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氚示踪法评估RNAi介导Mfn2基因沉默对小鼠体内物质代谢的影响
采用同位素示踪技术研究RNAi介导线粒体融合素基因-2(Mfn2)沉默小鼠体内物质代谢变化.构建了含Mfn2短发卡RNA(short hair RNA, shRNA)干扰质粒和阴性对照质粒.24只BALB/c小鼠分为转染组和阴性对照组,每组各12只,转染组经尾静脉注射Mfn2干扰质粒,对照组注入阴性对照质粒.质粒注入5 d后,将氚水(3H2O)或氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)经腹腔或尾静脉注射到小鼠体内,留取血标本和组织标本,用液体闪烁计数仪测定标本放射性浓度,计算小鼠组织脂肪酸合成率和肝脏葡萄糖生成率,两组间均数比较采用t检验.结果显示,Mfn2基因转染组小鼠肝脏葡萄糖生成率为49.43±16 31,明显高于阴性对照组的24.91±4.07(P<0.05),肝脏、肌肉、心脏、脂肪组织的脂肪酸合成率分别为0.10±0.00、9.12±1 90、1.18±0.28、11.11±1.31,显著低于阴性对照组0.79±0.07,70.52±13.95,53.88±9 90,45.43±5.91.以上结果表明,Mfn2基因在体内葡萄糖和脂肪酸代谢中起重要作用.
关键词： 氚示踪 线粒体融合素基因-2(Mfn2) 基因沉默 物质代谢 -
INK4系列抑癌基因纯合子缺失、甲基化与白血病预后的实验研究
目的 研究INK4系列抑癌基因纯合子缺失、甲基化与白血病预后的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)研究p16基因家族在白血病中纯合子缺失,应用甲基化敏感限制内切酶HpaⅡ结合PCR技术研究白血病患者p16、p15、p18、p19基因甲基化状况,用单因素、多因素Logistic回归分析其基因失活与急性白血病(AL)预后的关系.结果 基因表达组治疗有效27例(84.38%),基因失活组治疗有效11例(28.95%),基因表达组治疗有效率明显高于基因失活组(P<0.001).单因素、多因素Logistic回归分析结果显示p16、p15基因失活化疗有效率明显低于基因表达组.结论 p16、p15基因失活可作为AL病程进展、复发、预后的指标之一.
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DNA去甲基化与基因激活过程
目前认为DNA去甲基化有两种方式:一种是主动去甲基化,另外一种是与复制相关的DNA去甲基化.DNA甲基化对机体内的生命现象具有重要的作用,然而,我们对那些DNA已甲基化并有可能会形成兼性异染色体的基因,其如何由沉默状态转变为活性转录状态的过程还不清楚.近在对拟南芥的研究中发现,DNA糖基化酶DME和ROS1参与了DNA去甲基化的过程.DME在胚乳中的基因组印记是必需的,而ROS1在植物性组织的基因以及转座子的DNA甲基化区域的剪切中起作用.这些发现为我们在分子层面上理解DNA去甲基化以及基因激活的机制提供了线索.本文中,我们对DNA去甲基化的方式、机制以及与基因激活的关系作一综述.
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MACC1与HeLa细胞增殖侵袭能力的相关性研究
目的:探讨MACC1被沉默后对HeLa细胞增殖和侵袭性的影响.方法:在siRNA转染后,采用MTT方法,检测HeLa细胞增殖能力的变化情况;应用Transwel实验检测细胞的体外迁移能力.结果:利用siRNA转染抑制MACC1基因的表达之后,细胞增殖率仅为正常HeLa细胞以及对照组细胞的71％;在进行siRNA转染之后,Tranwel小室实验中迁移到下室的细胞数量明显要少于未转染siRNA的HeLa细胞.结论:MACC1表达被沉默之后,宫颈癌组织HeLa细胞的增殖率降低;MACC1的表达对宫颈癌组织细胞的侵袭能力起到增强作用;MACC1沉默抑制了宫颈癌细胞的迁移.
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基因沉默技术的研究进展及应用
基因沉默是基因表达调控的一种重要方式,是生物体在基因调控水平上的一种自我保护机制.RNAi基因沉默技术,已成为分析人类基因组功能的有力工具,在病毒感染、肿瘤、移植免疫等疾病的治疗上有广阔的前景.本文简述了基因沉默技术的发展状况、研究进展和应用前景.
关键词： 基因沉默 RNA干扰(RNAi) 研究进展 应用 -
Piwi家族与乳腺癌的研究进展
Piwi家族归属于Argonaute(AGO)家族蛋白亚科成员,在干细胞自我更新、基因缄默及各种生物的转录调控中表现出重要作用.近年来,研讨发现Piwi与乳腺癌(Breast cancer,BC)发病机理密切相关,其中乳腺癌中PIWI家族蛋白的异常表达是piRNA的生物合成和功能要求.靶向Piwi基因沉默有可能成为一种治疗BC的潜在有效方法.本文从Piwi家族在BC中的内在发病机制和治疗手段来系统综述,并提供BC防治策略的参考.
