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p38MAPK和ERK1/2抑制剂对镉诱导肾细胞凋亡基因表达的影响
目的 探讨p38MAPK和ERK1/2抑制剂对镉诱导NRK肾细胞凋亡基因bcl-2、bax和caspase-3 mRNA表达影响.方法 用不同剂量CdCl2(0,2.5,5,10μmol/L)染毒大鼠NRK细胞12 h,p38MAPK抑制剂SB20358010 μmol/L和ERK1/2抑制剂PD98059 10 μmol/L预处理NRK细胞0.5 h后再加入10 μmol/L CdCl2染毒细胞,用MTT方法检测细胞存活率,SYBR Green I荧光定量PCR检测bcl-2、bax和caspase-3的mRNA表达.结果 NRK细胞染镉后细胞存活率随染毒剂量增加而下降;p38MAPK抑制剂和ERK1/2抑制剂加入组比单纯染镉组的细胞存活率升高.实时荧光定量PCR检测NRK细胞染镉后bax基因和caspase-3基因表达比对照组明显增强,而bcl-2基因表达显著降低.加入p38MAPK抑制剂SB203580后,bcl-2基因表达比单纯染镉10 μmol/L组明显升高,但bax基因和caspase-3基因表达比单纯染镉10 μmol/L组明显下降.加入ERK1/2抑制剂PD98059,也出现bcl-2基因表达增加,bax基因和caspase-3基因表达下降.结论 MAPK信号传导通路可能在镉诱导凋亡基因表达中发挥作用.
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p38MAPK和ERK1/2对镉诱导NRK肾细胞c-myc与c-fos基因mRNA表达的影响
目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂对镉染毒NRK肾细胞后原癌基因c-myc与c-fos表达的影响.方法 用不同剂量CdCl2(0、2.5、5.0、10.0 μmol/L)染毒大鼠NRK细胞12 h,p38MAPK抑制剂SB 203580 10.0 μmol/L和ERK1/2抑制剂PD 98059 10μmoL/L预处理NRK细胞0.5 h后,再加入10.0μmoVLCdCl2染毒细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡率,SYBRGreen I荧光定量PCR检测c-myc与c-fos mRNA表达.结果 流式细胞仪检测NRK细胞染镉后细胞凋亡率随染毒剂量增加而增加;p38MAPK抑制剂SB 203580+10.0μmoL/L CdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著下降;但ERK1/2抑制剂PD 98058+10.0μmoL/L CdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著升高.实时荧光定量PCR检测NRK细胞染镉后c-mye和c-los mRNA表达明显增强;单独用SB 203580和PD 98058刺激NRK细胞后c-myc和c-fos mRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义,但SB 203580和PD 98058预处理NRK细胞O.5 h后加入10.0 μmol/L CdCl2与单纯10.0μmoL/L染镉组比较,c-myc和c-fos mRNA表达显著降低.结论 MAPK信号转导通路可能在镉诱导原癌基因c-myc和c-fos表达中发挥作用.
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大黄总蒽醌含药血清对NRK细胞AQP2与AQP4表达的调节效应
目的:探讨大黄总蒽醌含药血清对体外培养NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)、水通道蛋白4(AQP4)表达的调节效应.方法:16只SD大鼠随机分为正常组、大黄总蒽醌低、中、高剂量组(0,1 400,2 500,4 500 mg·kg-1·d-1灌胃),7 d后麻醉处死取血制备含药血清.体外培养NRK细胞并给予不同浓度大黄含药血清培养液24 h处理,采用免疫荧光检测AQP2、AQP4的定位,Western blot及半定量RT-PCR检测AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达.结果:AQP2、AQP4主要表达在NRK细胞膜上,2 500,4 500 mg·kg-1·d-1大黄总蒽醌含药血清培养液可抑制NRK细胞的AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:大黄总蒽醌含药血清可抑制NRK细胞AQP2、AQP4基因转录与翻译,提示大黄的利尿作用可能与调节AQP2、AQP4表达有关.
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氯化镉对NRK肾细胞DNA损伤及细胞凋亡作用
目的 观察氯化锅对大鼠肾细胞(NRK)DNA损伤和细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度氯化镉(0,2.5,5,10,20 μmol/L)染毒NRK细胞12 h,应用Hoechst/PI双荧光活性染色检测镉致NRK细胞的凋亡率;单细胞凝胶电泳法检测镉对NRK细胞DNA的损伤.结果 Hoechst/PI双染检测2.5,5,10和20μmol/L镉染毒组的细胞凋亡率分别为5.9%,12.4%,24.6%和46.2%,与对照组比较明显升高.单细胞凝胶电泳检测5,10和20μmol/L染镉组的尾部DNA含量和尾长,比对照组明显增加,且各染镉组与尾部DNA含量和尾长存在剂量-效应关系.结论 氯化镉可诱发大鼠NRK细胞凋亡,DNA损伤是镉致NRK细胞凋亡的主要原因.
