双类似物鼻黏膜耐受对预防实验性自身免疫性重症肌无力的细胞免疫调节机制

目的选择双类似物 (Lys262-Ala207)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻黏膜免疫耐受,探讨其对预防EAMG的细胞免疫调节机制.方法 EAMG模型在致敏前10 d(A组)及致敏当日(B组)鼻腔给药,观察预防给药后各组间病情及细胞免疫指标的变化.结果(1)急性期和慢性期预防耐受A、B组鼠病情明显轻于相应的对照组,慢性期A组明显轻于B组;(2)慢性期第50 天时CD4+CD25+ T细胞含量(单位:cpm×103)A组(11.34±1.62)、B组(8.68±1.83)均明显高于相应对照组(C组:6.78±1.63,D组:6.43±1.69),且A组高于B组;(3)预防耐受A、B组γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)4、IL-10阳性细胞含量均明显低于对照组;(4)A、B组对乙酰胆碱受体(AchR)、Lys262-Ala207和AChR-α 100～116肽段等特异性抗原的淋巴细胞的增殖反应均明显受到抑制.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜免疫耐受抑制T细胞免疫功能,在防治EAMG中起重要作用.

双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力的免疫机制

目的用双类似物鼻黏膜耐受治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠,探讨其对机体免疫机制的影响. 方法建立Lewis大鼠的EAMG模型,在致敏同时(A组)及缓解期第1天(B组)给予双类似物300 μg/只.动态评估大鼠临床症状,检测外周血(PB)AChR-Ab(IgG)含量,检测急、慢性期PB单个核细胞(MNC)及致敏第50天淋巴结、脾MNC中的CD4+CD25+细胞数改变. 结果治疗组大鼠临床症状减轻;治疗组及对照组大鼠PB中特异性AChR-Ab(IgG)含量随病程延续而增加,但在致敏后第5及第7周,A、B组特异性IgG抗体含量比各自对照组显著减低(P<0.05);双类似物鼻黏膜耐受治疗后,EAMG大鼠PB MNC中的CD4+细胞数减少(P<0.05),CD4+CD25+细胞数相对增加(P<0.05);A、B组淋巴结和脾MNC中CD4+细胞数减少(P<0.05),CD4+CD25+细胞数只在B组相对增加(P<0.05). 结论双类似物鼻黏膜耐受治疗病情进展中的EAMG有效;伴随临床症状缓解,治疗组大鼠AChR-Ab(IgG)含量减少且免疫调节性CD4+CD25+细胞数相对增多;双类似物治疗EAMG的可行性为抗原特异性治疗重症肌无力(MG)和其他自身免疫性疾病(AID)提供了依据.

双类似物鼻黏膜耐受在EAMG发病中的预防作用机制

目的采用双类似物(Lys262-Ala207)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻黏膜耐受不同时间点预防性给药,观察临床及免疫指标变化,以探讨其对EAMG免疫发病中的预防作用机制.方法应用乙酰胆碱受体(AChR)加福(氏)佐剂致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,在致敏前10 d(预防耐受A组)及致敏当日(预防耐受B组)经鼻腔给药,评价给药后A、B组及对照组大鼠体重、临床症状,观察肌电图变化、检测致敏第42天血清抗AChR抗体IgG及其亚型含量和第50天处死后淋巴结单个核细胞(MNC)中IFN-γ、IL-4及IL-10分泌细胞含量变化.结果 (1) 急性期和慢性期A、B组体重增加而临床症状明显轻于对照组,慢性期A组临床症状轻于B组;(2) A、B组低频重复电刺激出现明显衰减的阳性率低于对照组;(3) 慢性期A、B组IgG含量明显低于对照组,且A组低于B组,各组间抗体亚型IgG1含量无明显差异,而A、B组的IgG2a和IgG2b含量明显少于各自对照组,B组IgG2b含量高于A组;(4) A、B组淋巴结中的IFN-γ、IL-4及IL-10阳性细胞含量均明显低于各自对照组.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受不仅可有效地抑制临床症状,并使致病性强的AChR特异性IgG2抗体分泌量减少,IgG抗体亚型含量的分布发生了向Th2型细胞主导亚型的改变;不同时间点预防耐受效果不同,免疫前优于免疫同时耐受;Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受给药方便、安全、有效,可为防治人类重症肌无力提供依据.

设计耐受原并用鼻黏膜耐受治疗EAMG的方法学研究

目的设计特异性耐受原,通过其鼻黏膜耐受治疗对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)发病过程的影响,以探讨该疗法在模型应用中的可行性. 方法用Lewis大鼠建立EAMG模型,选取双类似物作为耐受原在致敏同时给予鼻黏膜耐受治疗,动态观察大鼠体重及临床评分改变. 结果虽然治疗组大鼠发病率不降低,但是在EAMG急性期和慢性期,其临床症状均较对照组减轻(P<0.05). 结论用双类似物鼻黏膜耐受可以达到治疗EAMG的目的,其结果为抗原特异性治疗重症肌无力(MG)和其他自身免疫性疾病(AID)提供了依据.

