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黄芪、三七及其配伍对MNNG诱导萎缩性胃炎癌前病变大鼠Gli1/2/3、SUFU及CyclinD1水平的影响
目的 探讨黄芪、三七及其配伍对萎缩性胃炎癌前病变大鼠神经胶质瘤关联癌基因同源物(Gli1/2/3)、丝氨酸激酶抑制物(SUFU)及细胞周期蛋白CyelinD1水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪组、三七组、黄芪三七组、Purmorphamine组、环巴明组及叶酸组,每组10只.采用MNNG负荷多因素法制备萎缩性胃炎癌前病变模型,并给予相应药物治疗8周.Western blot及RT-PCR检测大鼠Gli1/2/3蛋白及基因水平.量子点介导的免疫荧光化学法检测SUFU及CyclinD1蛋白表达.结果 与空白组相比,模型组大鼠Gli-1 mRNA含量降低明显(P＜0.01),Gli-2及Gli-3蛋白含量均显著升高(P＜0.01),SUFU蛋白表达明显增强(P＜0.01),CyclinD1蛋白表达明显减弱(P＜0.01).与模型组相比,三七组可明显升高Gli-1基因表达(P＜0.05),降低Gli-2、Gli-3和SUFU的蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01),黄芪三七组对Gli-3及SUFU的蛋白表达具有改善作用(P ＜0.05,P＜0.01),而黄芪组仅能降低SUFU蛋白表达(P＜0.01),对其余指标均未见明显改善.结论 活血药三七可影响萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜hedgehog信号通路中关键因子的表达,从而对萎缩性胃炎癌前病变起到防治作用.
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丹参含药血清对肝星状细胞Hh通路中SuFu和DYRK2表达的影响
观察丹参含药血清对瘦素刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抑制剂(SuFu)和双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2 (DYRK2)表达的影响.清洁级SD大鼠(60只)给予丹参水煎剂、生理盐水、秋水仙碱,连续灌胃10 d制备丹参含药血清.体外培养的肝星状细胞(HSCs),除空白对照组外,其余各组均予瘦素100μg·L-1刺激24h,各组含药血清干预后置于37℃,5％ CO2孵箱中培养.24h后收集细胞,采用MTT法检测HSCs的增殖,分别采用RT-PCR和Western blot法测定SuFu和DYRK2的表达情况.用瘦素刺激大鼠HSCs后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与空白组比较P ＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显降低(与空白组比较P＜0.01或P＜0.05).抑制剂组(cyclopamine)、丹参含药血清、秋水仙碱组干预后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜0.01).在模型组的基础上加入Hh通路激动剂(purmorphamine)充分活化后,DYRK2 mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显降低(与模型组比较P＜0.01).用丹参含药血清干预激动剂组后,DYRK2 mRNA和蛋白表达明显降低(与模型组比较P＜0.01),SuFu mRNA和蛋白表达均明显升高(与模型组比较P＜ 0.01).丹参含药血清可通过干预瘦素诱导的HSCs中SuFu和DYRK2的表达,进而影响HSCs的活化增殖.
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人胰腺癌编码SUFU蛋白的新剪接体
目的 分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体.方法 用反转录和3 'cDNA末端快速扩增(3'RACE)法扩增suppresser of fused (SUFU)片段,测序发现一个新的外显子,应用RT-PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU(nSUFU).采用脂质体法将nSUFU及SUFU转染SW1990细胞,应用蛋白质印迹法检测SW1990细胞及胰腺癌组织新剪接体编码的蛋白质的表达.结果 通过3'RACE法的第二轮巢式PCR扩增产物约600 bp,经测序并将其序列与NCBI网站Blast序列对比分析发现,在SUFU mRNA isoforml(NM_016169.3)的第10外显子和第1 1外显子之间插入了一个长为126 bp的新外显子.通过对SW1990细胞的验证,包含新外显子的完整的新剪接体片段长约1400bp.转染nSUFU的SW1990细胞强表达nSUFU蛋白,胰腺癌组织既表达SUFU蛋白,又表达nSUFU蛋白.结论 人类胰腺癌组织和细胞中存在一种新的可以编码SUFU蛋白的剪接体.