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氯化镉对大鼠肾纤维细胞Bcl-2、Bax基因表达影响实验研究
目的 采取离体细胞培养的方法观察氯化镉在不同时间、不同浓度作用下抑制正常大鼠肾纤维(NRK)细胞生长,及对Bcl-2、Bax基因的表达的影响.方法 实验中选择5、10、20、40、60 μmol/L氯化镉对NRK细胞染毒24 h,及20 μmol/L氯化镉对NRK细胞染毒0.5、2、6、12、24 h,流式细胞仪观察细胞凋亡率,选择5、10、20、40、60 μmol/L不同浓度的氯化镉离体培养NRK细胞12 h,及20 μmol/L氯化镉分别离体培养NRK细胞0.5、2.0、6.0、12.0、24 h,利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测Bcl-2、Bax蛋白及其基因的表达.结果 氯化镉可以诱导NRK细胞凋亡,并且有剂量、时间-效应趋势.随着染毒剂量的增加和时间延长,Bax蛋白表达逐渐增强,且有剂量、时间-效应趋势,而Bax基因表达量保持在一个相对稳定的水平,无剂量、时间-效应趋势,Bcl-2蛋白及其基因的表达随着染镉时间的延长和浓度的增加,表达逐渐减弱,有剂量、时间-效应趋势.结论 Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表述减弱是镉诱导NRK细胞凋亡过程中一个重要的调节机制,且与Bax/Bcl-2比值有密切的关系.
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镉诱导大鼠肾细胞早期凋亡及bax基因表达的实验研究
目的探讨氯化镉(CdCl2)在不同时间、剂量作用下,诱导正常大鼠肾(NRK)细胞早期凋亡的发生情况以及CdCl2染毒不同时间对bax基因表达的影响.方法选择不同浓度(0～60 μmol/L)CdCl2体外作用NRK细胞12 h及20 μmol/L CdCl2体外作用NRK细胞不同时间(10 min～24 h),用流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录-多聚合酶链扩增反应(RT-PCR)的方法观察20 μmol/L CdCl2作用NRK细胞不同时间(0.5～6 h)bax mRNA的表达情况.结果0、5、10、20、40、60μmol/L CdCl2作用NRK细胞12 h,细胞早期凋亡发生率分别为1.49%、3.77%、7.77%、14.83%、9.69%、7.23%;20 μmol/L氯化镉作用NRK细胞10、20 min和0.5、2、6、12、24 h后,早期凋亡发生率分别为0.69%、1.16%、2.71%、4.11%、16.72%、14.83%、9.63%;20 μmol/L CdCl2处理NRK细胞0.5、2、6 h后,bax的相对表达量(β-actin为内参照)分别为:对照组0.604±0.184,染毒0.5 h组1.017±0.285,染毒2 h组1.424±0.367,染毒6 h组1.742±0.392.结论 CdCl2可以诱导NRK细胞早期凋亡,并可使bax基因表达增强.
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镉对大鼠肾细胞毒性和脂质过氧化作用的影响
目的 探讨氯化镉对NRK大鼠肾细胞毒性作用和脂质过氧化的影响.方法 CdCl2对NRK细胞染毒后,用MTT方法测定细胞的生长抑制,并测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,观察镉的细胞毒性和对脂质过氧化影响.结果 MIT实验显示CdCl2对NRK细胞的生长抑制作用随染毒浓度增加而增强,呈明显的剂量一效应关系;CdCl2染毒后使细胞培养液中LDH、MDA浓度高于对照组,而SOD水平低于对照组.结论 CdCl2对NRK细胞有一定的细胞毒性作用,并对NRK肾细胞的脂质过氧化有明显影响.
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镉对NRK肾细胞PKCα表达的影响及PKC抑制剂BisⅠ的生物学作用
目的:探讨不同浓度氯化镉(CdCl2)对NRK细胞内蛋白激酶Ca(PKCa)mRNA及其蛋白质表达的影响,以及PKC抑制剂Bisindolymaleimide I(Bis I)对镉染毒NRK细胞PKCa mRNA及蛋白质表达的生物学作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测不同浓度(0、1.25、2.50、5.00、10.00μmol/L)CdCl2对NRK肾细胞处理6 h与12 h后PKCa mRNA表达的影响,同时用Western blot技术检测CdCl2对NRK肾细胞内PKCa蛋白质表达的影响.用PKC抑制剂Bis I预处理细胞后,用不同浓度CdCl2(O、2.50、5.00 μmol/L)进行染毒,再检测PKCa mRNA及蛋tq质的表达变化.结果:CdCl2浓度在1.25-10.00 μmol/L范围内,可引起NRK肾细胞内PKCamRNA及蛋白质表达水平升高,并呈时间-剂量-效应关系;PKC抑制剂Bis I能明显抑制镉引起的PKCa mRNA及蛋白质的表达.结论:CdCl2可以诱导NRK肾细胞内PKCamRNA及蛋白质表达,PKC抑制剂Bis I具有一定程度抑制CdCIz对PKCa的诱作用,因此在抑制CdCl2对生物机体的伤害作用方面具有生物学意义.