鼻黏膜耐受对重症肌无力体液免疫机制的影响

目的探讨重症肌无力(MG)的特异性体液免疫异常及双类似物(Lys262-Ala207)鼻黏膜免疫耐受的疗效.方法采用ABC-ELISA系统分别检测MG患者实验组(n=39)和对照组(n=30)的AChRAb及其亚型;监测耐受前后肌电图变化;应用许氏评分法对病情的严重程度和转归进行评定.结果鼻黏膜耐受后各组间IgG总量无差异,而实验组耐受后IgG2明显低于耐受前及对照组(P<0.01,P<0.05),IgG3高于耐受前及对照组(P<0.01,P<0.05),耐受前后各组IgG4无显著差异;耐受后4周及8周两组间肌肉动作电位的波幅衰减幅度差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);MG实验组耐受后临床相对计分达50%以上者为31例,占总患者的79.48%,MG对照组临床相对计分达50%以上者为10例,占总患者的32.56%,两组间有效率差异有统计学意义(P<0.01).结论 MG患者体内存在特异性体液免疫异常,AChRAb及其亚型可反映MG患者的免疫学改变,提示MG存在免疫功能的紊乱,符合自身免疫病的特点;双类似物鼻黏膜耐受治疗有效.

鼻黏膜耐受在实验性自身免疫性重症肌无力治疗中的作用

目的对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型采用双类似物进行鼻黏膜免疫耐受治疗,观察其临床及免疫功能的变化,评价临床疗效及探讨作用机制.方法建立Lewis大鼠EAMG实验动物模型,检测致敏同时(A组)和缓解期第1天(B组)给予双类似物鼻黏膜免疫耐受治疗后,大鼠的体重、临床症状、致敏第42天血清抗AChR抗体IgG含量.结果①EAMG大鼠经其治疗后体重增加,临床症状得以缓解.②治疗后的血清抗AChR抗体IgG含量均少于各自对照组,A组少于B组,均有显著差异(P＜0.05).结论双类似物鼻黏膜耐受治疗EAMG明显地缓解了肌无力症状,伴随特异性体液免疫功能的抑制,此结果为采用双类似物鼻黏膜耐受治疗人类MG提供了依据.

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的采用双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药,观察临床发病变化,并评价疗效,探讨其控制EAMG临床发病作用机制.方法应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,并在致敏前10天(A组)及致敏当日(B组)鼻腔给药.观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化.结果①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组,P均<0.05;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组,P均<0.05.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据.

双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力的影响

双类似物对重症肌无力幼鼠Foxp3+CD4+CD25+Tregs的作用机制

目的 评价鼻黏膜免疫耐受预防性双类似物Lys262-Ala207给药对重症肌无力被动转移(PTMG)幼鼠的临床疗效,探讨Foxp3对PTMG幼鼠发病的免疫干预作用和调节机制.方法 应用乙酰胆碱受体单克隆抗体(mAb35)建立C57 BL/6小鼠PTMG模型,将24只幼年雌性C57BL/6小鼠分为3组:耐受组(T组)、模型对照组(MC组)、正常对照组(C组),并从致敏前10 d每天经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207或PBS.检测耐受后各组小鼠的临床症状.采用流式细胞技术检测小鼠脾细胞中CD4+ CD25 +T淋巴细胞及Foxp3+ CD4+CD25+ Tregs水平,实时荧光定量聚合酶链反应分析小鼠脾细胞中Foxp3 mRNA的表达,ELISA法检测小鼠血清IL-2、IFN-γ水平.结果 1.T组小鼠临床症状明显轻于MC组,但未达到正常.2.T组小鼠重复频率电刺激(RNS)出现衰减的阳性率低于MC组,血清AchR-Ab水平明显低于MC组,但2组与C组相比仍明显增高,差异均有统计学意义(P均＜0.05).3.T组小鼠脾细胞中CD4+ CD25+T淋巴细胞/CD4+T淋巴细胞、Foxp3+CD4+ CD25+ Tregs/CD4+ CD25+T淋巴细胞均较MC组高,差异均有统计学意义(P均＜0.01,0.05)；且均低于C组,但差异无统计学意义(P均＞0.05).T组小鼠脾细胞中Foxp3 mRNA表达量较MC组增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；且低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).T组小鼠血清IL-2、IFN-γ水平较MC组均显著减低,较C组均显著增高,差异均有统计学意义(P ＜0.01,0.05).结论 Lys262-Ala207经鼻黏膜耐受对预防幼鼠PTMG发病具有一定作用.Lys262-Ala207诱导PTMG发生免疫耐受的机制之一可能是通过上调Foxp3mRNA的表达.Foxp3有可能是MG治疗的一个靶基因.

