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联合应用乙型肝炎疫苗与乙型肝炎免疫球蛋白预防乙型肝炎病毒母婴传播失败危险因素的研究
母要传播是造成儿童慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要途径,关于联合应用乙型肝炎(乙肝)疫苗与乙肝免疫球蛋白(HBIG)预防HBV母婴传播的已经有些报道,但疫苗保护率差别较大,且存在母婴双方血清学或HBV DNA资料不全的问题.近年来,HBV免疫逃逸株问题越来越受到重视,有必要进一步研究免疫逃逸株特别是本地区的变异规律.
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呼吸道合胞病毒逃逸株对单克隆抗体预防的抗性比较
目的 Palivizumab(PZ)是目前临床使用的惟一一个预防人类感染性疾病的单克隆抗体,本研究评估不同逃逸株在棉鼠体内对PZ预防的抗性. 方法在细胞培养系统中筛选获得PZ逃逸株,测定其全长F基因序列,用微量中和法评估逃逸株对PZ的抗性,在棉鼠模型体内观察逃逸株对PZ预防的抗性差异. 结果筛选获得的PZ逃逸株于F蛋白内第268位氨基酸(F212)和272位氨基酸(MP4、MS312、MS412和MS512)发生替换.用Western blot检测发现所有逃逸株PZ识别位点抗原性改变.F212复制能力受损,而其他逃逸株复制能力与A2母株接近.与A2原型株比较,MP4和MS412在体内外对PZ的中和活性具完全抗性.F212体外对PZ中和活性显示不完全抗性,但大剂量PZ在棉鼠体内仍能有效预防F212感染. 结论不同PZ逃逸株体内对PZ的预防效应可能具有不同程度的抗性,某些逃逸株即使在PZ筛选压力下产生,亦不一定导致临床后果.
关键词： 呼吸道合胞病毒 逃逸株 Palivizumab 预防 F基因 -
呼吸道合胞病毒单克隆抗体逃逸株体内适合度研究
目的 此前研究已在体外筛选获得呼吸道合胞病毒(RSV)Palivizumab(PZ)逃逸株MP4,体外评估发现MP4适合度高于A2母株,本研究在免疫缺陷棉鼠模型中进一步评价MP4体内适合度.方法 采用大剂量环磷酰胺腹腔注射法制备免疫抑制鼠模型,将PZ逃逸株MP4和母株A2等量混合,经鼻腔接种免疫缺陷动物模型,于接种后4天和4周分批处死动物,取动物肺脏组织研磨后采用差异噬斑形成法或核苷酸序列图谱分析法检测混合病毒群体中母株A2和逃逸株MP4的相对含量,以代表MP4相对于A2的适合度.将肺内病毒F基因片段RT-PCR扩增产物克隆并转化大肠杆菌,随机挑取部分菌落再行PCR扩增F基因片段及序列测定,观察F基因第828位碱基并计算A2株和MP4相对含量.结果 差异噬斑法结果显示接种后4天和4周棉鼠肺内病毒混合群体中均以MP4占优,序列图谱分析发现接种后4周8只棉鼠中7只肺内MP4占优.接种后4周克隆的8只棉鼠F基因片段78%(120/154)为MP4基因信号.结论 与体外适合度结果类似,MP4在棉鼠肺内的适合度高于A2母株,提示与MP4基因型相同的逃逸株一旦产生,可能在免疫缺陷个体间传播.
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呼吸道合胞病毒单克隆抗体逃逸株体外适合度变化
目的 Palivizumab(PZ)是针对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白的人源化单克隆抗体(ScAb).本研究观察PZ逃逸株体外适合度变化规律.方法 采用竞争复制法测定两株Pz抵抗株(F212和MP4)的体外适合度.将等量F212和母株A2混合后在HEp-2细胞中连续转代,在不同时间点采用差异噬斑法、核酸序列图谱分析法和限制性片段多态性法分析混合病毒群体中F212和A2的比例.由于MP4在细胞培养和棉鼠肺内复制水平与A2相似,故将A2和MP4按照1:1、10:1、100:1和1000:1的比例混合并在HEp-2细胞中竞争复制,不同时点采用差异噬斑法和核酸序列图谱分析法分析混合病毒群体中MP4和A2比例.结果 等比例混合的F212/A2混合群体在传代至10代时,F212已基本消失,传至35代时仍无F212信号,提示其适合度低于A2.A2/MP4混合病毒群体中,除按1000:1比例预混外,其余所有比例预混的病毒中MP4均成为优势株,因而提示MP4的适合度高于A2.结论 首次发现RSV PZ逃逸株适合度可超过原型株A2,了解适合度增加或降低的机制对减毒活疫苗的研究有理论指导意义.
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RNA干扰的抗病毒作用及其影响因素
自从在哺乳动物细胞中发现存在RNA干扰现象以来,RNA干扰技术也应用于抗病毒研究.通过多种形式诱发的RNA干扰对细胞中病毒的复制或病毒基因的表达都产生了有效的抑制,为病毒病的预防和治疗提供了新的途径.然而,一些因素制约着RNA干扰的潜在应用,如在RNA干扰压力下病毒逃逸株的出现,有的病毒可以编码RNA干扰抑制因子以及小干扰RNA的脱靶效应等.
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呼吸道合胞病毒单克隆抗体抵抗株的体内筛选
目的:Palivizumab(PZ)是目前唯一用于防治感染性疾病的单克隆抗体药物,主要用于预防高危患儿RSV感染.体外筛选获得的PZ逃逸株F基因发生众多突变,且在棉鼠体内完全抵抗大剂量PZ预防效应.本研究评估RSVPZ逃逸株在动物体内是否出现.方法:用环磷酰胺(CY)腹腔注射法制备免疫抑制棉鼠模型,鼻腔接种病毒前24h或后6周肌注15mg/kg PZ.感染后1 2周收集棉鼠肺脏,用逆转录PCR法扩增RSV F基因片断并克隆入质粒载体,测定克隆cDNA序列筛查F基因突变.结果:在5只接受PZ预防或治疗的棉鼠中,3只棉鼠肺内病毒为含有逃逸株和原型株的混合群体;来自上述3只棉鼠的F基因cDNA克隆中,超过50%显示与体外PZ逃逸株相同的F基因突变.从其中1只棉鼠肺脏中分离的病毒抵抗PZ中和效应.结论:RSV在环磷酰胺处理的棉鼠模型肺内复制时间明显延长,在PZ筛选压力存在情况下,PZ逃逸株可在体内产生,并可能导致PZ预防或治疗失效,提示今后有必要在PZ使用人群中长期监控逃逸株是否出现.
