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栀子苷对肺缺血再灌注的保护作用及其与p-Akt和NF-κB表达的关系
目的:研究栀子苷预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:健康清洁级Wistar雄性大鼠120只,体重250～300 g/只,随机分6组,每组20只,即假手术组(A)、缺血再灌注模型组(B)、栀子苷低剂量组(C)、栀子苷中剂量组(D)、栀子苷高剂量组(E)和LY294002+栀子苷高剂量组(F),每组20例.采用结扎左肺门法建立LIRI模型,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠肺组织中的前炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,Western blot法检测p-Akt、Akt、NF-κB的表达情况.结果:与模型组比较,应用栀子苷预处理的大鼠肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6释放显著减少,p-Akt/Akt比值增加,NF-κB表达降低.应用了PI3K/Akt信号通路抑制剂后再给予高剂量栀子苷,与栀子苷其他给药组比较,TNF-α、IL-1β、IL-6释放增加,p-Akt/Akt比值下降,与栀子苷中、高剂量组比较NF-κB表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:栀子苷对于肺缺血再灌注损伤具有保护作用,保护机制可能与PI3K/Akt/NF-κB信号通路的表达有关.
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has-miR-150对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的:本研究旨在探讨has-miR-150对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法:通过构建慢病毒载体过表达miR-150并感染Jurkat细胞,另设空白组和阴性对照组,应用实时定量PCR法检测miR-150的表达;应用CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡情况,Westem blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的蛋白表达.结果:构建的慢病毒载体过表达miR-150后感染Jurkat细胞,has-miR-150表达升高约2.06倍(P＜0.05);与阴性对照相比,过表达miR-150后Jurkat细胞增殖能力明显下降(P＜0.01),凋亡数明显增多(P＜0.01),p-Akt及p-p65蛋白的表达明显下调,Akt蛋白的表达无明显变化.结论:过表达has-miR-150可以有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导其凋亡,对T-ALL可能具有潜在的抑癌作用,其机制可能与负调控PBK/Akt/NF-κB信号通路有关.
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五龙消癥丸抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移作用及机制研究
目的 探究五龙消癥丸对胃癌BGC-823细胞侵袭与迁移能力的影响及其作用机制.方法 分别用五龙消癥丸、PI3K激动剂胰岛素样生长因子l (IGF-1)及PI3K特异性抑制剂LY294002作用于BGC-823细胞,采用MTT法检测不同质量浓度五龙消癥丸对BGC-823细胞增殖的影响;Transwell小室模型研究五龙消癥丸对BGC-823细胞垂直侵袭和迁移能力的影响;采用ELISA法检测五龙消癥丸对血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达的影响;采用Western blotting及RT-PCR法检测脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中相关蛋白及mRNA的表达.结果 五龙消癥丸可显著抑制BGC-823细胞的增殖、黏附、侵袭和迁移能力,显著抑制BGC-823细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,显著抑制p-PI3K、p-Akt、磷酸化IkB激酶-α(p-IKK-α)、p-NF-κB p65Ser276蛋白及PI3K、Akt、IKKα、NF-κB mRNA的表达,并且呈现一定的时效和量效关系.结论 五龙消癥丸通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白及mRNA表达,从而达到抑制BGC-823细胞的增殖、迁移、侵袭作用.
关键词： 五龙消癥丸 BGC-823细胞 侵袭 迁移 PI3K/Akt/NF-κB信号通路 -
清肺通络膏对呼吸道合胞病毒感染大鼠肺组织PI3K-AKT-NFκB信号通路的影响
目的 观察清肺通络膏对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠肺组织PI3K、AKT1/2、NF-κBp65蛋白表达的影响,探讨清肺通络膏对PI3K/AKT/NF-κB信号通路的调控机制.方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组各10只,模型组、治疗组均给予RSV滴鼻接种3d,治疗组于接毒第1天予清肺通络膏背部贴敷,连续7d.于造模第7天后取大鼠肺组织,运用免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中PI3K、AKT1/2、NF-κB p65蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织PI3K、AKT1/2、NF-κB p65蛋白表达增多,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组大鼠肺组织PI3K、AKT1/2、NF-κB p65蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RSV感染大鼠时激活了PI3K/AKT/NF-κB信号通路,清肺通络膏能够抑制PI3K、AKT1/2、NF-κB p65蛋白的表达,可能是清肺通络膏干预RSV肺炎的机制之一.
关键词： 肺炎 呼吸道合胞病毒 清肺通络膏 PI3K/Akt/NF-κB信号通路 大鼠 -
CXCL8 siRNA通过PI3K/Akt/NF-κB信号途径抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭
目的:探讨CXC趋化因子配体8[chemokine (C-X-C motif) ligand 8,CXCL8]基因沉默对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响,以及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号转导途径在其中所起的作用.方法:应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测CXCL8在4种结肠癌细胞株HT-29、WiDr、CaCo-2和CoL0320中的表达水平.应用LipofectAMINE 2000脂质体转染法将靶向CXCL8基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转染至4种结肠癌细胞,然后采用蛋白质印迹法检测CXCL8蛋白的表达.WST-1法和Transwell小室实验分别检测CXCL8基因沉默对4种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响.蛋白质印迹法检测CXCL8基因沉默后HT-29细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路主要蛋白的磷酸化水平的变化.结果:CXCL8在4种结肠癌细胞株中均高表达,而CXCL8 siRNA转染后CXCL8蛋白表达均被明显抑制(P值均＜0.01).转染CXCL8 siRNA后结肠癌细胞的增殖和侵袭能力均明显降低(P值均＜0.01).HT-29细胞中CXCL8基因沉默可明显抑制CXCL8诱导的PI3K、Akt和NF-κB蛋白磷酸化(P值均＜ 0.01).结论:CXCL8基因沉默能够显著抑制结肠癌细胞的增殖和侵袭,推测其机制与下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白的活化相关.
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齿孔酸对大鼠佐剂型关节炎的影响
目的:研究齿孔酸对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,从)大鼠的治疗作用及可能的作用机制.方法:从硫磺菌中提取分离齿孔酸;大鼠右后足跖注射弗氏佐剂造模,齿孔酸(16、32mg/kg))和齐墩果酸(50mg/kg)灌胃给药,足容积法测量致炎侧足肿胀、进行关节评分;光学显微镜观察关节滑膜病理变化;ELISA法检测大鼠关节组织中的白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blotting检测关节组织中磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)和核转录因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白表达水平.结果:大鼠致炎后14天关节肿胀度达峰值,可见模型组关节滑膜组织炎症反应,如滑膜组织增生、炎细胞浸润、关节组织中IL-6、TNF-α水平明显上升,关节组织中p-PI3K、p-Akt和NF-κBp65蛋白表达水平明显升高;用齿孔酸(16、32mg/kg))和齐墩果酸(50mg/kg)治疗后,能显著抑制从大鼠足爪肿胀、降低多发性关节评分及改善关节滑膜组织病理变化,降低了滑膜组织病理评分,降低从大鼠关节组织中IL-6和TNF-α水平及关节组织中p-PI3K、p～Akt和NF-κBp65蛋白表达水平.结论:齿孔酸具有显著的抗炎作用,其抗炎作用可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活来实现.
关键词： 齿孔酸 齐墩果酸 佐剂性关节炎 抗炎 PI3K/Akt/NF-κB信号通路