关键词： 胰腺肿瘤 Hedgehog信号通路 剪接体 SUFU -
髓母细胞瘤中β-连环蛋白、血管内皮生长因子受体-2和SUFU的表达及其相关性
目的 探讨髓母细胞瘤中β-连环蛋白(β-catenin)、血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelia growth factor receptor-2,VEGFR-2)和SUFU(Suppressor of fused)的表达及其相关性.方法 采用免疫组化SP法检测33份髓母细胞瘤和10份瘤旁正常小脑组织中β-catenin、VEGFR-2和SUFU的表达情况,并分析三者之间表达的相关性.结果 33份髓母细胞瘤组织中,β-catenin、VEGFR-2和SUFU的阳性率分别为66.7％(22/33)、87.9％(29/33)和30.3％(10/33),正常小脑组织中的阳性率分别为10％(1/10)、10％(1/10)和90％(9/10),髓母细胞瘤中3种蛋白的表达与正常小脑组织比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；髓母细胞瘤中β-catenin与VEGFR-2的表达呈正相关,与SUFU的表达呈负相关.结论 β-catenin、VEGFR-2和SUFU与髓母细胞瘤的发生发展密切相关.
关键词： 髓母细胞瘤 β-连环蛋白 血管内皮生长因子受体-2 SUFU -
人胰腺癌组织中miR-223与Hedgehog通路中SUFU、GLI1表达相关性分析
目的:探明SUFU、GLI1基因在正常胰腺组织以及胰腺癌和癌旁组织中的mRNA表达,分析miR-223的表达与GLI1、SUFU基因转录之间的关系,以及SUFU、GLI1基因在胰腺癌发病过程中的作用.方法:对正常胰腺组织以及胰腺癌和癌旁组织进行总RNA的提取,采用Real-time PCR方法,检测SUFU、GLI1基因的转录情况,对SUFU、GLI1的mRNA的表达量与miRNA-223的表达量进行相关性分析.结果:胰腺癌组织中GLI1 mRNA的表达量为4..79 (1.19,9.89),胰腺癌癌旁组织中的表达量为2.01(0.70,5.76)(P＜0.05).胰腺癌组织中SUFU mRNA表达量为1.34 (0.91,2.31),胰腺癌癌旁组织的表达量为1.51(1.23,2.56)(P＞0.05),胰腺癌癌旁组织中GLI1 mRNA的表达量与miR-223在胰腺癌癌旁组织中的表达量之间存在一定程度的相关性(P＜0.05).结论:GLI1mRNA参与了胰腺癌的发生,而SUFU mRNA与胰腺癌发生关系不大.GLI1基因及miR-223在胰腺癌的发生中可能起到一定的协同作用.
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结肠癌中Hedgehog信号转导通路成员的表达及其意义
目的:探讨结肠癌中Hedgehog信号转导通路成员异常活化的情况及其临床意义.方法:选取2009年3月至2010年6月间上海交通大学医学院附属新华医院66例结肠癌组织标本及20例癌旁组织标本,免疫组化检测结肠癌组织中Hedgehog信号转导通路主要蛋白SHH、PTCH1、Gli1、SuFu等的表达,并分析其与结肠癌临床病理特征的关系.结果:在结肠癌组织中SHH和Gli1强阳性表达,而PTCH1、SuFu弱表达(表达率分别为64%、36%、72%及20%);在癌旁组织中,SHH、PTCHI弱表达,而Gli1、SuFu无表达.PTCH1和Gli1的表达与结肠癌的浸润深度有关(P =0.023,P=0.040),而与年龄、性别、病理类型等无关,SHH和SuFu的表达与年龄、性别、病理类型、浸润深度等无关.结论:结肠癌高表达Hedgehog信号转导通路分子,可能参与结肠癌的发生、发展.
