能在棘阿米巴的滋养体内繁殖和包囊内生存;阿米巴包囊能够提高霍乱弧菌O139的低温下生存能力;棘阿米巴包囊可能成为霍乱弧菌O139越冬的环境宿主.
-
霍乱弧菌O139实时荧光PCR检测方法的建立及应用
目的:建立检测霍乱弧菌O139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌O139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段.方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测O139特异基因--编码糖基转移酶的基因.结果:本方法特异性好,检测非O139肠道菌均无响应;灵敏度高,可检测低至10 CFU的细菌;重复性较好,批间批内变异系数均小于3%.对采自浙江省O139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测,共有133份为阳性,而采用常规细菌培养法,仅检测出90份阳性.结论:本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段.
-
浙江霍乱弧菌O139耐药状况及毒力基因研究
目的了解浙江霍乱弧菌0139的耐药状况及毒力基因携带情况.方法采用WHO推荐的改良K-B法,进行了14种抗菌药物的耐药性测定;以多重PCR法对6种毒力相关基因(ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot)进行检测分析.结果霍乱弧菌O139主要对SD、AMP、SM、COS、CAR、FURX耐药,耐药率均在76.7%以上;对FPA、CF、CIPX、AKN、较为敏感,敏感率均在94.5%以上;而且不同年份菌株的耐药情况有所不同.所有菌株均携带3种以上毒力基因,其中93.2%携带ctxA基因,86.3%携带全部6种毒力基因.结论霍乱的治疗和预防中应首选CF、AKN、FPA、CIPX等敏感抗菌药物;霍乱弧菌O139的毒力基因携带率高,致病性和流行性均强,所以今后的霍乱防制中应加强对霍乱弧菌O139监测与研究,及时发现和控制疫情蔓延.
-
霍乱弧菌O139 mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定
目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素(Mannose-Sensitive Hemagglutinin,MSHA)基因,构建原核表达系统,鉴定重组表达产物的免疫反应性.方法高保真PCR扩增mshA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coli BL21(DE3),IPTG诱导目的重组蛋白(rMSHA)表达、Ni-NTA亲和层析法收集蛋白;Western blot鉴定其免疫反应性.结果所克隆的mshA基因与GenBank报道的(AE004128)序列完全一致.构建的mshA基因原核表达系统pET-28a(+)-mshA-E.coli BL21(DE3)表达量占细菌总蛋白的20%以上.表达的蛋白(约20kD)可与His单克隆抗体发生特异性免疫结合.结论成功构建了霍乱弧菌O139mshA基因的高效原核表达系统,表达的rMSHA蛋白有良好的免疫反应性,为进一步研制MSHA及其抗体检测试剂盒奠定了基础.
-
霍乱弧菌O139菌毛的提取及鉴定
为给霍乱弧菌亚单位菌苗的研制提供基础,作者对霍乱弧菌O139菌毛的提取和鉴定方法进行了探讨.结果发现,菌毛的佳表达条件为AKI或CFA培养基中30℃静止培养24～36小时.SDS-PAGE电泳证实了TcpA蛋白的存在,分子量为20.5kd.用鼠抗毒素共调菌毛(TCP)的单克隆抗体和羊抗鼠IgG-HRP作斑点酶免疫试验,结果为阳性.用TCP免疫大白兔所获得的免疫血清与O139型和El Tor型霍乱弧菌菌株作常规凝集试验,可见TCP与E1 Tor型菌株发生交叉反应.由此表明TCP可作为一种有效的保护抗原,用于霍乱菌苗的研制.