双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力幼鼠作用机制的研究

目的 对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)幼鼠选择双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时问点进行鼻黏膜免疫耐受预防性给药后,观察其临床及免疫指标的变化,评价临床疗效及探讨鼻黏膜耐受对EAMG的预防作用机制.方法 用乙酰胆碱受体单克隆抗体建立C57BL/6小鼠EAMG模型,并在致敏前10 d(A组)及致敏当日(B组)经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207诱导黏膜耐受,检测给药后A,B组及相应对照组CA组、CB组小鼠的临床症状及各项指标的改变情况.结果 ①A,B两组临床症状明显轻于相应对照组,且A组临床症状轻于B组.②A,B组低频重复电刺激(RNS)出现衰减的阳性率低于各自对照组;③A,B两组小鼠血清乙酰胆碱受体抗体AchRAb(IgG)水平明显低于各自对照组,且A组轻于B组.④调节性CD4+CD25+T细胞含量A组(4.516±0.598)明显高于B组(3.671±0.300),且A,B组明显高于各自对照组.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受可有效地抑制重症肌无力的临床症状,为采用该途径治疗重症肌无力的可行性提供了理论依据.

预防性双类似物鼻粘膜耐受对EAMG的影响

目的选择双类似物(Lys262-Ala207)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型进行鼻粘膜耐受预防性给药,观察其临床及免疫指标变化,并评价疗效,探讨预防性鼻粘膜耐受在EAMG中的预防作用机制.方法应用乙酰胆碱受体(AChR)加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型,并在致敏前10 d(预防耐受A组)及致敏当日(预防耐受B组)给予耐受肽Lys262-Ala207及相应对照组CA、CB采用相同剂量对照肽MBP-p83-99鼻腔给药.检测给药后A、B组及相应对照组大鼠的体重、临床评分、肌电图、肌肉中AChR含量丢失变化及致敏第42 d血清抗AChR抗体IgG含量.结果急性期和慢性期A、B组体重明显超过相应对照组,临床症状明显轻于相应对照组,慢性期A组体重明显超过B组、病情明显轻于B组;A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率低于相应对照组;A、B组肌肉AChR含量丢失分别明显低于相应对照组,而A组低于B组;慢性期42 d A、B组lgG含量明显低于相应对照组,同时A组明显低于B组.结论本实验表明,预防耐受的疗效与自身免疫启动时间有关,启动前优于启动时耐受;双类似物鼻粘膜耐受预防不仅可有效地抑制临床症状,且可特异性减低致病性循环抗体含量和减少神经肌接头AChR含量丢失,为采用双类似物鼻粘膜耐受防治人类重症肌无力(MG)提供了依据.

Th1/Th9/Th17细胞失衡对实验性自身免疫性重症肌无力幼鼠的影响及机制初探

目的:对实验性自身免疫性重症肌无力(myasthenia gravis,MG)幼鼠采用双类似物(Lys262-Ala207)经鼻黏膜诱导免疫耐受后,了解实验幼鼠Th1 /Th17/Th9细胞及产生相关细胞因子的细胞变化情况及其与EAMG幼鼠发病的相关性,探讨其调控作用机制.方法:将30只幼年雌性C57BL/6小鼠采用完全随机分组方法分为3组:模型组、耐受组和对照组.模型组经腹腔注射含1.0 mg/kg mAb35的Ringer's液0.2 ml,建立EAMG模型;耐受组在致敏前10d先经鼻黏膜滴入Lys262-Ala207诱导黏膜耐受,再按照模型组方式进行处理;对照组注射不含mAb35的Ringer's缓冲液0.2 ml.采用流式细胞仪检测小鼠脾脏细胞中分别代表Th 1/Th17/Th9细胞功能的CD4+干扰素(interferon,IFN)-γ+细胞、CD4+白介素(interleukin,IL)-17+细胞和CD4+ IL-9+细胞的含量.采用双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-17、IL-9的水平.结果:(1)MG的临床表现对照组明显轻于模型组和耐受组,而耐受组经双类似物免疫耐受后,其临床症状也较模型组明显减轻.(2)模型组、耐受组和对照组的CD4+IFN-γ+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(3)模型组、耐受组和对照组的CD4+IL-17+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00);(4)模型组、耐受组和对照组的CD4+ IL-9+细胞含量3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00).(5)模型组、耐受组和对照组的脾细胞上清中细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平3组间比较差异有统计学意义(P=0.00),即:模型组分别比耐受组和对照组高(P=0.00),而耐受组也比对照组高(P=0.00).结论:采用Lys262-Ala207对实验幼鼠进行鼻黏膜耐受后不仅能有效的缓解其MG的临床症状,同时还能下调导致实验幼鼠发病的CD4+ IFN-γ+细胞、CD4+IL-17+细胞和CD4+ IL-9+细胞含量水平以及细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-9的水平,缓解Th1/Th17/Th9细胞功能失衡现象,从而达到预防和减轻实验幼鼠发病的作用.